㈠ 重链和轻链的名词解释
重链(heavy chain,H链)大小约为轻链的2倍,含450~550个氨基酸残基,分子量约为55或75kD。每条H链含有4~5个链内二硫键所组成的环肽。不同的H链由于氨基酸组成的排列顺序、二硫键的数目和位置、含的种类和数量不同,其抗原性也不相同。
根据H链抗原性的差异可将其分为5类:μ链、γ链、α链、δ链和ε链,不同H链与L链(κ或λ链)组成完整免疫球蛋白的分子分别称之为IgM、IgG、IgA、IgD和IgE。γ、α和δ链上含有4个肽,μ和ε链含有5个环肽。
轻链(light chain,L)大约由214个氨基酸残基组成,通常不含碳水化合物,分子量约为24kD。每条轻链含有两个由链内二硫键内二硫所组成的环肽。
L链共有两型:kappa(κ)与lambda(λ),同一个天然免疫球蛋白分子上L链的型总是相同的。正常人血清中的κ:λ约为2:1。
(1)igg超滤多少kd扩展阅读:
重链相对于已知五种Ig来说,其分布对应关系如下:IgG(γ),IgA(α),IgD(δ),IgM(μ)和IgE(ε)。其中前三类Ig的H链内有三个恒定区,即CH1、CH2和CH3组成。后两类(IgM和IgE)的H链中有一个VH区和四个恒定区,即CH1至CH4。
H链上可变区上有抗原结合点。恒定区既是Ig分子的骨架,又是激活免疫反应的部位之一。由于某种原因,如重链合成过程异常,或轻链合成有缺陷时,血清中会出现重链,这就是重链病。已发现的有α,γ和μ型重链病。
轻链可通过肾小球滤过膜滤出,若其量超过近曲小管所能吸收的极限,则从尿中排出,在尿中排出率多于白蛋白。
肾小管对本周蛋白具有重吸收及异化作用,通过肾排泄时,可抑制肾小管对其他蛋白成分的重吸收,并可损害近曲、远曲小管,因而导致肾功能障碍及形成蛋白尿,同时有白蛋白及其他蛋白成分排出。本周蛋白在加热至40-60℃时可发生凝固,温度升至90-100℃时可再溶解。
㈡ IgG IgM 在SDS-PAGE电泳中分子量分别是多少
SDS-PAGE电泳只会看到两条带,一条是25KD,一条是50KD。IgM也一样。
普通的PAGE电泳,IgG分子量应该是在150KD到160KD左右。而IgM为五聚体,大概在800KD左右。不过PAGE没法测分子量的。
㈢ 免疫球蛋白生物学功能
免疫球蛋白(英文:immunoglobulin,ig)
Ig是体液免疫应答中发挥免疫功能最主要的免疫分子,免疫球蛋白所具有的功能是由其分子中不同功能区的特点所决定的。
(一)特异性结合抗原
Ig最显著的生物学特点是能够特异性地与相应的抗原结合,如细菌、病毒、寄生虫、某些药物或侵入机体的其他异物。Ig的这种特异性结合抗原特性是由其V区(尤其是V区中的高变区)的空间构成所决定的。Ig的抗原结合点由L链和H链超变区组成,与相应抗原上的表位互补,借助静电力、氢键以及范德华力等次级键相结合,这种结合是可逆的,并受到pH、温度和电解浓度的影响。在某些情况下,由于不同抗原分子上有相同的抗原决定簇,或有相似的抗原决定簇,一种抗体可与两种以上的抗原发生反应,此称为交叉反应(cross reaction)。
抗体分子可有单体、双体和五聚体,因此结合抗原决定簇的数目(结合价)也不相同。Fab段为单价,不能产生凝集反应和沉淀反应。F(ab')2和单体Ig(如IgG、IgD、IgE)为双价。双体分泌型IgA有4价。五聚体IgM理论上应为10价,但实际上由于立体构型的空间位阻,一般只有5个结合点可结合抗原。B细胞表面Ig(SmIg)是特异性识别抗原的受体,成熟B细胞主要表达SmIgM和SmIgD,同一B细胞克隆表达不同类SmIg其识别抗原的特异性是相同的。
(二)活化补体
1.IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径活化补体。当抗体与相应抗原结合后,IgG的CH2和IgM的CH3暴露出结合C lq的补体结合点,开始活化补体。由于Clq6个亚单位中一般需要2个C端的球与补体结合点结合后才能依次活化Clr和Cls,因此IgG活化补体需要一定的浓度,以保证两个相邻的IgG单体同时与1个Clq分子的两个亚单位结合。当Clq一个C端球部结合IgG时亲和力则很低,Kd为10-4M,当Clq两个或两个以上球部结合两个或多个IgG分时,亲合力增高Kd为10-8M。IgG与Clq结合点位于CH2功能区中最后一个β折叠股318~322位氨基酸残基(Glu-x-Lys-x-Lys)。IgM倍以上。人类天然的抗A和抗B血型抗体为IgM,血型不符合引韦的输血反应发生快而且严重。
2.凝聚的IgA、IgG4和IgE等可通过替代途径活化补体。
(三)结合Fc受体
