A. 下列關於DNA粗提取與鑒定的說法正確的是()A.析出DNA時要緩慢地加蒸餾水使氯化鈉濃度降低,然後過
A、析出DNA時要緩慢地加蒸餾水使氯化鈉濃度降低,待粘稠物不再增加為止,此粘版稠物即為DNA,因權此過濾後保留粘稠物,A錯誤;
B、在探究洗滌劑對植物細胞DNA提取的影響實驗中,自變數是否加洗滌劑,食鹽的用量屬於無關變數,B錯誤;
C、鑒定DNA用二苯胺時需要沸水浴加熱才能產生藍色,C錯誤;
D、由於蛋白質在高溫條件下易變性,而DNA對溫度的耐受性較強,因此將含有DNA的濾液放在60~75℃的恆溫水浴箱中保溫後過濾,能去除蛋白質雜質,D正確.
故選:D.
B. DNA的粗提取和鑒定為什麼要四次過濾第四次過濾有什麼用
1、實驗中兩次使用蒸餾水。
第一次百,取血細胞液時加蒸餾水,目的是讓血細版胞吸水權漲破
第二次是在析出含DNA的粘稠物後,目的是稀釋NACL溶液,使DNA逐漸析出
2、加3次NACL,
第一次,在溶解核內DNA時,加入NACL後充分攪拌,加速染色質中度DNA與蛋白質的分離,使DNA充分游離並融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解時,家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鑒定中,目的是溶解DNA
3、過知濾3次
第一次在道提取血細胞核物質時進行過濾專,取得的濾液中含有染色質,而濾出的是細胞膜、核屬膜和細胞器等的破碎結構
第二次在濾去含有DNA粘稠物只能夠,濾液中含有仍然溶解在NACL中的細胞中的一些成分,如蛋白質等
第三次在過濾含DNA的2mol/L的NACL溶液時,過濾後的濾液中含有DNA
(三次過濾就行了,四次過濾是為了提取的更純而已,要求不高時,可以省略)
C. 在DNA的粗提取實驗中,將核內DNA溶解於2mol/L的NaCl溶液中後,緩緩加入蒸餾水直到絲狀物不再增加,此時如
在2mol/L的NaCl溶液中DNA溶解抄,緩緩加襲入蒸餾水使得NaCl溶液濃度降低,則DNA的溶解度降低不斷析出;DNA絲狀物不再增加時,此時NaCl溶液的濃度為0.14mol/L;如繼續加蒸餾水,DNA的溶解度增加,DNA絲狀物量減少.
故選:C.
D. 高中生物:為什麼錯 正確的方法是什麼在「析出DNA黏稠物」時,要緩緩加酒精,直至溶液中黏稠物不
步驟3:析出含DNA黏稠物:沿燒杯內壁緩慢加入蒸餾水,同時用玻璃棒沿一個方向內不停地輕輕攪拌。由於溶容液濃度的下降,使得DNA溶解度下降,蛋白質溶解度上升,DNA析出成白色絲狀黏稠物,當黏稠物不再增加時,停止加入蒸餾水。(這時溶液中NaCl的物質的量濃度相當於0.14 mol/L)
E. 有關實驗「DNA的提取及檢測」的問題
實驗准備工作:
1 所用離心管、槍頭要洗凈、烘乾(最好滅菌)。
2 試劑配製:
1 M Tris-HCl (pH 8.0): 稱取Tris-Base 121g, 加入約 ml 水在磁力攪拌器上攪拌,使其充分溶解後加入濃鹽酸調整pH至8.0後加水定溶至1000 ml. 滅菌後於室溫保存。
0.5 M EDTA (pH 8.0): 稱取EDTA-Na2鹽 187 g 加入約 800 ml水,在磁力攪拌器上邊攪拌邊加入固體NaOH,當EDTA和NaOH均完全溶解,溶液變清時其pH值剛好達到8.0左右,再用pH試紙略加調整即可, 滅菌後於室溫保存。
5.0 M NaCl: 稱取NaCl 300 g, 加入蒸餾水約800 ml 於磁力攪拌器上充分攪拌,約5分鍾後停止攪拌,靜止2~3分鍾,倒出上清液,再加入100 ml蒸餾水重復前面的步驟,直到NaCl充分溶解後定溶至1000 ml., 滅菌後於室溫保存。
酚:氯仿:異戍醇(25:24:1)的配製:可參考《分子克隆》亦可按如下方法配製取重蒸酚100 ml ,蒸餾水50 ml,8-羥基喹嚀0.05g 加入500 ml玻璃燒杯於磁力攪拌器上邊加熱邊攪拌,待酚達到水飽和後加入18 g Tris-Base,等Tris-Base 完全溶解後加入100 ml氯仿:異戌醇(24:1),攪拌10~20分鍾,靜止約10分鍾,除去上層水相後,裝入棕色瓶,最後加入20 ml 0.1M的Tris-HCl保護液於4℃保存。
DNA Buffer的配製:
1 M Tris-HCl (pH 8.0)
100 ml
0.5 M EDTA (pH 8.0):
100 ml
5.0 M NaCl:
300 ml
H2O
500 ml
滅菌後於室溫下保存3個月左右,用時按1.5%往Buffer中加入CTAB,在電爐上燒開;在通風櫥里加入1%的巰基乙醇( 現配現用)。
DNA的提取:
