離子交換色譜和疏水作用色譜區別

① 從分析原理簡述hplc中，離子交換色譜，離子對色譜及離子色譜有何異同

離子色譜原理與離子交換色譜原理類似，離子色譜後一般使用電化學內檢測器進行檢測，適容用於分析無機與有機陰陽離子和氨基酸，以及糖類和DNA、RNA的水解產物等；離子對色譜主要是補充離子抑制色譜的不足，離子抑制色譜是指在流動相中加入弱酸或弱鹼來抑制待測組分的離解，提高k值以利於組分的分離，一般針對酸性待測組分，可在流動相中加入弱酸，使待測組分減少在流動相中的離解，加強與固定相的分配，適用於有機弱酸鹼或兩性化合物的檢測，但由於色譜柱一般是硅膠基質化學鍵合相色譜，其酸度耐受范圍是2-8，因此在加入酸鹼調節劑時還要兼顧流動相pH，導致無法通過此方法分析強酸強鹼，因此引入離子對色譜，在流動相中加入可與強酸強鹼抑制的離子對，通常分析鹼加入烷基磺酸鈉，分析酸加入季胺鹽，適用於較強有機酸鹼的分析。

② 簡述凝膠過濾，離子交換和親和色譜之間的區別

凝膠過濾色譜法：解析度較高，但是上樣量僅為柱體積的1%，而且對流速也有嚴格的限制。回
離答子交換色譜法：根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質，但是解析度沒有凝膠過濾高。
親和層析法：根據生物分子的特異性分離目的蛋白，特異性很高，但是配件容易丟失 適合含有特異性的標簽的或者抗體。
疏水色譜：根據疏水性來分離蛋白質,缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低，所以應用范圍受到限制，適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質。

③ 離子交換色譜法,離子色譜法,離子對色譜法三者的區別

離子色譜是高效液相色譜的一種，故又稱高效離子色譜（HPIC）或現代離子色譜回，其有別於答傳統離子交換色譜柱色譜的主要是樹脂具有很高的交聯度和較低的交換容量，進樣體積很小，用柱塞泵輸送淋洗液通常對淋出液進行在線自動連續電導檢測。
離子對色譜法：不懂

④ 常用的蛋白質分離純化方法有哪幾種各自的作用原理是什麼

常用的蛋白質純化方法有離子交換色譜、親和色譜、電泳、疏水色譜等等

1. 離子交換色譜：蛋白質和氨基酸一樣會兩性解離，所帶電荷決定於溶液pH。pH小於pI時蛋白質帶正電，pH大於pI時蛋白質帶負電。不同蛋白質等電點的蛋白質在同一個溶液中，表面電荷情況不同。離子交換就是利用不同蛋白質在同一溶液中表面電荷的差異來實現分離的。

2. 親和色譜：生物大分子有一個特性，某些分子或基因對它們有特異性很強的吸附作用。如鎳柱中Ni可以與His標簽的蛋白結合，這種只針對一種或一類物質的吸附就是親和色譜的原理。

3. 電泳：SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳，SDS能斷裂分子內和分子間氫鍵，破壞蛋白質的二級和三級結構，強還原劑能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂，蛋白質在一定濃度的含有強還原劑的SDS溶液中， 與SDS分子按比例結合，形成帶負電荷的SDS-蛋白質復合物，這種復合物由於結合大量的SDS，使蛋白質喪失了原有的電荷狀態形成僅保持原有分子大小為特徵的負離子團塊，從而降低或消除了各種蛋白質分子之間天然的電荷差異，由於SDS與蛋白質的結合是按重量成比例的，因此在進行電泳時，蛋白質分子的遷移速度取決於分子大小。

