氯化鋰洗滌過濾

A. 怎麼從氯化鈣和氯化鋰混合物中分離出氯化理

鈣離子可以通過轉化為難容的氫氧化鈣，再通過過濾，分理處氯化鋰
①向混合液中加入過量的氫氧化鋰，充分攪拌Ca2+ + 2OH- = Ca(OH)2 ↓
②待沉澱充分析出後過濾，取濾液
③加入足量的HCl中和濾液中的OH-
通過上述步驟可分理處的氯化鋰。

B. 氯化鋰中的鈉是怎麼除去的，或氯化鋰是怎麼提純的

是在60～95℃溫度下向第一步除去雜質的氯化鋰溶液中,加入粉末狀的無機離子交換劑Li1.3Ti1.7Al0.3(PO4)3或Li1.3Zr1.7Al0.3(PO4)3,並經膜過濾深度除去雜質鈉,再經乾燥獲得純的氯化鋰產品, 網路所得

C. 3mol氯化鋰填充液怎麼配製

假設配1L該溶液，步驟如下：
1. 計算：配製1L該溶液需要氯化鋰2mol，即84.8g
2. 稱量：稱量84.8g氯化鋰
3. 溶解：在燒杯中加入適量乙醇溶解氯化鋰，恢復至室溫
4. 轉移：將燒杯內冷卻後的溶液沿玻璃棒小心轉入1L的容量瓶中（玻璃棒下端應靠在容量瓶刻度線以下）
5. 洗滌：用乙醇洗滌燒杯和玻璃棒2～3次，並將洗滌液轉入容器中，振盪，使溶液混合均勻。
6. 定容：向容量瓶中加乙醇至刻度線以下1cm～2cm處時，改用膠頭滴管加乙醇，使溶液凹面恰好與刻度線相切。
7. 搖勻：蓋好瓶塞，用食指頂住瓶塞，另一隻手的手指托住瓶底，反復上下顛倒，使溶液混合均勻。
最後將配製好的溶液倒入試劑瓶中，貼好標簽。

D. 在氯化鈣和氯化鋰混合飽和溶液中，能否用濃縮的方法，得到氯化鋰的結晶

不能、兩種都是鹽溶液，先將鈣離子沉澱下來，過濾後再蒸發結晶

E. 1mol l的氯化鋰乙醇溶液如何配置

假設配1l該溶液，步驟如下：
1.
計算：配製1l該溶液需要氯化鋰2mol，即84.8g
2.
稱量：稱量84.8g氯化鋰
3.
溶解：在燒杯中加入適量乙醇溶解氯化鋰，恢復至室溫
4.
轉移：將燒杯內冷卻後的溶液沿玻璃棒小心轉入1l的容量瓶中（玻璃棒下端應靠在容量瓶刻度線以下）
5.
洗滌：用乙醇洗滌燒杯和玻璃棒2～3次，並將洗滌液轉入容器中，振盪，使溶液混合均勻。
6.
定容：向容量瓶中加乙醇至刻度線以下1cm～2cm處時，改用膠頭滴管加乙醇，使溶液凹面恰好與刻度線相切。
7.
搖勻：蓋好瓶塞，用食指頂住瓶塞，另一隻手的手指托住瓶底，反復上下顛倒，使溶液混合均勻。
最後將配製好的溶液倒入試劑瓶中，貼好標簽。
配製一定物質的量濃度的溶液的步驟
（1）計算：計算配製所需固體溶質的質量或液體濃溶液的體積。
（2）稱量：用托盤天平稱量固體質量或用量筒（應用移液管，但中學階段一般用量筒）量取液體體積。
（3）溶解：在燒杯中溶解或稀釋溶質，恢復至室溫（如不能完全溶解可適[1] 當加熱）。檢查容量瓶是否漏水
（4）轉移：將燒杯內冷卻後的溶液沿玻璃棒小心轉入一定體積的容量瓶中（玻璃棒下端應靠在容量瓶刻度線以下）。
（5）洗滌：用蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2～3次，並將洗滌液轉入容器中，振盪，使溶液混合均勻。
（6）定容：向容量瓶中加水至刻度線以下1cm～2cm處時，改用膠頭滴管加水，使溶液凹面恰好與刻度線相切。
（7）搖勻：蓋好瓶塞，用食指頂住瓶塞，另一隻手的手指托住瓶底，反復上下顛倒，使溶液混合均勻。
最後將配製好的溶液倒入試劑瓶中，貼好標簽。

