过滤法收集菌体

1. 物体表面细菌培养采样方法

物体表面细菌培养采样的三种主要方法包括接触皿采样法、淋洗采样法以及拭子采样法。
1. 接触皿采样法
使用TSA、NA和SDA培养基进行接触皿采样。打开培养皿盖，将培养基的凸起面按压到待采样的物体表面5至10秒后，关闭盖子。在30℃至35℃的条件下培养48小时。TSA接触皿用于检测金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、黑曲霉和白色念珠菌；NA接触皿用于检测前四种细菌；SDA接触皿则用于检测黑曲霉和白色念珠菌。
2. 淋洗采样法
将20毫升生理盐水缓慢倒入含有菌种的平皿中，确保液体倾注点位于菌种载体的中心，倾注完成后轻轻晃动平皿五次，幅度约为2至3厘米。之后使用移液器将生理盐水全部移取，作为供试液。取10毫升供试液进行活菌计数，通过薄膜过滤法处理，将滤膜贴于TSA和NA平板上，于30℃至35℃下培养48小时进行计数。计数结果的两倍即为淋洗取样的活菌计数结果。
3. 拭子采样法
使用无菌拭子蘸取5毫升0.9%氯化钠溶液，在物体表面擦拭取样点，然后将拭子迅速放入无菌试管并密封。向试管中加入10毫升0.9%生理盐水，使用旋涡振荡器充分混合后作为供试液。取5毫升供试液进行活菌计数，通过薄膜过滤法过滤，将滤膜贴于TSA和NA平板上，于30℃至35℃下培养48小时进行计数。计数结果的两倍即为擦拭取样的活菌计数结果。

2. 过滤除菌法的原理

过滤除菌的原理有惯性撞击截留作用、拦截截留作用、布朗扩散截留作用等。 当空气通过过滤层时，直径很小的微粒在缓慢流动的气流中，会有明显的布朗运动，促使微粒和纤维接触和被捕集。这种作用在较大的气速、较大的纤维间隙中不起作用，因为此时布朗运动不明显。

3. 请问制备培养基时如何过滤除菌

1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌

某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。

4. 物体表面细菌培养采样方法

物体表面细菌培养采样方法有接触皿采样法、淋洗采样法、拭子采样法三种。

一、接触皿采样法

TSA、NA和SDA培养基接触皿，取下皿盖将培养基凸起面按压到采样物体表面5s—10s后，将皿拿起盖好皿盖，细菌置于30℃ —35℃培养48h。

TSA接触皿测试菌种为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、黑曲霉、白色念珠菌；NA接触皿测试菌种为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌；SDA接触皿测试菌种为黑曲霉、白色念珠菌。

三、拭子采样法

取无菌拭子，用无菌的0.9%氯化钠溶液5ml 浸湿，在取样点面上擦拭，完成后迅速将拭子放入无菌试管中并密封，加入10ml0.9%生理盐水，使用旋涡振荡器充分振荡后作为供试液。

取5ml进行活菌计数采用薄膜过滤法过滤，滤干后取出滤膜，细菌滤面朝上贴于TSA90mm平板培养基和NA90mm平板培养基上，置于30℃—35℃培养48h观察计数。计数结果的2倍为擦拭取样活菌计数结果。