4. 疏水色譜：疏水色譜基於蛋白質表面的疏水區與介質疏水配體間的相互作用，在高濃度鹽作用下，蛋白質的疏水區表面上有序排列的水分子通過鹽離子的破壞被釋放，裸露的疏水區與疏水配體相互作用而被吸附。疏水色譜就是利用樣品中各組分在色譜填料上配基相互作用的差異，在洗脫時各組分移動速度不同而達到分離的目的。隨著鹽離子濃度的降低，疏水作用降低，蛋白質的水化層又形成，蛋白質被解吸附。
   

⑤ 分配色譜，吸附色譜和離子交換色譜各是什麼它們的區別

吸附色譜

吸附色譜利用固定相吸附中對物質分子吸附能力的差異實現對混合物的分離，吸附色譜的色譜過程是流動相分子與物質分子競爭固定相吸附中心的過程

吸附色譜的分配系數表達式如下：

⑥ HPLC的常用術語解釋

高效液相色譜法(HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。它是在生化和分析化學中常用的柱層析儀。接下來我為大家整理了HPLC的常用術語解釋，希望對你有幫助哦!

第一部分色譜曲線

1、色譜圖(chromatogram)：色譜柱流出物通過檢測器系統時所產生的響應信號對時間或流動相流出體積的曲線圖，或者通過適當的 方法 觀察到的紙色譜或薄層色譜斑點、譜帶的分布圖。

2、(色譜)峰(chromatographic peak)：色譜柱流出

3、峰底(peak base)：峰的起點與終點之間的連接的直線

4、峰高(h ，peak height)：色譜峰最大值點到峰底的距離(圖1 中的BE)。

5、峰寬(W ，peak width)：在峰兩側拐點(圖1 中的F ，G)處所作切線與峰底相交兩點的距離

6、半高峰寬(W h/2 ，peak withd at half height)：通過峰高的中點作平行於峰底的直線，此直線與峰兩側相交兩點之間的距離(圖1 中的HJ)。

7、峰面積(A ，peak area)：峰與峰底之間的面積

8、拖尾峰(tailing peak)：後沿較前沿平緩的不對稱的峰。

9、前伸峰(leading peak)：前沿較後沿平緩的不對稱的峰。(又叫伸舌峰、前延峰)

10、假峰(ghost peak)：除組分正常產生的色譜峰外，由於儀器條件的變化等原因而在譜圖上出現的色譜峰，即並非由試樣所產生的峰。這種色譜峰並不代表具體某一組分，容易給定性、定量帶來誤差。(又叫鬼峰)

11、畸峰(distrorted peak)：形狀不對稱的色譜峰， 前伸峰、拖尾峰都屬於這類。

12、反峰(negative peak)：也稱倒峰、負峰，即出峰的方向與通常的方向相反的色譜峰。

13、原點(origin)：紙或薄層板上滴加試樣部位的中心點

14、斑點(spot)：平面色譜法中，組分在展開和顯譜後呈現近似圓形或橢圓形的色區

15、區帶(zone)：在色譜柱、紙或薄層板上被分離組分所佔的區域。

16、復斑(multiple spot)：一種組分展開後形成兩個或多個清晰斑點。

17、區帶拖尾(zone tailing)：由於物理、化學等作用的影響，一種組分在展開後形成的彗星形狀斑點。

18、基線(base line)：在正常操作條件下，僅有流動相通過檢測器系統時所產生的響應信號曲線。

19、基線漂移(baseline drift)：基線隨時間定向的緩慢變化。

20、基線雜訊(N，baseline noise)：由於各種原因而引起的基線波動。

21、統計矩(moment)：色譜流出曲線是組分在檢測器中濃度或質量依時間的統計分布曲線，響應值對應於分布密度。組分在柱內遷移時間r次冪的數學期望稱為流出曲線的r階原點矩。而組分在柱內遷移時間與平均遷移時間差的r次冪的數學期望稱為流出曲線的r階中點矩。

22、一階原點矩(first origin moment)：組分在柱內遷移時間的數學期望。當流出曲線為對稱峰時，即為組分的保留時間。

23、二階中心矩( μ2 ，second central moment)：二階中心矩為流出曲線的方差。定義為：μ2=E(t-Et)2 式中，E代表平均。

24、三階中心矩(μ3 ，third central moment)：定義為：μ3=E(t-Et)3

可以表示流出曲線的不對稱程度。峰形對稱時μ3=0，前伸峰μ3<0，拖尾峰μ3>0.

