『壹』 為什麼做細胞實驗的PBS緩沖液不含鈣離子和鎂離子
為什麼做細胞實驗的PBS緩沖液不含鈣離子和鎂離子
含0.05%吐溫-20的pH7.4的磷酸鹽緩沖液(簡稱為PBS-T)
配製方法為:稱取磷酸二氫鉀(KH2PO4),磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O),氯化鈉(NaCl),氯化鉀(KCl),吐溫-20 ,加水。
PBS:Phosphate Buffered Saline
PBS 1L配方pH7.4:
磷酸二氫鉀(KH2PO4):0.27g,
磷酸氫二鈉(Na2HPO4):1.42g,
氯化鈉(NaCl):8g,
氯化鉀(KCl)0.2g,
加去離子水約800mL
充分攪拌溶解,然後加入濃鹽酸調pH至7.4,最後定容到1L。高溫高壓滅菌後室溫保存。 PBS緩沖液(pH7.2~7.4):
NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 10mmol/L, KH2PO4 2mmol/L
PBS緩沖液一般作為溶劑,起溶解保護試劑的作用,具體試劑一般也有不同的比例配方,在針對性上就有了更好的效果。
1x PBS緩沖液就是使用0.1M的PBS配置,可直接使用,2x PBS就是2倍濃度,使用時稀釋一倍使用。0.01M的PBS一般不用來配置緩沖液,用於其它用處。
『貳』 為什麼做細胞實驗的PBS緩沖液不含鈣離子和鎂離子
因為:PBS中加來入了Na2HPO4和0.24g KH2PO4,他源們能與鈣離子和鎂離子,金屬離子結合生成沉澱,
附:
0.01M 磷酸鹽緩沖液(PBS)配製方法
稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶於800ml蒸餾水中,用HCl調節溶液的pH值至7.4,最後加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌(至少20分鍾),保存存於室溫或4℃冰箱中。
需要注意的是,通常所說的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度,而非Na 離子或K 離子的濃度,Na 離子和K 離子只是用來調節滲透壓的。如果是用於免疫組化的話,則需要在配置的時候分別加入100 u/ml青黴素和鏈黴素之後再調PH、定容、滅菌消毒。
『叄』 D-Hanks液和PBS有什麼區別
一、含義不同:PBS為磷酸緩沖鹽溶液,D-Hanks液為(不含有鈣和鎂離子)平衡鹽溶液。
二、用途不同:PBS是常用的用於生物學研究的一個緩沖溶液,D-Hank's常用於配製胰酶溶液、細胞培養取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配製其他試劑等。
三、配置方法不同:
PBS配置方法:先將磷酸鹽溶解於500mL蒸餾水中,用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH後,再用蒸餾水稀釋至1000mL。
D-Hanks液配置方法:
1、將原液A和原液B與雙蒸水(18份)混合後,分裝於200ml小瓶中,10磅高壓蒸氣滅菌15分鍾,臨用前用無菌的5.6% NaHCO3調pH至7.2~7.6,最後除去鈣和鎂離子即D-Hanks液。
2、原液A:將NaCl(160g )、MgSO4·7H2O( 2g )、KCl (8g)、Mg Cl2·6H2O (2g)、 CaCl2(2.8g)溶於1000ml雙蒸水。
3、原液B:將Na2HPO4·12H2O(3.04g)、KH2PO4(1.2g)、葡萄糖(20.0g)溶於800ml雙蒸水後加100ml0.4%酚紅溶液再加蒸餾水到1000ml。
(3)去鈣離子鎂離子的pbs擴展閱讀:
1、Hanks 液為生物醫學實驗中最常用的無機鹽溶液和平衡鹽溶液,簡稱H。主要用於配製培養液,稀釋劑和細胞清洗液,而不能單獨作為細胞組織培養液。
2、PBS的用途:主要用於一些化學實驗中不影響實驗反應的情況下調節pH值,以便讓實驗的化學反應在最佳條件下進行。部分用於食品或是飼料行業加工。
3、PBS可以為三種溶液的英文縮寫,分別是磷酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽緩沖鹽水及 磷酸鹽緩沖鈉,其配製方法不同,pH值不同,發揮的生物學作用亦不完全相同。
『肆』 如何去掉水中鈣離子,鎂離子
1、煮沸法
由於碳酸鈣不溶,碳酸鎂微溶,所以碳酸鎂在進一步加熱的條件下還可以與水反應生成更難溶的氫氧化鎂。由此可見水垢的主要成分為碳酸鈣和氫氧化鎂。
2、石灰——純鹼法 (工業用)
在這種方法中,暫時硬度加入石灰就可以完全消除,HCO3-都被轉化成CO32-。而鎂的永久硬度在石灰的作用下會轉化為等物質的量的鈣的硬度,最後被去除。反應過程中,鎂都是以氫氧化鎂的形式沉澱,而鈣都是以碳酸鈣的形式沉澱。
3、離子交換法
這種方法中用到的離子交換劑,有無機和有機兩種。無機離子交換劑,如沸石等;有機離子交換劑包括:碳質離子交換劑——磺化酶,陰陽離子交換樹脂等。而且一般的離子交換劑在失效後還可以再生。
(4)去鈣離子鎂離子的pbs擴展閱讀:
鈣離子的檢驗
焰色反應:若某物質的焰色為磚紅色,則該物質含Ca2+
1、取一鉑絲用稀鹽酸酸洗後灼燒,反復多次,直至火焰變為無色.
2、將鈣產品放在碾缽中用,玻璃棒碾成粉末.
3、用鉑絲分別蘸一些粉末放置酒精燈上灼燒,觀察火焰的顏色.
水中鈣離子的測定
測定鈣、鎂離子的可靠方法為重量法,這種方法手續繁瑣,分析速度慢,目前常用的方法是EDTA絡合滴定法,EDTA絡合滴定法適用於工業循環冷卻水中鈣含量在2-200mg/l,鎂含量在2-200 mg/l的測定,也適用於其他工業用水及生活用水中鈣、鎂離子含量的測定。
『伍』 D-Hank』s 液與PBS的區別
PBS溶液又稱磷酸鹽緩沖溶液,一般選擇K2HPO4和KH2PO4配製,因為鈉鹽溶解的較慢。根據不同pH的溶液,稱量不同質量的磷酸鹽,也可以用pH計調溶液的pH。PBS一般用作支持電解質。其配置方法如下:採用去離子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配製PBS溶液,按以下步驟進行:(1) 配製1/15mol/L KH2PO4,即每升水中溶解9.078克KH2PO4; (2) 配製1/15mol/LNa2HPO4·2H2O,即每升水中溶解11.876克Na2HPO4·2H2O;(3) 將18.2%(體積分數)KH2PO4溶液和81.8%Na2HPO4·2H2O混合;最終 測定PBS液的PH值約為7.4。
Hank\'s配方:NaCl 8.01;KCl 0.4;CaCl2 0.14; NaHCO3 0.35;KH2PO 4 0.06;Glucose 0.34(g/l);
D-Hank' s:不含鈣離子、鎂離子、葡萄糖。
『陸』 如何去除鈣鎂離子
除去鈣、鎂離子的方法那就是加入碳酸鈉,因為碳酸鈣和碳酸鎂都是沉澱,所以之後可以通過過濾的方式除去。根據你給的數據,每升溶液中加入碳酸鈉11.34克,剛好可以完全除去兩種離子。除去後剩下是鈉離子本身就是鹽的一種成分,所以不影響品質。