不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体,分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后,由于构型的改变,其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。IgE抗体由于其Fc段结构特点,可在游离情况下与有相应受体的细胞(如嗜碱性粒细胞、肥大细胞)结合,称为亲细胞抗体(cytophilic antibody)。抗体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用。1.介导I型变态反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒,释放组胺,合成由细胞FcεRI结合。当相同的变应原再次进入机体时,可与已固定在细胞膜上的IgE结合,刺激细胞脱颗粒,释放组受,合成由细胞脂质来源的介质如白三烯、前列腺素、血小板活化因子等,引起Ⅰ型变态反应。
2.调理吞噬作用 调理作用(opsonization)是指抗体、补体C3b、C4b等调理素(opsonin)促进吞噬细菌等颗粒性抗原。由于补体对热不稳定,因此又称为热不稳定调理素(heat-labile opsonin)。抗体又称热稳定调理素(heat-stable opsonin)。补体与抗体同时发挥调理吞噬作用,称为联合调理作用。中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞具有高亲和力或低亲和力的FcγRI(CD64)和FcγRⅡ(CD32),IgG尤其是人IgG1和IgG3亚类对于调理吞噬起主要作用。嗜酸性粒细胞具有亲和力FcγRⅡ,IgE与相应抗原结合后可促进嗜酸性粒细胞的吞噬作用。抗体的调理机制一般认为是:①抗体在抗原颗粒和吞噬细胞之间“搭桥”,从而加强了吞噬细胞的吞噬作用;②抗体与相应颗粒性抗原结合后,改变抗原表面电荷,降低吞噬细胞与抗原之间的静电斥力;③抗体可中和某些细菌表面的抗吞噬物质如肺炎双球菌的荚膜,使吞噬细胞易于吞噬;④吞噬细胞FcR结合抗原抗体复合物,吞噬细胞可被活化。
3.发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 当IgG抗体与带有相应抗原的靶细胞结合后,可与有FcγR的中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞等效应细胞结合,发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibodydependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)。目前已知。NK细胞发挥ADCC效应主要是通过其膜表面低亲和力FcγRⅢ(CD16)所介导的,IgG不仅起到连接靶细胞和效应细胞的作用,同时还刺激NK细胞合成和分泌肿瘤坏死因子和γ干扰素等细胞因子,并释放颗粒,溶解靶细胞。嗜酸性粒细胞发挥ADCC作用是通过其FcεRⅡ和FcαR介导的,嗜酸性粒细胞可脱颗粒释放碱性蛋白等,在杀伤寄生虫如蠕虫中发挥重要作用。
抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)
此外,人IgGFc段能非特异地与葡萄菌A蛋白(staphylococcus proteinA,SPA)结合,应用SPA可纯化IgG等抗体,或代替第二抗体用于标记技术。
(四)通过胎盘
在人类,IgG是唯一可通过胎盘从母体转移给胎儿的Ig。IgG能选择性地与胎盘母体一侧的滋养层细胞结合,转移到滋养层细胞的吞饮泡内,并主动外排到胎儿血循环中。IgG的这种功能与IgGFc片段结构有关,如切除Fc段后所剩余的Fab并不能通过胎盘。IgG通过胎盘的作用是一种重要的自然被动免疫,对于新生儿抗感染有重要作用。
㈣ Ig的生物学功能包括
Ig是体液免疫应答中发挥免疫功能最主要的免疫分子,免疫球蛋白所具有的功能是由其分子中不同功能区的特点所决定的。
(一)特异性结合抗原
Ig最显著的生物学特点是能够特异性地与相应的抗原结合,如细菌、病毒、寄生虫、某些药物或侵入机体的其他异物。Ig的这种特异性结合抗原特性是由其V区(尤其是V区中的高变区)的空间构成所决定的。Ig的抗原结合点由L链和H链超变区组成,与相应抗原上的表位互补,借助静电力、氢键以及范德华力等次级键相结合,这种结合是可逆的,并受到pH、温度和电解浓度的影响。在某些情况下,由于不同抗原分子上有相同的抗原决定簇,或有相似的抗原决定簇,一种抗体可与两种以上的抗原发生反应,此称为交叉反应(cross reaction)。
抗体分子可有单体、双体和五聚体,因此结合抗原决定簇的数目(结合价)也不相同。Fab段为单价,不能产生凝集反应和沉淀反应。F(ab')2和单体Ig(如IgG、IgD、IgE)为双价。双体分泌型IgA有4价。五聚体IgM理论上应为10价,但实际上由于立体构型的空间位阻,一般只有5个结合点可结合抗原。B细胞表面Ig(SmIg)是特异性识别抗原的受体,成熟B细胞主要表达SmIgM和SmIgD,同一B细胞克隆表达不同类SmIg其识别抗原的特异性是相同的。
(二)活化补体
