离子交换疏水层析

『壹』 按层析原理分类除了凝胶层析之外还有哪几类层析

免疫亲和层析
吸附物质与特异性配基配对到色谱基质上，且与配基间具有可逆的相互作用。
离子交换层析
吸附物质通过表面净电荷的差异，分别与带正负电荷的层析色谱结合。
疏水相互作用层析
根据吸附物质表面疏水性的不同，利用与疏水层析介质疏表面可逆的相互作用来实现分离。
凝胶过滤层析
根据分子通过凝胶填料大小不同对其进行分离。
反向层析
类似于疏水相互作用层析

『贰』 离子交换层析速问速答

离子交换层析是一种基于样品的带电性质进行分离的技术，主要用于蛋白纯化。以下为离子交换层析的问答，旨在深入理解该技术。

01、离子交换层析分为哪几种？

离子交换层析根据配基的不同，主要分为阳离子交换层析和阴离子交换层析。阳离子交换柱可以吸附带正电荷的蛋白，而阴离子交换柱则吸附带负电荷的蛋白。

02、如何选择阳离子还是阴离子？

蛋白是两性分子，具有等电点（PI）。当缓冲液的PH值低于蛋白的等电点（PI），蛋白带正电荷时，应选择阳离子交换柱；反之，当PH值高于等电点（PI），蛋白带负电荷时，选择阴离子交换柱。

03、强和弱离子交换剂的区别？

强离子交换剂在PH范围内载量恒定，弱离子交换剂载量随PH变化。优先使用强离子交换剂，若选择性不足，尝试使用弱离子交换剂。

04、如何选择缓冲液的PH值？

建议使用PH 6-8的中性缓冲液。通常，选择与等电点相差1个PH值的缓冲液作为初始尝试。为了达到最佳分离效果，通常需要进行PH条件的摸索。

05、若不知道蛋白的等电点？

大多数蛋白的等电点低于PH 7，可以使用Q柱进行尝试，缓冲液使用PH 7。也可以选择离子交换试剂盒进行摸索。

06、缓冲液的配置？

请参照说明书，注意在添加氯化钠后调整PH。

07、初次实验的标准条件？

开始使用缓冲液A：20-50 mM，洗脱缓冲液B：20-50 mM + 1M NaCl。

08、样品未结合？

可能原因包括：样品盐浓度太高、PH优化不足、缓冲液含有带电物质（如去垢剂）、柱效下降。解决方法包括CIP清洗。

09、结合后无法洗下？

尝试增加洗脱液盐浓度、评估蛋白稳定性、优化PH值。

10、纯度不足？

解决方法包括：采用线性梯度洗脱、优化缓冲液条件、使用更高分辨率产品、增加分子筛、疏水等多步纯化。

『叁』 离子交换层析与疏水层析有何区别

离子交换层析是利用蛋白质在不同PH带不同种电荷的方法，利用离子交换的方法分离蛋白的。离子交换内的介质一般是树脂，阳离子交换型的，使用前树脂先用碱处理成钠型，将氨基酸混合液（pH=2-3)上柱，pH=2-3时，氨基酸主要以阳离子形式存在，与树脂上的钠离子发生交换而被“挂”在树脂上，再用洗脱剂洗脱。不同的氨基酸（带的电荷不同）与树脂的亲和力不同，要将其分离洗脱下来，需要降低它们之间的亲和力，方法是逐步提高洗脱剂的pH和盐浓度，这样各种氨基酸将以不同的速度被洗脱下来，反之亦然。不同反荷离子与树脂亲和力是不同的，其强弱关系为阳性竞争离子：Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+阴性竞争离子：I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F-如果某种离子溶液洗脱效果不好，可用另一种亲和力强的离子代替之，等电点＞7选择阳离子交换树脂，等电点＜7选择阴离子交换树脂。

『肆』 疏水层析的经历

一般而言来，离子强度（源盐浓度）越高，物质所形成的疏水键越强。影响疏水作用的因素包括：盐浓度，温度，pH，表面活化剂和有机溶剂。疏水层析的应用与离子交换层析的应用刚好互补，因此，可以用于分离离子交换层析很难或不能分离的物质。
疏水层析其原理如下：蛋白质表面一般有疏水与亲水集团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。在洗脱时，将盐浓度逐渐降低，因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化，可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质。

『伍』 疏水层析的相关知识

在
丁香园
生物网络
（
http://dxy.ac.cn
）
总结
：
离子交换
层析：
http://dxy.ac.cn/wiki/viewthread.php?tid=458&
highlight
=%C0%EB%D7%D3%BD%BB%BB%BB
离子交换层析
离子交换层析是利用
离子交换剂
上的
可交换离子
与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同，经过交换平衡达到分离的目的的一种柱
层析法
。该法可以同时分析多种
离子化合物
，具有灵敏度高，重复性、选择性好，分离速度快等优点，是当前最常用的层析法之一，常用于多种离子型
生物分子
的分离，包括蛋白质、氨基酸、多肽及核酸等。
离子交换层析对物质的分离通常是在一根充填有离子交换剂的玻璃交换剂的
玻璃管
中进行的。离子交换剂为人工合成的多
聚物
，其上带有许多可电离基团，根据这些基团所带电荷的不同，可分为
阴离子交换剂
和
阳离子交换剂
。含有预被分离的离子的溶液通过
离子交换柱
时，各种离子即与离子交换剂上的
荷电
部位竞争结合。任何离子通过柱时的移动速率取决于与离子交换剂的亲和力、电离程度和溶液中各种竞争性离子的性质和浓度。
离子交换剂是由基质、荷电基团和
反离子
构成，在水中呈不溶解状态，能释放出反离子。同时它与溶液中的其他离子或离子化合物相互结合，结合后不改变本身和被结合离子或离子化合物的理化性质。
离子交换层剂与水溶液中离子或离子化合物所进行的
离子交换反应
是可逆的。假定以RA代表阳离子交换剂，在溶液中
解离
出来的阳离子A＋与溶液中的阳离子B＋可发生可逆的交换反应：RA+B+↔RB+A+；该反应能以极快的速度达到平衡，平衡的移动遵循
质量作用定律
。
溶液中的离子与交换剂上的离子进行交换，一般来说，。。。。
疏水作用
层析，建议看看这个，或者搜索
http://dxy.ac.cn/wiki/viewthread.php?tid=461&highlight=%CA%E8%CB%AE
参考资料：http://dxy.ac.cn/wiki/viewthread.php?tid=183&highlight=%C0%EB%D7%D3%BD%BB%BB%BB