第二部分分離模式

1、液相色譜法(liquid chromatography ，LC)：用液體作流動相的色譜法。

2、液液色譜法(liquid liquid chromatography，LLC )：將固定液塗漬在載體上作為固定相的液相色譜法。

3、液固色譜法(liquid solid chromatography，LSC )：用固體(一般指吸附劑)作為流動相的液相色譜法。

4、正相液相色譜法(normal phase liquid chromatography ，NPLC)：固定相的極性較流動相的極性強的液相色譜法。

5、反相液相色譜法(reversed phase liquid chromatography，RPLC )：固定相的極性較流動相的極性弱的液相色譜法。

6、柱液相色譜法(liquid column chromatography )：在柱管內進行組分分離的液相色譜法。

7、高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC )：具有高分離效能的柱液相色譜法。

8、尺寸排除色譜法(size exclusion chromatography，SEC )：用化學惰性的多孔性物質作為固定相，試樣組分按分子體積(嚴格來講是流體力學體積)進行分離的液相色譜法。

9、凝膠過濾色譜法：(gel filtration chromatography )：水或水溶液作為流動相的體積排除色譜法。

10、凝膠滲透色譜法：(gel permeation chromatography ，GPC)：有機溶劑作為流動相的體積排除色譜法。

11、親和色譜法(affinity chromatography )：用連接在基體上的配位體做固定相，使其與蛋白質或其他大分子發生可逆的高選擇性的相互作用，利用不同親和力進行分離的液相色譜法。

12、離子交換色譜法(ion exchange chromatography ，IEC)：以離子交換作用分離離子型化合物的液相色譜法。

13、離子色譜法(ion chromatography )：以含有某種特定離子的水溶液作為流動相，流出液通過抑制柱(或不通過抑制柱)，在降低流動相背景信號的條件下用於分離離子的液相色譜法。

14、離子抑制色譜法(ion suppression chromatography )：通過調節流動相的PH值來抑制試樣組分的電離，以分離離子型化合物的液相色譜法。

15、離子對色譜法(ion pair chromatography )：用形成離子對化合物進行分離的液相色譜法。16、疏水作用色譜法(hydrophobic interation chromatography )：用適度疏水性的固定相，以含鹽的水溶液作為流動相，借疏水作用分離生物大分子化合物的液相色譜法。

17、制備液相色譜法(preparative liquid chromatography)：用能處理較大量試樣的色譜系統，進行分離、切割和收集組分，以提純化合物的液相色譜法。

18、平面色譜法(planar chronatography)：在平面介質上進行組分分離的色譜法，也叫平板色譜法。

第三部分 常用術語

M：分子量

MC：二氯甲烷(methylene chloride)

MeOH：甲醇(methanol)

MS：質譜

h：峰高

HPLC：高效液相色譜

ID：內徑，dC

A：吸收度(式3.1，3.2);也作面積

ACN：乙腈(acetonitrile)

B(%B)：二元流動相中的強溶劑(% v/v)

C8，C18：烷基鍵合相的鍵長度(八烷基或十八烷基)

CD：環糊精(cyclodextrin)

CV：變異系數(通常以%表示);式15.3

dC：色譜柱內徑(cm)

dP：顆粒直徑(μm)

DAD：二極體陣列檢測器

EC：電化學(檢測器)

F：流速(ml/min)

FL：熒光(檢測器)

GS：梯度斜度參數(式8.2a);k*=20/GS

IEC：離子交換色譜(ion-exchange chromatography)

