① 求高手指點,本人現在在做Western-Blot.蛋白質濃度太低了!想濃縮!請問加了SDS的蛋白質怎麼濃縮
可以冷凍抽,也可以直接正空抽,也可以直接在吹風台上吹。冷凍抽干後樣品還要重新煮一遍。
WB沒有條帶?
濃縮樣品應該效果不會很好吧,應該適當增加一抗濃度,或者延長曝光時間。
提醒下試驗最好有正負對照。
② 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦
可能是抄這個蛋白的水溶性較差,也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了,超濾時保持低溫,體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高,選擇更合適的緩沖液,添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。
③ 做WB蛋白濃度低怎麼辦
提高SDS-PAGE的上樣量
將蛋白樣品超濾濃縮幾倍提高濃度
WB壓片時間稍微延長一點
④ 為什麼提取細胞蛋白濃度總是很低
細胞總蛋白提取量少原因很多
比如可能是該細胞狀態不好,造成表達量偏低,提取後蛋白總量就會少
蛋白與蛋白間性質差異大,因為所需的細胞提取液不一樣,會造成一些蛋白不能溶解於提取液中而和細胞碎片一起沉澱掉
不同的提取方法不一樣,可能造成部分蛋白沉澱,影響到提取總量
蛋白質溶液應該是澄清的,可以無色,可以有色,如果溶液不澄清,可能是離心力不夠,混入了細胞碎片或者組織碎片。蛋白溶液澄清與否和濃度沒有直接聯系
⑤ 超濾濃縮蛋白溶液時其濃度該從高到低還是有低到高對超濾膜好呢
從低到高,當然首先3瓶中蛋白分子量應該差不多,否則先超濾小分子的,主要是減少超濾膜的堵塞程度
⑥ 超濾膜分離實驗中,什麼是濃度極差有什麼危害有哪些消除方法
濃差極化,從理論上說,超濾膜是純物理的過濾方式,它的分離後的效果應該是,版無相變,無權質變
如果濃差極化產生,那麼超濾膜的分離效果就會有 質變的可能,其主要危害,就是讓超濾膜分離的效果 不穩定了。
消除濃差極化,一般是2步驟,已經出現了。那麼就清洗,用化學葯劑清洗膜
最主要的是預防,主要是體現在,超濾膜之前工藝上,和超濾系統設計的。
反洗時間,反洗流量,反洗葯劑,反洗葯劑濃度,加葯的時間,這些設計可以影響,超濾膜濃差極化的形成。也許有錯字,,不我也不檢查了。希望對您有幫助
超濾膜技術 問題,解決者
膜術師
⑦ 24h蛋白濃度低是什麼原因
如果這個項目低的話,往往低的不多,否則各個項目間都有聯系,不會只有這一個項目超出范圍,引起這些原因是正常的,有的是有缺鐵,有的缺乏VB12或者葉酸,其他項目正常時,沒有必要進一步檢查其它。
⑧ 蛋白純化後濃度太低怎麼辦
蛋白純化後濃度太低怎麼辦
提高SDS-PAGE的上樣量 將蛋白樣品超濾濃縮幾倍提高濃度 WB壓片時間稍微延長一點
⑨ 蛋白純化後濃度多少算正常,怎麼定義檢測結果濃度偏高或偏低
蛋白純化後濃度太低怎麼辦提高SDS-PAGE的上樣量 將蛋白樣品超濾濃縮幾倍提高濃度 WB壓片時間稍微延長一點
⑩ 使用分子篩純化蛋白後發現收率較低,是什麼原因
1.蛋白可能被蛋白酶降解。可以在樣品和緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,阻止蛋白酶降解作用
2.樣品制備過程中可能吸附在濾器上,更換吸附性更低的濾器材質
3.樣品沉澱,可能由於鹽或不合適的緩沖液條件引起
4.疏水蛋白,可以酌情採用去污劑、降低極性的試劑和去污劑
5.非特異性吸附,可以通過降低鹽離子濃度最小化疏水相互作用,增加pH,加入適量去污劑或有機溶劑