陰離子交換色譜柱保護液

⑴ 磺酸基陽離子交換鍵合硅膠色譜柱，怎樣維護保養及活化

首先在開始使用系統以前檢查柱子有否微生物生長，否則柱子會堵塞，柱壓會升高到無法接受的水平。然後，不接檢測器，正向安裝色譜柱，使用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗約10倍柱體積。
再連接檢測器，用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。
然後使用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。
最好再確保連接好保護柱（多使用相應柱製造商針對性提供的保護柱），再用選用的洗脫液以0.6ml/min流速平衡1h以上，進樣檢測。同樣，若洗脫液中含有緩沖鹽類，在用分析洗脫液平衡之前，先用不含緩沖鹽的同比例洗脫液過渡，沖洗約10倍柱體積，避免緩沖鹽在分析柱內析出。
特別注意：
①洗脫液要求是新制的緩沖液。對於陽離子交換柱，多用檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液）、鄰苯二甲酸緩沖液，pH范圍從2.5到6.5；對於陰離子交換柱，多用磷酸緩沖液、硝酸銨溶液（1mMol/L），鄰苯二甲酸緩沖液，pH范圍從2.5到6.5。絕對禁止使用水楊酸緩沖液，因水楊酸分解產物會改變固定相的性質。洗脫液在使用以前必須用0.45um濾膜過濾並徹底脫氣，以防止發生檢測和泵送問題。
②提倡在室溫環境使用，為了提高分析的穩定性，可以設置高於室溫5～10℃的柱溫，最好不要在40℃以上使用。
③使用過程中不要超過其耐受最高壓力。
④增加流速或者降低流速要採取小的間隔變化以防止柱床的擾動。更換柱子，必須先降低流量至0，等待洗脫液完全流出柱子，壓力變化到0（約2min）後再更換。
⑤必須防止將來自流動相或者樣品中的疏水性或與流動相極性差別很大的化合物進入色譜柱，特別地，要絕對禁止導入顆粒雜質，以防止操作壓力增高，污染物難以或者不能去除。
（6）分析完畢，凈化程序基本同C18柱，先用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。然後用甲醇以0.6ml/min流速沖洗約10倍柱體積，純甲醇飽和後密封保存即可。（注意：一定要確保在柱子內沒有緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下保存色譜柱。）
（7）長時間保存後重新使用，重復上述（1）～（6）即可。

⑵ 磺酸基陽離子交換鍵合硅膠色譜柱，怎樣維護保養及活化

在使用系統之前，首要任務是檢查色譜柱是否受到微生物污染，否則可能會導致柱子堵塞，使得柱壓升高到無法接受的水平。首先，不連接檢測器，正向安裝色譜柱，使用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗大約10倍柱體積。接著，連接檢測器，繼續使用純甲醇以相同流速沖洗約20倍柱體積。隨後，改用去離子水以相同流速沖洗約20倍柱體積。

為確保色譜柱的最佳性能，建議連接保護柱（通常由製造商提供），然後用選定的洗脫液以0.6ml/min流速平衡柱子至少1小時。在用分析洗脫液進行平衡前，如果洗脫液中含有緩沖鹽，應先使用不含緩沖鹽的同比例洗脫液過渡，沖洗約10倍柱體積，以避免緩沖鹽在分析柱內析出。

在進行洗脫液選擇時，需注意陽離子交換柱多使用檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液）、鄰苯二甲酸緩沖液，pH范圍從2.5到6.5；陰離子交換柱則多使用磷酸緩沖液、硝酸銨溶液（1mMol/L），鄰苯二甲酸緩沖液，pH范圍同樣從2.5到6.5。絕對禁止使用水楊酸緩沖液，因為水楊酸的分解產物會改變固定相的性質。洗脫液在使用前必須通過0.45um濾膜過濾並徹底脫氣，以避免檢測和泵送問題。

為了提高分析的穩定性，建議在室溫條件下使用色譜柱，如果需要，可以將柱溫設置為高於室溫5～10℃。避免在40℃以上使用，以防損壞色譜柱。

在使用過程中，切勿超過色譜柱的耐受最高壓力。調整流速時，應採取小的間隔變化以避免柱床擾動。更換柱子時，務必先將流量降至0，等待洗脫液完全流出柱子，壓力變化到0（約2min）後再進行更換。