F. 新型鋰離子電池在新能源的開發中佔有重要地位，可用作節能環保電動汽車的動力電池．磷酸亞鐵鋰（LiFePO 4

（1）亞鐵離子具有強還原性，制備磷酸亞鐵鋰的過程都必須在惰性氣體氛圍中進行，其原因是為了防止亞鐵化合物被氧化，故答案為：為了防止亞鐵化合物被氧化； （2）將碳酸鋰、乙酸亞鐵、磷酸二氫銨在800℃左右、惰性氣體氛圍中煅燒製得晶態磷酸亞鐵鋰、乙酸及其它產物均以氣體逸出．根據題意和元素守恆，可得其他產物為：CO 2 、H 2 O和NH 3 ，故答案為：CO 2 ；H 2 O；NH 3 ； （3）將一定濃度的磷酸二氫銨、氯化鋰混合溶液作為電解液，以鐵棒為陽極，石墨為陰極，電解析出磷酸亞鐵鋰沉澱．陽極鐵失電子生成磷酸亞鐵鋰，電極反應式為Fe+H 2 PO 4 - +Li + -2e - =LiFePO 4 +2H + ， 故答案為：Fe+H 2 PO 4 - +Li + -2e - =LiFePO 4 +2H + ； （4）M具有酯基，在鹼性條件下可發生水解，M與足量氧化鈉溶液反應的化學方程式： ； （5）鋰離子電池在充電過程中，陽極的磷酸亞鐵鋰生成磷酸鐵，電極反應為LiFePO 4 ═FePO 4 +Li + +e - ，該電池放電時，正極發生還原反應，與充電時的陽極反應相反，電極反應式為 FePO 4 +Li + +e - ═LiFePO 4 ，故答案為：FePO 4 +Li + +e - ═LiFePO 4 ．

G. 2mol/l的氯化鋰的乙醇溶液怎麼配

假設配1L該溶液，步驟如下：

1. 計算：配製1L該溶液需要氯化鋰2mol，即84.8g

2. 稱量：稱量84.8g氯化鋰

3. 溶解：在燒杯中加入適量乙醇溶解氯化鋰，恢復至室溫

4. 轉移：將燒杯內冷卻後的溶液沿玻璃棒小心轉入1L的容量瓶中（玻璃棒下端應靠在容量瓶刻度線以下）

5. 洗滌：用乙醇洗滌燒杯和玻璃棒2～3次，並將洗滌液轉入容器中，振盪，使溶液混合均勻。

6. 定容：向容量瓶中加乙醇至刻度線以下1cm～2cm處時，改用膠頭滴管加乙醇，使溶液凹面恰好與刻度線相切。

7. 搖勻：蓋好瓶塞，用食指頂住瓶塞，另一隻手的手指托住瓶底，反復上下顛倒，使溶液混合均勻。

   最後將配製好的溶液倒入試劑瓶中，貼好標簽。

配製一定物質的量濃度的溶液的步驟

（1）計算：計算配製所需固體溶質的質量或液體濃溶液的體積。

（2）稱量：用托盤天平稱量固體質量或用量筒（應用移液管，但中學階段一般用量筒）量取液體體積。

（3）溶解：在燒杯中溶解或稀釋溶質，恢復至室溫（如不能完全溶解可適[1]當加熱）。檢查容量瓶是否漏水

（4）轉移：將燒杯內冷卻後的溶液沿玻璃棒小心轉入一定體積的容量瓶中（玻璃棒下端應靠在容量瓶刻度線以下）。

（5）洗滌：用蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2～3次，並將洗滌液轉入容器中，振盪，使溶液混合均勻。

