『壹』 PCR实验室通风系统流程是什么
PCR实验室通常采用非单向流送风方式,所谓非单向流,指气流流线方向不平行,风速也不一致。非单向流的气流组织方式有上送下回式、上送下侧回式、测送下回式、上送上回式、PCR实验室一般采用上送下回式。上部送风依靠高效送风口进入房间,下部回风依靠每个房间的对称分布的排风柱下部的排风口排风。
新风从室外进入处理机组,经过粗效、中效、亚高效、表冷(热)段、喷淋段(加湿)几个处理过程,然后进入洁净室。
排风分为全面换气与局部排风两部分,全面排风口一般位于排风柱的下部,设可调带过滤网的百叶风口,送风口采用高效过滤送风口。局部排风为房间设置Ⅱ级B2型生物安全柜的局部排风,柜面风速要求不小于5m/s,生物安全柜独立设置排风系统,排风口要求设置在建筑物的屋面上,生物安全柜排风管与所在室内的全面排风互锁,局部排风与全面排风不能同时开启。新风机组与排风系统都采用变频系统,以应对不同变风量处理过程。
空气过滤要求:
实验室的送风经过净化过滤,需达到国家规范要求,实验室完工后,需经过测定送风颗粒物的浓度。颗粒物浓度不小于0.5μm,过滤效率95<η<99.9,阻力不大于120Pa,处理效率为大气尘计数效率,满足此要求,可达到PCR实验室室内处理空气标准,方可满足实验室使用要求。
『贰』 pcr实验室的排水需要单独处理吗
pcr实验室的排水有下水管道的是最好,一般都是从特殊处理的,没有办法的,只能直排了
『叁』 PCR实验室的污染主要为哪些怎样预防实验室污染
把灭菌水、buffer、taq酶、引物全换掉,有段时间我们实验室PCR总出现负对照扩出条带,很难说哪个污染了,还不如全部换掉。其实普通PCR也不用像你说的那样夸张吧,一般还是比较难污染的。
『肆』 PCR实验室装修供水系统需要怎么设置
设置抄PCR实验室供水系统,建袭议利用室外供水管网的压力直接供水,具体方式为直接供水、高位水箱供水、加压泵水箱供水。如果建筑的低层与高层皆有实验室,低层可由室外供水管网直接供水,而高层则用水箱或加压泵水箱供水。还有,PCR实验室供水系统的布置要做到用水点多且分散,这样能起到平衡水压的效果。其实PCR实验室装修供水系统还有很多需要注意的事项,我们公司当时找CEIDI西递设置的时候,他们也花了不少时间和功夫。您要是有需求,可以先找他们咨询一下,他家在实验室装修这方面已经有10多年经验了,能满足不同企业的需求。
『伍』 PCR实验室污染如何预防
核酸实验室污染的主要原因可能为:样本污染、试剂污染、 环境污染、设回备污染和其他污染答。因此要避免污染,首先是预防,而不是排除。不规范的行为给实验室的安全和污染埋下了隐患,从而影响检验结果的准确性。因此,有效的管理、规范的实验室操作执行尤为重要。
找到一种全面测底的为高风险PCR实验室消毒的方式成为必然。采用全球先进干雾技术打造的欧菲姆OXY-30000干雾过氧化氢消毒器,搭配诺福过氧化氢消毒液,可有效杀灭200多种有害微生物(已经取得国内杀灭冠 状病毒的检测报告);高效消毒的同时,可以有效去除核酸污染,还可以消除芽孢、霉菌;应用简单轻便,消毒完整不留死角,且作业时间短。
『陆』 PCR实验室污染的原因有哪些
污染原因复:
1)标本制间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。
2) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3.)PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大(一般为1013 拷贝/ml),远远高于PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。
4)容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000 拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。
『柒』 PCR实验室废水设备厂家能否提供一个需要具体的PCR实验室废水处理流程图
中环清源--实验室废水处理流程
由废水收集、自动调pH、自动加药装置、混凝气浮装专置、重金属属去除装置、新型微电解装置、电化学催化氧化处理装置、臭氧催化氧化处理装置、光催化氧化处理装置、新型生物处理装置、吸附过滤装置、新型膜过滤装置和复合消毒处理装置等单元组成,形成一个完整的综合废水处理系统。
该系统针对不同的有机、无机、生物类废水成分和浓度采用不同的处理技术和工艺进行综合处理,可有效去除综合废水中的COD、BOD、SS、色度、病毒、有机溶剂和重金属离子等。处理后的废水可达标排放,亦可回收再利用。
『捌』 PCR实验室污染了怎么处理
出现污染后,我们首先考虑可能是试剂的污染,更换新批号的HBV试剂重新检测后,结果仍为全部标本阳性。
将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测,结果标本中阴、阳性结果都有,阴性对照是阴性,阳性对照是阳性,说明标本没有被污染将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测,也显示试剂没有问题。
我实验室用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉,再将HBV标本进行检测,结果全部标本仍然为阳性。
用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将HBV标本重新检测,同时设置了两个阴性对照(A和B),A 阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿,打开反应管的盖子,在空气中暴露10 min,盖上盖子,上机检测;B阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿,不开盖子,直接上机检测。结果是全部标本和A阴性对照为阳性,而B阴性对照为阴性。
至此,虽然还查找不到污染源是什么,但有一点可以肯定,PCR实验室污染是气溶胶扩散而引起的后来经过调查,发现污染是由于本室工一位工作人员在打扫实验室卫生时,用扩增区的扫笤和拖把打扫了标本制备区的卫生引起。
在确定了污染的原因后,我们就开始着手排除污染,每天都打开整个PCR 实验室的门窗和排气扇,让整个实验室通风,用消毒液擦拭整个PCR实验室,打开所有的紫外灯照射。