防止將來自流動相或樣品中的疏水性或與流動相極性差別很大的化合物進入色譜柱，尤其要避免導入顆粒雜質，以防止操作壓力增高，污染物難以或不能去除。

分析完畢後，採用與C18柱類似的凈化程序，首先用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積，然後用甲醇以相同流速沖洗約10倍柱體積，確保純甲醇飽和後密封保存。

對於長時間保存後的重新使用，重復上述步驟即可。

⑶ 【儀器設備筆記】離子交換色譜 - 定義、原理、部件、步驟、用途

色譜法是一種用於化合物分離的技術，通過分析化合物與惰性基質的相對相互作用，將化合物混合物分解為各個組分。

離子交換色譜是一種特定類型的色譜法，其原理基於離子和極性分子與離子交換劑的相互作用進行分離。通過利用目標離子與離子交換劑上的離子進行可逆交換，實現分離過程。離子交換色譜包括陽離子交換劑和陰離子交換劑兩類，它們分別吸引帶正電和帶負電的離子。常見形式為柱層析，也有薄層色譜應用離子交換原理。

離子交換色譜的工作原理基於帶相反電荷的固定相（離子交換劑）與分析物之間的吸引力。離子交換劑表面連接有帶電基團，這些基團可以帶正電或帶負電。當溶於水溶液時，離子交換劑的帶電基團會吸引帶相反電荷的離子，形成離子雲。在此過程中，離子可以進行可逆交換，不改變基質狀態和性質。

離子交換色譜的儀器包括泵、進樣器、色譜柱、抑制器、檢測器和記錄器或數據系統。泵提供連續恆定的洗脫液流，進樣器用於樣品引入，色譜柱材料根據最終用途和應用領域有所不同，可以是不銹鋼、鈦、玻璃或惰性塑料。保護柱用於延長分離柱的壽命和實用性。抑制器降低背景電導率，提高被測離子的電導率測量靈敏度。電導檢測器是最常用的檢測器類型。

離子交換層析步驟包括柱填充離子交換劑、樣品加入、緩沖液添加。常用的緩沖液包括tris、吡啶、醋酸鹽、檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖液。具有高親和力的顆粒將與緩沖液一起從柱子上下來，然後使用相應緩沖液進行緊密結合顆粒的分離。分離後的粒子通過光譜分析進行進一步研究。

離子交換色譜的應用包括氨基酸混合物的常規分析、水凈化、核酸水解產物的分析、海洋中微量金屬的收集、月球岩石和地球稀有微量元素的分析。它是分離帶電粒子的有效方法，適用於幾乎所有類型的帶電分子，包括大蛋白質、小核苷酸和氨基酸。無機離子也可通過離子交換色譜法進行分離。

離子交換色譜的優點在於其廣泛的適用性和高效性，但存在緩沖液要求的局限性。

⑷ 離交柱陰柱難淋洗怎麼辦

陰離子交換柱的清洗方式通用有三種，分別用於清洗酸溶性、鹼溶性或有機污染物，在清洗過程中必須要確保嚴格按照清洗過程進行，否則會引起色譜柱的局部高壓而損壞色譜柱。對於有機溶劑清洗色譜柱，需要逐步減少有機溶劑的量以避免由於混合的流動相黏度的變化。

（一）選擇合適的清洗溶劑

1、對高價親水污染物：用1~3mol/l的鹽酸做淋洗液。

2、對低價親水污染物：用10倍的淋洗液。

3、有機污染物：有機污染物會引起色譜柱效降低，可以採用兼容的有機溶劑清洗，有時也可以採用高濃度的鹽酸與有機溶劑混合清洗則更有效。

4、對金屬污染物：會引起色譜峰不對稱性，可採用絡合劑酸類，如0.2mol/l草酸。

（二）清洗過程

1、配製500mL合適的清洗溶液。

2、斷開抑制器中，分別清洗保護住和分離柱，如果分離柱和保護住串聯清洗，則將保護柱接在分離柱之後。

3、設置流速對2mm色譜柱採用0.5ml/min，而對4mm色譜柱採用2ml/min。

4、用二次去離子水沖洗色譜柱15min。

5、用清洗液清洗色譜柱60min。

6、用二次去離子水沖洗色譜柱15min。

7、連接抑制器，用淋洗液平衡色譜柱。