1.IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径活化补体。当抗体与相应抗原结合后,IgG的CH2和IgM的CH3暴露出结合C lq的补体结合点,开始活化补体。由于Clq6个亚单位中一般需要2个C端的球与补体结合点结合后才能依次活化Clr和Cls,因此IgG活化补体需要一定的浓度,以保证两个相邻的IgG单体同时与1个Clq分子的两个亚单位结合。当Clq一个C端球部结合IgG时亲和力则很低,Kd为10-4M,当Clq两个或两个以上球部结合两个或多个IgG分时,亲合力增高Kd为10-8M。IgG与Clq结合点位于CH2功能区中最后一个β折叠股318~322位氨基酸残基(Glu-x-Lys-x-Lys)。IgM倍以上。人类天然的抗A和抗B血型抗体为IgM,血型不符合引韦的输血反应发生快而且严重。
2.凝聚的IgA、IgG4和IgE等可通过替代途径活化补体。
(三)结合Fc受体
不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体,分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后,由于构型的改变,其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。IgE抗体由于其Fc段结构特点,可在游离情况下与有相应受体的细胞(如嗜碱性粒细胞、肥大细胞)结合,称为亲细胞抗体(cytophilic antibody)。抗体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用。1.介导I型变态反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒,释放组胺,合成由细胞FcεRI结合。当相同的变应原再次进入机体时,可与已固定在细胞膜上的IgE结合,刺激细胞脱颗粒,释放组受,合成由细胞脂质来源的介质如白三烯、前列腺素、血小板活化因子等,引起Ⅰ型变态反应。
2.调理吞噬作用 调理作用(opsonization)是指抗体、补体C3b、C4b等调理素(opsonin)促进吞噬细菌等颗粒性抗原。由于补体对热不稳定,因此又称为热不稳定调理素(heat-labile opsonin)。抗体又称热稳定调理素(heat-stable opsonin)。补体与抗体同时发挥调理吞噬作用,称为联合调理作用。中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞具有高亲和力或低亲和力的FcγRI(CD64)和FcγRⅡ(CD32),IgG尤其是人IgG1和IgG3亚类对于调理吞噬起主要作用。嗜酸性粒细胞具有亲和力FcγRⅡ,IgE与相应抗原结合后可促进嗜酸性粒细胞的吞噬作用。抗体的调理机制一般认为是:①抗体在抗原颗粒和吞噬细胞之间“搭桥”,从而加强了吞噬细胞的吞噬作用;②抗体与相应颗粒性抗原结合后,改变抗原表面电荷,降低吞噬细胞与抗原之间的静电斥力;③抗体可中和某些细菌表面的抗吞噬物质如肺炎双球菌的荚膜,使吞噬细胞易于吞噬;④吞噬细胞FcR结合抗原抗体复合物,吞噬细胞可被活化。 抗体的调理吞噬作用
3.发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 当IgG抗体与带有相应抗原的靶细胞结合后,可与有FcγR的中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞等效应细胞结合,发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibodydependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)。目前已知。NK细胞发挥ADCC效应主要是通过其膜表面低亲和力FcγRⅢ(CD16)所介导的,IgG不仅起到连接靶细胞和效应细胞的作用,同时还刺激NK细胞合成和分泌肿瘤坏死因子和γ干扰素等细胞因子,并释放颗粒,溶解靶细胞。嗜酸性粒细胞发挥ADCC作用是通过其FcεRⅡ和FcαR介导的,嗜酸性粒细胞可脱颗粒释放碱性蛋白等,在杀伤寄生虫如蠕虫中发挥重要作用。 抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)
此外,人IgGFc段能非特异地与葡萄菌A蛋白(staphylococcus proteinA,SPA)结合,应用SPA可纯化IgG等抗体,或代替第二抗体用
㈤ 请问超滤管可以纯化胃蛋白酶消化后的IgG吗。需要F(ab')2片段。
超滤管不建议用复于纯化,适制用于去盐或浓缩,尤其是对于你的这个实验,问题有3点:
1、胃蛋白酶35KD左右,Fab2有90KD,两者的分子量相差不到3倍,你很难选到合适孔径的超滤管能较好分离两者,用分子筛还是可以的;
2、超滤管总体蛋白回收率比纯化技术低;
3、每次超滤,都会有上层滤液残留,无法高效率去除这部分杂蛋白。
以上意见供您参考,祝愉快!