每隔3 d按3.5步骤检测一次,一直这样处理了一个月,A阴性对照才转为阴性。连续检测三次A和B阴性对照,每次结果都均为阴性,才确定PCR实验室恢复正常。
通常我们对PCR实验室污染的预防是采取隔离不同操作区、分装试剂、改进实验操作等规则,对污染的处理是用稀盐酸擦拭或浸泡;紫外线照射法等 ]。而对于实验室的通风方面没有给予足够的重视,为了防止实验区间之间的相互污染,各个实验区间都是尽可能的密闭,从而使得实验室出现PCR产物残留污染的几率增大。从本次PCR实验室污染排除的过程来看.我觉得污染得以排除的一个关键是通风。适当的给予实验室通风,可起到空气稀释的作用,有利于PCR产物残留量的减少,加快实验室污染的排除。
『玖』 PCR实验室污染如何预防
1.PCR实验室严格分区
整个检测过程应严格分区进行:PCR反应体系的配置区,标本处理、加样区,PCR扩增、荧光检测及结果分析区。各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。
2.进行PCR操作时,工作人员应该严格遵守SOP操作规程
操作人员应经过专业培训,具有一定经验和操作技能。
3.分装PCR试剂
当使用的 PCR 试剂盒,不是独立分装的反应液时,应将PCR反应液先配置好,然后分装到反应管-20℃保存,以减少重复加样次数,避免污染。PCR试剂、PCR反应液与样品及PCR产物分开保存,试剂盒里面的阳性对照、阳性参考品也应该与试剂分开放置,不应放于同一冰箱。
4.正确使用加样器
吸样时要特别小心,应缓慢匀速,避免液体溅到加样器头上。尽量一次性吸完,忌反复多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶。打出液体后拇指不应松开按钮,将吸嘴压掉后再将拇指松开,避免液体回吸。
5.做好实验室的清洁消毒
操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或 75%酒精、紫外线灯或臭氧消毒处理。 特别是实验完成后,应立即清洁工作台,并进行消毒。
6.做好实验防护
使用不含荧光物质的一次性手套、一次性专用离心管、自卸式移液器和带滤嘴吸头。选择质量好的离心管,以避免样本外溢和外来核酸的进入,打开离心管前应先离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部,以防止管内液体溅出,造成污染。反应管中尽量避免气泡存在,管盖应盖紧。试剂准备和标本处理应使用超净工作台或防污染罩,以防止对环境污染。
『拾』 怎么防止PCR实验室污染
PCR实验室污染
标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。
PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。
还有一种容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。
实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室,这个问题也比较常见,因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力,其污染可能性也很大。
污染监测
一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。
对照试验
1、阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。
2、阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照。它包括①标本对照:被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照。②试剂对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以监测试剂是否污染。
3、重复性试验
4、选择不同区域的引物进行PCR扩增
防止污染的方法
进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。
划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域内进行,PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行:
1. 试剂准备区。
2.标本制备区。
3. PCR扩增区及分析区。
切记:任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
分装试剂:PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中,不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA:
1.PCR用水应为高压的双蒸水;
2.引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制;
3.引物和dNTP应分装储存,分装时应标明时间,以备发生污染时查找原因。
实验操作注意事项
尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
1. 戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
2. 使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
3. 避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
4. 操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;
5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管;
6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
8. 重复实验,验证结果,慎下结论