1. 一篇看懂液相色譜柱的分類、選擇及維護!
液相色譜柱的分類主要基於色譜固定相基質,選擇需依據分析物性質,維護包括平衡、再生及日常保養。
一、液相色譜柱的分類
硅膠基質:
聚合物基質:如聚苯乙烯二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,適用於PH值范圍寬及大分子物質的分離。
其他無機填料:如石墨化碳、氧化鋁等,具有特殊性質,適用於特定分析需求。
二、色譜柱的選擇
三、色譜柱的維護
平衡:使用甲醇或乙腈沖洗色譜柱,確保分析樣品流動相與沖洗溶劑互溶,以保持色譜柱的性能穩定。
再生:長期使用後柱效下降,可進行再生處理,如使用特定溶劑沖洗以恢復柱效。
日常保養:使用預柱保護分析柱,避免流動相組成及極性的劇烈變化;使用前對流動相進行脫氣和過濾處理,以減少雜質對色譜柱的污染。
2. 一篇看懂液相色譜柱的分類、選擇及維護!
液相色譜柱的分類及選擇與維護是進行高效液相色譜分析的關鍵。
一、液相色譜柱的分類
按照色譜固定相基質,液相色譜柱可以分為以下幾類:
1. 硅膠基質
1.1 反相色譜柱:使用以硅膠為基礎,表面鍵合有弱極性官能團的鍵合相。流動相通常為水、緩沖液與甲醇、已腈等混合物。樣品流出順序為極性強的先被沖出,極性弱的後被沖出。
1.2 正相色譜:使用硅膠作為固定相,其他具有極性官能團的鍵合相填料。流動相極性相對較低。分離順序依據樣品中各組分極性大小。
1.3 離子交換色譜柱:使用磺化交聯強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱,如強陰離子色譜柱(SAX)和強陽離子交換色譜柱(SCX)。
2. 聚合物基質
聚合物調料如聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,優點是在PH值為1~14均可使用,對大分子物質分離有效。
3. 其他無機填料
如石墨化碳、氧化鋁等,具有特殊性質,適用於特定用途。
二、色譜柱的選擇
液相色譜柱的選擇主要依據分析物的性質,如硅膠基質填料用於小分子量物質,聚合物填料用於大分子物質。
三、色譜柱的維護
1. 色譜柱的平衡:使用甲醇或乙腈沖洗色譜柱,確保分析樣品流動相與沖洗溶劑互溶。
2. 色譜柱的再生:長期使用後柱效下降,可進行再生處理。
3. 色譜柱的維護:使用預柱保護分析柱,避免流動相組成及極性的劇烈變化,使用前經脫氣和過濾處理。
3. 色譜柱使用和維護注意事項
正確使用和維護色譜柱至關重要,稍有不慎可能影響其性能和壽命。以下是幾個關鍵注意事項:
1. 避免極端壓力和溫度變化,以及機械震動。溫度驟變或柱體跌落可能導致填充物受損;柱壓的快速升降也會沖擊填料。調節流速需平穩,進樣時閥門轉動不可過緩。
2. 在調整溶劑組成時,尤其在反相色譜中,應逐漸進行,不可直接從有機溶劑變為全水,反之亦然。
3. 除非生產商明確允許,否則一般不推薦反沖色譜柱,因為這會快速降低柱效。若要反沖,必須確保柱頭雜質已清除。
4. 選擇適當的流動相(注意pH值),以免固定相受損。有時可在進樣器前加預柱,以減少硅膠基質溶解分析柱的風險。
5. 避免直接注入復雜樣品,特別是生物樣品,可能需要預處理或加保護柱。保護柱應定期更換,填充與分析柱相似的固定相。
6. 定期用強溶劑清洗色譜柱,清洗時需逐步更換溶劑,每種溶液體積為柱體積的20倍左右。清洗順序和溶劑可參考文章提供的例子。
7. 存儲色譜柱時,要確保柱內充滿乙腈或甲醇,接頭緊固,防止溶劑揮發。避免在柱內留置緩沖液過夜。
8. 壓力升高可能是濾片堵塞或大分子污染,柱效降低可能意味著柱頭塌陷。處理方法包括取出部分填料,然後用相同溶劑填充並壓平。
9. 保護柱可以延長柱子壽命,盡管會略降柱效。硅膠柱在pH2~9范圍內使用,柱頂可能吸附物質,定期檢查並處理。
10. 工作後使用強洗脫液沖洗,如ODS柱用甲醇。使用鹽緩沖液後需用無鹽流動相沖洗,避免鹵族元素對管道的腐蝕。長期不使用,建議每隔幾天開機沖洗。
色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。