IPC：離子對色譜 (ion-paire chromatography)

k：保留因子(式2.4)

k*：梯度洗脫中，k的有效值或平均值(式8.1)

ka，kZ：色譜圖中，首峰(a)和末峰(z)的k值

L：色譜柱長度(cm)

LC-MS：液相色譜-質譜

MTBE：甲基-叔-丁醚(methyl-t-butyl ether)

N：色譜柱塔板數(式2.82.8b)

N：噪音(式3.3，圖3.3)

NARP：非水反相HPLC

NPC：正相色譜

P：色譜柱壓力降(通常以psi表示)(式2.9)

pKa：酸或供質子鹼的酸性常數

PAH：多環芳烴(polyaromatic hydrocarbon)

RS：分離度(式2.1)

RI：折光指數

RPC：反相色譜

S：信號;式3.3;圖3.3;以及由式6.1定義的參數

tD：延遲或滯留時間(min，用於梯度洗脫中);等於VD/F

tG：梯度時間(min)

tR：保留時間(min)(圖2.2);等於tO(1+k)

tRa，tRz：色譜圖中首峰(a)與末峰(z)的保留時間，tR(min)(圖8.6a)

tO：色譜柱死時間(min)(式2.5)

t1，t2：相鄰譜峰1與譜峰2的保留時間(min)

TEA：三乙胺(triethylamine)

THF：四氫呋喃(tetrahydrofuran)

UV：紫外光譜

VD：延遲或滯留體積(mL);為梯度混合器與色譜柱人口之間的體積(包括混合器的體積)

Vm：色譜柱死體積(mL)(式2.6);Vm為色譜柱內部的流動相體積，不包括附於固定相上的溶劑

Vmax：最大樣品體積(mL)(式13.1)

Va：樣品體積(mL)

w：重量(mg);也作半峰高處的峰寬(min)

wmax：不超載色譜柱的最大進樣量(mg)(式2.17)

wS：色譜柱的飽和容量(mg)(式13.4)

W：峰底寬(min)(圖2.2)

Wth：大進樣量對峰底寬的貢獻(min)(式13.2)

WO：小進樣量的峰底寬(min)

W1/2：半峰高處的峰寬(min)(圖1.1)

a：分離因子，等於k2/k1，其中k2與k1分別為相鄰譜峰2和譜峰1的k值

△tR：tRz-tR(min)

△%B：梯度洗脫期間，%B的變化

ε：摩爾吸收系數

εo：正相HPLC 中溶劑或溶劑混合液的強度

η：粘度(CP)

<<不常有符號>>

A，B，C：式2.11中的常數;數值A，B與C隨k值而變化，但改變 其它 條件或溶質時基本不變

A，B，C：式2.10中的常數;數值A，B與C隨條件和樣品而變化

A，B，C：式2.10a中的常數;數值A，B與C隨條件和樣品而變化

C：譜峰最大值處的濃度(mol/L)

CO：注入樣品中溶質的濃度(mol/L)

GI：化學電離(MS)

DGA：N，N-二甲基-1-萘醯胺;(也作二甲基苯胺dimethylaniline)

EI：電子電離(MS)

ELS：蒸發光散 射擊 (Evaporative light scattering)

EtOAc：乙酸乙酯(ethyl acetate)

FAB：快速原子轟擊(MS)

FD：場解吸附(MS)

h：摺合板高，等於H/dP(式2.11)

HB：羥基苯甲酸(hydrxybenzoic acid)(圖7.8，7.17與7.19)

HFBA：七氟丁酸(hyptafluorobutyric acid)

IPA：異丙醇(isopropanol)

kW：以水作為流動相的k值(式6.1)

LCEC：液相色譜電化學檢測器

LD：激光解吸(MS)

LSIMS：液態二級離子質譜

MALDI：基質輔助激光解吸電離

MP：對羥苯甲酸甲酯

[P-]m：流動相中離子對試劑P-的濃度(mmol/L)