（6）定容：向容量瓶中加水至刻度線以下1cm～2cm處時，改用膠頭滴管加水，使溶液凹面恰好與刻度線相切。

（7）搖勻：蓋好瓶塞，用食指頂住瓶塞，另一隻手的手指托住瓶底，反復上下顛倒，使溶液混合均勻。

最後將配製好的溶液倒入試劑瓶中，貼好標簽。

H. 簡述熔鹽法的原理

1熔鹽法的定義熔鹽法: 也稱為助熔劑法或熔劑法。通過在常規固相反應中引入低熔點鹽作為助熔劑來合成物質的一種新的合成方法。低熔點鹽的引入導致合成過程中有液相出現,大大加快了離子的擴散速率,因此該法相對於常規固相法而言,具有工藝簡單、合成溫度低、保溫時間短等特點熔鹽法的原理?原料在高溫下溶解於低熔點的助熔劑中,使之形成飽和溶液,然後通過緩慢降溫或在恆定溫度下蒸發熔劑等方法,使熔融液處於過飽和狀態,從而使晶體析出生長的方法?助熔劑通常為無機鹽類?了解相圖,有助於理解熔鹽法熔鹽法的原理?同成分熔融的晶體, 從相同組成的液體中析出時,唯一需要知道的是熔點?在「助熔劑生長」法中, 液體和結晶相具有不同的組成熔鹽法的原理?復雜相圖中,固液異組成熔融相的結晶?若制備 C,需注意冷卻液相的組成熔鹽法的分類?助熔劑法根據晶體成核及生長的方式不同分為兩大類: 自發成核法和籽晶生長法 1、自發成核法按照獲得過飽和度方法的不同助熔劑法又可分為緩冷法、反應法和蒸發法。這些方法中以緩冷法設備最為簡單, 使用最普遍。緩冷法是在高溫下,在晶體材料全部熔融於助熔劑中之後,緩慢地降溫冷卻,使晶體從飽和熔體中自發成核並逐漸成長的方法熔鹽法的分類 2、籽晶生長法籽晶生長法是在熔體中加入籽晶的晶體生長方法。主要目的是克服自發成核時晶粒過多的缺點,在原料全部熔融於助熔劑中並成為過飽和溶液後,晶體在籽晶上結晶生長。根據晶體生長的工藝過程不同,籽晶生長法又可分為以下幾種方法: A.籽晶旋轉法:由於助熔劑熔融後粘度較大,熔體向籽晶擴散比較困難,而採用籽晶旋轉的方法可以起到攪拌作用,使晶體生長較快,且能減少包裹體。此法曾用於生長"卡善"紅寶石。熔鹽法的分類 B.頂部籽晶旋轉提拉法:這是助熔劑籽晶旋轉法與熔體提拉法相結合的方法。頂部籽晶旋轉提拉法?其原理是:原料在坩堝底部高溫區熔融於助熔劑中,形成飽和熔融液,在旋轉攪拌作用下擴散和對流到頂部相對低溫區,形成過飽和熔液, 在籽晶上結晶生長晶體。隨著籽晶的不斷旋轉和提拉,晶體在籽晶上逐漸長大。?該方法除具有籽晶旋轉法的優點外,還可避免熱應力和助熔劑固化加給晶體的應力。另外, 晶體生長完畢後,剩餘熔體可再加晶體材料和助熔劑繼續使用熔鹽法的分類 C.底部籽晶水冷法:助熔劑揮發性高,頂部籽晶生長難以控制,晶體質量也不好。為了克服這些缺點, 採用底部籽晶水冷技術, 則能獲得良好的晶體。水冷保證了籽晶生長,抑制了熔體表面和坩堝其它部位的成核。這是因為水冷部位才能形成過飽和熔體, 從而保證了晶體在籽晶上不斷成長