㈥ 小鼠IgG的分子量是多少
小鼠抗人IGG的本质是小鼠IGG,分子量为150KD左右.如果你用SDS电泳检测的话,可能是25KD和50KD两条带.
或者你其实是想问人IGG?结果也是一样的,没有太大差别.分子量为150KD左右.
㈦ 大鼠的 iGg 分子量大小怎么计算呢 重链和轻链应该分别是多少求高人指点.
知道氨基酸序列不,知道序列就知道大小啦。
不知道就是潜规则,一般都是160kd左右,重链在55kd左右,轻链在25kd左右。
㈧ IgG IgM 在SDS-PAGE电泳中分子量分别是多少
IgG, IgM 重链和轻链间是由二硫键连接的,二硫键可以被贝特巯基乙醇还原。如果你跑的电泳buffer中加了巯基乙醇,那么重链和轻链会分开,会跑出两条(25KD,50KD)或三条带(25KD,50KD,还有没有完全还原的完整的Ig,大约150KD)。如果跑的是非还原电泳,大小很大,150KD。IgM经常以五聚体形式存在,就更大了,所以建议以分离胶浓度较小的跑。
㈨ 引起超敏反应的Ig的功能与特性
一)IgG:是四链单体, 分子量约150kD, 有4个亚类:是再次应答产生的主要免疫球蛋白,在血清中含量最高,约占血清总Ig的75%; 半衰期为 23天; 出生后第3个月开始合成, 3-5岁接近成人水平。1. 大多数抗菌、抗病毒、抗毒素、抗体都属于IgG, 在免疫防护中起主力作用。2.活化补体: (IgG1-3)经典途径/IgG4旁路途径-介导溶菌、杀菌和细胞毒作用3.通过胎盘:IgG可通过胎盘由母体转移胎儿, 执行自然被动免疫。IgG是胎儿血清中含量最高的免疫球蛋白,是胎儿和新生儿抗感染的主要抗体。4.结合细胞,介导调理作用和ADCC 效应。5.某些自身抗体和引起II、III型超敏反应的抗体,大都属于IgG。引起自身免疫病, 如抗甲状腺球蛋白抗体(桥本氏甲状腺炎)、抗核抗体(系统性全身性红斑狼疮)。6.人IgG1、IgG和IgG的Fc段能与金黄色葡萄球菌A蛋白staphylociccal protein A SPA结合。这一特点可应用于(a)纯化IgG;(b )应用于免疫诊断-协同凝集试验。(二)IgM:是五聚体,分子量约为900kD; 亦称巨球蛋白, 无铰链区;是初次应答的主要免疫球蛋白,不能通过血管壁,主要存在血液中,约占血清总Ig的10%,半衰期短约5天。是最早出现的Ig, 在胚胎晚期胎儿就有能力合成IgM, 在体液免疫应答中IgM最先产生。
1.一些抗菌抗体、 抗病毒、抗毒素、抗体都属于IgM;在免疫防护中起先锋免疫作用。2.活化补体, 比IgG强大, IgM-经典途径-介导溶菌细胞毒作用。3.不能通过胎盘, 若脐血中检出针对某一种微生物的IgM, 提示宫内有感染。4.天然血型抗体属于IgM, 血型不符的输血, 易发生快且严重的输血反应。5.在B细胞表面起受体作用-mIgM6.部分引起II型、III型超敏反应的抗体属于IgM,如:类风湿因子-类风湿关节炎。 (三)IgA: 有血清型和分泌型两种。血清型IgA:单体, 占血清Ig的10%; 出生后4-6月开始合成, 半衰期约5-6天。可介导调理作用和ADCC效应。分泌型IgA:二聚体,主要分布于初乳、唾液、泪液、胃肠液、支气管分泌液等外分泌液中, 故在免疫防护中局部免疫作用。1.粘膜局部抗菌、抗病毒、抗毒素作用。2.阻止病原微生物, 吸附于粘膜感染细胞。3.通过初乳传递给婴儿, 执行自然被动免疫4.抗肠道寄生虫感染。(四)IgD:为单体,分子量170kD,血清含量少(1%),免疫功能不祥; B细胞表面起受体作用-mIgD
(五)IgE:为单体,分子量190kD,血清含量极少(0.002%),无铰链区, 为亲细胞抗体, 易吸附了肥大细胞和嗜碱性粒细胞, 介导I型敏反应。