PAD：脈沖電流分析檢測器

PBP：極性鍵合相

PD：等離子解吸(MS)

PP：對羥苯甲酸丙酯

PTH：乙內醯苯硫脲

R+，R-：分別為陰離子與陽離子離子交換色譜柱中的荷電功能基困(式7.4和7.5[如-N(CH3)3+和-SO3-]

RF：響應因子

TBA+：四丁基銨離子

tBME：見MTBE

TMS：三甲基硅烷(trimethylsilyl;也為C1)

TNB：1，3，5-三硝基苯(1，3，5-trinitrobenzene)

TOF MS：時間飛行質譜

TSP：熱噴霧(MS)

u：流動相通過色譜柱的速度(cm/s);等於L/to

V：峰底寬(mL)

Vc：色譜柱內峰展寬對V的貢獻;也作小樣品量峰底寬(mL)(式2.16)

VR：保留體積(mL)

W：峰寬(min)(式2.12)

Wc，WS，：分別為色譜柱，進樣器，連續管和流通池對W的貢獻(min)

Wlc，Wfc：(式2.12)

X，X1，：無特徵結構的溶質(圖7.8，7.17和7.19)

X2，X3

XB：流動相中的B溶劑的摩爾分數

V：摺合速度，等於udp/Dm(式2.11)

б：高斯曲線的標准偏差;等於峰底的1/4

ι：檢測器響應時間常數(S)

φ：流動相中B溶劑的體積分數;等於0.0

⑦ 離子交換層析與疏水層析有何區別

離子交換層析是利用蛋白質在不同PH帶不同種電荷的方法，利用離子交換的方法分離蛋白的。離子交換內的介質一般是樹脂，陽離子交換型的，使用前樹脂先用鹼處理成鈉型，將氨基酸混合液（pH=2-3)上柱，pH=2-3時，氨基酸主要以陽離子形式存在，與樹脂上的鈉離子發生交換而被「掛」在樹脂上，再用洗脫劑洗脫。不同的氨基酸（帶的電荷不同）與樹脂的親和力不同，要將其分離洗脫下來，需要降低它們之間的親和力，方法是逐步提高洗脫劑的pH和鹽濃度，這樣各種氨基酸將以不同的速度被洗脫下來，反之亦然。不同反荷離子與樹脂親和力是不同的，其強弱關系為陽性競爭離子：Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+陰性競爭離子：I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F-如果某種離子溶液洗脫效果不好，可用另一種親和力強的離子代替之，等電點＞7選擇陽離子交換樹脂，等電點＜7選擇陰離子交換樹脂。

⑧ 離子交換層析與疏水層析有何區別

結合的作用力就不一樣啊

離子交換層析是根據靜電力不同而達到掛柱和洗脫的效果

而疏水層析是因為不同的物質與填料的疏水作用力不一樣，洗脫時間不同，而達到分離的效果

⑨ 疏水相互作用色譜和親和色譜的異同

疏水作用層析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根據分子表面疏水性差別來分離蛋白質和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。蛋白質和多肽等生物大分子的表面常常暴露著一些疏水性基團，我們把這些疏水性基團稱為疏水補丁，疏水補丁可以與疏水性層析介質發生疏水性相互作用而結合。不同的分子由於疏水性不同，它們與疏水性層析介質之間的疏水性作用力強弱不同，疏水作用層析就是依據這一原理分離純化蛋白質和多肽等生物大分子的。
反向液相色譜RPC
一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。它是根據被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物後，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。

疏水作用層析：溶液配置簡單，性狀溫和，能保持蛋白活性，但操作復雜，分離效率低

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⑩ 離子交換色譜和疏水性相互作用色譜的洗脫原理有何異同

離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種專分離屬分析方法。凡在溶液中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法進行分離。現在它不僅適用於無機離子混合物的分離，亦可用於有機物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白質等生物大分子，因此應用范圍較廣。