1 取2~5 g葉片或愈傷組織,加入適量液氮研碎,轉入預冷的50ml離心管,加入20 ml DNA提取緩沖液充分搖勻,於65℃水浴60~90 min,中途輕輕搖勻兩次。
2 加入15 ml 氯仿:異戍醇(24:1)輕輕搖勻10分鍾,於BECKMAN離心機中4000 rpm離心15分鍾。
3 取上清液於另一50 ml離心管加入10 ml 氯仿:異戍醇(24:1)重復步驟2。
4 吸上清液於一干凈的50 ml 離心管,加入15 ml 冷凍的異丙醇,輕輕搖勻後於-20℃冷凍半小時,4000 rpm離心10分鍾。棄上清液,加入5 ml 76%的乙醇(含10 mM
NH4Ac)浸泡5 h(或過夜),中途換乙醇2-3次。
5 棄乙醇風干沉澱約半小時,加入3.0 ml TE緩沖液(10 mM Tris-HCl pH 8.0;1 mM EDTA , pH 8.0),20 µl RNase A(10 mg/ml),37℃溫浴過夜。
6 溶液轉入一10 ml離心管,加入3.0 ml苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)充分顛倒混勻,4000 rpm離心15 min,吸上清液於另一10 ml的離心管中,(可重復一次)。
7 加入1 ml 5.0 M的NaCl和3.0 ml水飽和乙醚,充分混勻,4000 rpm離心5 min。
8 棄乙醚,用20 µl槍頭擋住離心管管口內側,用力下壓槍頭,使槍頭與管壁間形成一狹縫,讓下清液從縫中流入另一10 ml離心管。
9 加入5 ml冷凍的異丙醇,輕輕搖勻後於-20℃冷凍半小時,4000 rpm離心10分鍾。棄上清液,加入3 ml 70%的乙醇浸泡4~6 h(或過夜),中途換乙醇2-3次。風干乙醇,加入500 µl TE溶解,或浸在乙醇中長期保存。
DNA檢測
1 取DNA原液15 µl稀釋至3.0 ml,用UV-1601型紫外分光光度計測定230 nm、 260 nm及280 nm的吸光值。
高質量的DNA要求:A260/A230>2.0; 1.7<A260/A280<1.9
2 將DNA原液適當稀釋後,用1 Χ TAE,0.8%瓊脂糖凝膠2V/cm電泳1 h進行質量檢測。
3 向一定量的DNA中加入限制性內切酶EcoR I至4-5U/μg DNA,37℃消化過夜,用0.5 Χ TBE,0.8%瓊脂糖凝膠2.5V/cm電泳3 h進行檢測。
CTAB法微量提取DNA
1. 葯品的配製:
CTAB提取液:
(1)100mM Tris-HCl(PH 8.0),1.5M NaCl,50mM EDTA(PH 8.0)
(2)1% PVP,2% CTAB
(3)取少許(1)加到(2)中,攪拌成糊狀,後加(1)至足量,65℃水浴充分溶解備用。使用前要在65℃溫浴一會兒,然後加入1-4%巰基乙醇,混均勻。
苯酚:氯仿:異戊醇(25∶24∶1): 重蒸酚65℃水浴溶解,在燒杯中加入80ml溫熱的蒸餾水,加入少許8-羥基喹啉,溶解後加入100ml重蒸酚,再加入100ml氯仿:異戊醇(24:1),加入20克Tris Base,磁力攪拌器上攪拌1.5 h左右至停止攪拌後很快分層,然後裝入棕色瓶中,4℃冰箱中儲存備用。
2. 材料的採取與保存:
在超凈工作台上,取試管苗葉片,放入無菌的1.5 ml離心管中,置於冰盒中,然後把裝有葉片的離心管一起裝在紗布袋中,置液氮中冷凍10分鍾,取出後置於—70℃冰箱中可長期保存,需要用時,取出置於冰盒中。
3.DNA的粗提
在裝有葉片的離心管中加入石英砂少許(約0.07克),用事先滅過菌的—20℃冰箱中預冷的尖頭玻棒將材料戳到底部,先壓後研磨,研細後加入600 ul CTAB提取液,再繼續研磨一會兒使其懸浮均勻,然後在65℃水浴鍋中溫浴60-90分鍾,隔30分鍾取出上下輕輕顛倒幾次,水浴之後,加入700ul苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),,上下晃動10分鍾以上,其間置於37℃水浴鍋中溫浴一會(冬季),使之充分混勻,然後10000-12000rpm離心5-10分鍾,吸取上清液轉至另一離心管中,加入60 ul 5M NaCl,再加入-20℃冰凍無水乙醇1ml,輕輕顛倒數次,混合均勻後冰凍30分鍾沉澱DNA,然後8000-10000rpm離心5分鍾,棄上清液,加入1 ml 70%酒精浸泡2小時或過夜,8000rpm離心5分鍾,棄酒精之後在工作台上風干DNA,注意不要過干,否則會使以後溶解困難。
4. DNA的純化:
向風干後的DNA中加入500 ul 1xTE,37℃水浴15-30分鍾至DNA完全溶解,然後加入700ul苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),上下顛倒離心管約10分鍾,至充分混勻,其間置於37℃水浴鍋中溫浴一會(冬季);10000-12000 rpm離心5分鍾,吸取上層液至另一離心管中,加入700ul氯仿:異戊醇(24:1),顛倒10分鍾(方法同上),10000 -12000rpm離心5分鍾,吸取上層液至另一離心管中,加入60 ul 5M NaCl,再加入1ml冷凍的無水乙醇,輕輕顛倒,然後在-20℃冰箱中置30分鍾沉澱DNA,8000-10000 rpm離心2-3分鍾,使DNA分散狀緊貼在管壁上,棄酒精,加70%酒精1ml浸泡,2小時後換一次,後浸泡過夜,8000rpm離心3分鍾後棄酒精,風干,加50-100ul1xTE充分溶解,然後每管加5ul 5mg/ml Rnase,37℃水浴6小時或過夜。
5. DNA檢測:
(1)0.8%瓊脂糖凝膠電泳30-60分鍾:
TAE 100ml,EB 30ul,樣品3-5ul,電壓90V,
觀察A:DNA是否跑出,帶型是否整齊劃一;B:RNA是否除盡
(2)分光光度計檢測D260/D280的比值:在1.8-2.0的范圍內認為純度較高上述方法提取的DNA比值在1.65-1.95之間。濃度=30000xOD260(DNA樣品為5ul時)。
不知道你說的是動物的還是植物的,我當年做的是動物的。用的是雞血,因為在學校,沒有生物書,只能粗略的查一下了
1、實驗中兩次使用蒸餾水。
第一次,取血細胞液時加蒸餾水,目的是讓血細胞吸水漲破
第二次是在析出含DNA的粘稠物後,目的是稀釋NACL溶液,使DNA逐漸析出
2、加3次NACL,
第一次,在溶解核內DNA時,加入NACL後充分攪拌,加速染色質中DNA與蛋白質的分離,使DNA充分游離並融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解時,家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鑒定中,目的是溶解DNA
3、過濾3次
第一次在提取血細胞核物質時進行過濾,取得的濾液中含有染色質,而濾出的是細胞膜、核膜和細胞器等的破碎結構
第二次在濾去含有DNA粘稠物只能夠,濾液中含有仍然溶解在NACL中的細胞中的一些成分,如蛋白質等
第三次在過濾含DNA的2mol/L的NACL溶液時,過濾後的濾液中含有DNA
F. dna的粗提與鑒定實驗為什麼加入2m的nacl後不過濾就加蒸餾水 博客
1、實驗中兩次使用蒸餾水。
第一次,取血細胞液時加蒸餾水,目的是讓內血細胞吸水漲破
第二次是容在析出含DNA的粘稠物後,目的是稀釋NACL溶液,使DNA逐漸析出
2、加3次NACL,
第一次,在溶解核內DNA時,加入NACL後充分攪拌,加速染色質中DNA與蛋白質的分離,使DNA充分游離並融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解時,家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鑒定中,目的是溶解DNA
3、過濾3次
第一次在提取血細胞核物質時進行過濾,取得的濾液中含有染色質,而濾出的是細胞膜、核膜和細胞器等的破碎結構
第二次在濾去含有DNA粘稠物只能夠,濾液中含有仍然溶解在NACL中的細胞中的一些成分,如蛋白質等
第三次在過濾含DNA的2mol/L的NACL溶液時,過濾後的濾液中含有DNA
G. DNA能溶於蒸餾水嗎
在2mol/L的NaCl溶液中DNA溶解,緩緩加入蒸餾水使得NaCl溶液濃度降低,則DNA的溶解度降低不斷析出;DNA絲狀內物不再增加時,容此時NaCl溶液的濃度為0.14mol/L;如繼續加蒸餾水,DNA的溶解度增加,DNA絲狀物量減少.故選:C.
H. DNA的粗提取與鑒定怎麼做!
實驗原理:
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含雜質較少的DNA。
3.DNA在沸水浴時被專二苯屬胺染成藍色。
方法步驟:
1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。 5 min
2.溶解DNA:
3.析出含DNA的黏稠物:蒸餾水300mL,逆時針方向攪拌,緩慢
4.過濾:取黏稠物
5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min
6.過濾:取濾液。
7.提取出含雜質較少的DNA,逆時針方向攪拌,稍慢。5 min
8.DNA的鑒定:沸水浴5min
I. DNA的粗提取實驗中,先後兩次加入蒸餾水的作用分別是
選C.第二次降低NaCl溶液濃度是為了讓DNA析出。100%正確!