過濾除菌實驗室

『壹』 實驗室滅菌消毒怎麼做更徹底

一、消毒和滅菌的區別

1、消毒（disinfection in hospital）：殺滅或消除醫院環境中媒介物上污染的病原微生物的過程.

2、滅菌(sterilization)：殺滅或去除外環境中媒介物攜帶的一切微生物的過程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括細菌芽胞和真菌孢子.滅菌是個絕對的概念,滅菌後物品必須是完全無菌的.即滅菌保證水平為106.

二、高溫滅菌法

高溫滅菌法是利用高溫使微生物的蛋白質及酶發生凝固或變性而死亡，是應用最廣泛且有效的滅菌方法。主要用於器械、容器、試劑等滅菌。

（一）高壓蒸氣滅菌法

圖為加熱接種環。（圖片來源： 《接種、分離純化和培養技術》）

注意事項：

1、酒精燈的燈芯要平整.

2、添加酒精時,不超過酒精燈容積的2/3；酒精不少於1/4.

3、絕對禁止向燃著的酒精燈里添加酒精,以免失火.

4、絕對禁止用酒精燈引燃另一隻酒精燈.

5、用完酒精燈,必須用燈帽蓋滅,不可用嘴去吹.

6、不要碰倒酒精燈,萬一灑出的酒精在桌上燃燒起來,應立即用濕布撲蓋.

『貳』 實驗室常用的滅菌方法有乾熱滅菌.高壓蒸汽滅菌.紫外線滅菌.過濾除菌四種各有那些優缺點

1.高壓蒸汽滅菌

為濕熱滅菌方法的一種。是微生物培養中最重要的滅菌方法。這種滅菌方法是基於水在煮沸時所形成的蒸汽不能擴散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密閉的情況下，隨著水的煮沸，蒸汽壓力升高，溫度也相應增高。壓力和溫度之間的關系見表9－1。

高壓蒸汽是最有效的滅菌法，能迅速地達到完全徹底滅菌。一般在15磅/英寸2壓力下（121.6℃），15～30分鍾，所有微生物包括芽孢在內都可殺死。它適用於對一般培養基和玻璃器皿的滅菌。

進行高壓蒸汽滅菌的容器是高壓蒸汽滅菌鍋。高壓蒸汽滅菌鍋是一個能耐壓又可以密閉的金屬鍋，有立式與卧式兩種。

可以用電熱、煤氣、蒸汽等。鍋上裝有壓力表，有的還裝有溫度計，能及時了解鍋內壓力及溫度。鍋上還設有排氣口，其作用是在密閉之前，利用蒸汽將鍋內的冷空氣排凈，另外還裝有安全活門，如果壓力超過一定限度，活門即可自動打開，放出過多的蒸汽。

2.乾熱滅菌

微生物培養中常用的乾熱滅菌是指熱空氣滅菌。一般在電烘箱中進行。乾熱滅菌所需溫度較濕熱滅菌高，時間也較濕熱滅菌長。這是因為蛋白質在乾燥無水的情況下不容易凝固。一般須在160℃左右保持恆溫3～4小時，方能達到滅菌的目的。

乾熱滅菌適用於空玻璃器皿的滅菌，凡帶有橡膠的物品和培養基，都不能進行乾熱滅菌。

3.間歇滅菌

各種微生物的營養體在100℃溫度下半小時即可被殺死。而其芽孢和孢子在這種條件下卻不會失去生活力。間歇滅菌就是根據這一原理進行的。

間歇滅菌的方法是用100℃、30分鍾殺死培養基內雜菌的營養體，然後將這種含有芽孢和孢子的培養基在溫箱內或室溫下放置24小時，使芽孢和孢子萌發成為營養體。這時再以100℃處理半小時，再放置24小時。如此連續滅菌3次，即可達到完全滅菌的目的。

間歇滅菌通常在流動蒸汽的滅菌鍋中進行，也可用普通鋁鍋代替。這種滅菌方法多用於明膠、牛乳等物質的滅菌，這類物質在100℃以上的溫度下處理較長時間，會被破壞，而用間歇滅菌法就既起到了殺菌作用，又使被處理的物質免遭破壞。

4.紫外線滅菌

紫外線殺菌力最強的是波長2650～2660Å的部分。無菌室緩沖間和接種箱常用紫外線燈作空氣滅菌。無菌室和緩沖間的照射時間為20～50分鍾（視房間大小而定），接種箱照射10～15分鍾即可。

為了加強紫外線滅菌的效果，在照射前，可在無菌室、緩沖間或接種箱內噴灑5%石炭酸，以使空氣中附著有微生物的塵埃降落，同時也可以殺死一部分微生物。無菌室的工作台的檯面和椅子，可用2～3%的來蘇兒擦洗。然後再照射紫外線。由於紫外線對人體有傷害作用，所以人不要直視正在照射的紫外線燈，也不要在照射情況下進行工作。

滅菌後，為了檢驗紫外線的滅菌效果，可以在無菌室、緩沖間或接種箱內放一套盛有培養基的培養皿，將皿蓋打開5～10分鍾，蓋好後，放入溫箱中培養。如果只有一、二個菌落，可認為滅菌效果良好。如雜菌叢生。則需延長照射時間或同時加強其它滅菌措施。

『叄』 請問制備培養基時如何過濾除菌

1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種，高壓除菌及.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓滅菌的工作強度小，成本較低，但易造成營養成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨醯胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數培養基採用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌，並且已成為培養基除菌的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌

某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌後加入L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨醯-L-谷氨醯胺）可代替L-谷氨醯胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鍾的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下採取正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制葯企業採用微孔濾膜濾器（如Zeiss濾器）或立式微孔濾器（Millipore、Pall）除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時，先要用培養用水將濾膜充分潤濕，在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊，凡與空氣接觸部位都要包好（可用牛皮紙、紗布、無紡布等）；高壓滅菌後，在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束後，要打開濾器，檢查濾膜是否完整，如果濾膜破裂，需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積，因為濾膜的折疊，膜面積顯著增大，液體處理量大，而且不容易發生堵塞現象。

『肆』 實驗室消毒方法有哪幾種

根據不同的消毒對象採用不同的消毒方法，通常以採用機械清掃和沖洗與使用各種化學消毒劑相配合。
（1）大門
入口處設消毒槽。消毒葯使用2%氫氧化鈉（每周換一次）或新鮮生石灰。主要消毒車輛的輪胎。
（2）工人
工作人員在進入各生產車間前，必須在更衣室內脫衣，洗澡，換上經過消毒的工作衣褲，工作帽和膠靴，洗手後經消毒池進入車間。工作服、工作帽每周洗滌並高壓消毒一次。
（3）豬舍
採用「全進全出」飼養方式的豬場，在引進豬群前，對空豬舍按以下程序徹底消毒：清除豬舍內的糞尿及墊料，運出作無害化處理，用高壓水徹底沖洗頂棚、牆壁、門窗、地面及其他一切設施，直至洗滌液清澈透明為止。水洗干後關閉門窗，用福爾馬林熏蒸消毒12～24小時，然後開窗通風24小時。消毒後空閑10～14天再使用。
（4）飼養管理用具
飼槽、飲水器及其他用具需每天洗刷，定期用1%～3%來蘇兒或0.1%新潔爾滅消毒；墊料每周更換一次，並應事先消毒。