I. 如何防止提取過程中RNA的降解

通過變性劑破碎細胞或者組織，然後經過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經過沉澱，洗滌，晾乾，最後溶解。但是由於RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。0T3z(F&_,D6c%^"h6YA6_RNA提取的一般步驟-O:Y+x$p#s8U4M9S所有RNA的提取過程中都有五個關鍵點，即：樣品細胞或組織的有效破碎；有效地使核蛋白復合體變性；對內源RNA酶的有效抑制；有效地將RNA從DNA和蛋白混合物中分離；對於多糖含量高的樣品還牽涉到多糖雜質的有效除去。但其中最關鍵的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前階段主要可採用兩種途徑:提取總核酸，再用氯化鋰將RNA沉澱出來；直接在酸性條件下抽提，酸性下DNA與蛋白質進入有機相而RNA留在水相。第一種提取方法將導致小分子量RNA的丟失，目前該方法的使用頻率已很低。(O(g;^+K)f+i&]%P實驗步驟：*l&d6s5e(q1F(g2|j,^0s破碎組織→分離RNA→沉澱RNA→洗滌RNA→融解RNA→保存RNA。6D8}.Q;Y,g*X1、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行，可以用鹽酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎組織，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。"s%f,`0[1d*m!]0e2、分離RNA一般用酚、氯仿等有機溶劑，加入少量異戊醇，經過此步，離心，RNA一般分布於上層，與蛋白層分開。&X.P)i)Y;L#u/[3、沉澱RNA一般用乙醇、3MNaAc（pH-5.2）或異丙醇。2@0d&z7?+i,g1@4、洗滌RNA使用70％乙醇洗滌，有時，為避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗滌之後可以晾乾或者烤乾乙醇，但是不能過於乾燥，否則不易溶解。3@%V"o9v+I1J2o9k"z5、融解RNA一般使用TE。;L5f.n6}(S1t%Z&J6、保存RNA應該盡量低溫。為了防止痕量RNase的污染，從富含RNase的樣品（如胰臟、肝臟）中分離到的RNA需要貯存在甲醛中以保存高質量的RNA，對於長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA，在水中貯存一個星期就基本降解了，而從大鼠脾臟中提取的RNA，在水中保存3年仍保持穩定。另外，長度大於4kb的轉錄本對於痕量RNase的降解比小轉錄本更敏感。為了增加貯存RNA樣品的穩定性，可以將RNA溶解在去離子的甲醯胺中，存於-70℃。用於保存RNA的甲醯胺一定不能含有降解RNA的雜物。來源於胰臟的RNA至少可以在甲醯胺中保存一年。當准備使用RNA時，可以使用下列方法沉澱RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g離心5分鍾。&P3[7m*^$U$_"?:F"xu*N(?(I氯化鋰法提取總RNA："u;}'I!r'^'^&l本方法用高濃度尿素變性蛋白並抑制RNA酶，用氯化鋰選擇沉澱RNA，其特別適合於從大量樣品中提取少量組織RNA，具有快速簡潔的長處，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片斷丟失的缺陷。#~*S:}9`*r4Z3P試驗試劑："d$r6Q+_.I8Q1、氯化鋰/尿素溶液【氯化鋰126g(3M)尿素、360g(6M)加水至1L，過濾滅菌】7_8w1t"o9a'q!i4Z2、懸浮液【10mM?Tris-HCL(pH7.6),1mM?EDTA(pH8,0),0.5%SDS】!m8Q4R,]&y:b#`7d試驗步驟：7[6?$`*};o7_Z'{1、對於大量組織或細胞，則每克組織或細胞加入5－10ml氯化鋰－尿素溶液，勻槳器高速勻槳2分鍾；對於少量細胞（107個細胞/ml），則每克組織或細胞加入0.5ml氯化鋰－尿素溶液手工勻槳，並轉移至Eppendof管中。&Y)b:E,Q"l/^Q:\$s2、勻槳液在0－4℃放置4小時後，12000g離心30分鍾。x-C6D-N/N0K!t2a3、取沉澱，加入原勻槳液1/2體積的氯化鋰－尿素溶液，重復步驟2。)y-x)S0K9y6j,e4、沉澱用原勻槳液1/2體積的氯化鋰－尿素溶液復溶後，加入等體積酚/氯仿/異戊醇在室溫放置15－30分鍾並不時搖動混勻，4000g離心5分鍾。3d2v'i1~(~*D5、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，－20℃放置1小時，5000g離心。L4a'Q4u"l:a*K%Z$?(e6、70％乙醇洗沉澱一次。真空乾燥。3};r0[/Q'G9q7、RNA溶解液溶解沉澱，得RNA，分裝，於－70℃保存。0f.X%R(H%B7g!y7j5u$C'|)[%~!J3D:Q蛋白酶－熱酚法6|"^0b*[)P3S*c4b4H4l本方法適合於病毒RNA的提取*I(i+b#r!K試驗試劑：$?4[7H9`)J1、蛋白酶K（終濃度50ug/ml）,J5pl6V/t7[/I2、2×緩沖液：1%SDS?20mMTris-HCL(pH7.6)?0.2MnaCL9h,p]y+\$Z)O試驗步驟：#W3v8G1[$]5y1、提純病毒液中加入等體積緩沖液、蛋白酶K,37℃40-50分鍾。-K0p/E'G0M#Q-z7n,{#d2、加入等體積65℃預熱的酚溶液，輕徭,在65℃保溫5分鍾後再輕徭。w!`;W(~,E:i3^3、離心，取上清，氯仿抽提一次。,|(Z0d;j2@7m+d2Q&xH4、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，－20℃放置1小時，5000g離心(10000g,10min)。7[/w,h2d6U$k5、70％乙醇洗沉澱一次。真空乾燥。%A5Y;{(w%]3a*y,Oe)P6、RNA溶解液溶解沉澱，得RNA，分裝，於－70℃保存。植物RNA提取過程中難點的相應對策植物RNA提取過程中難點的相應對策)o5B7d/Q3_酚類化合物的干擾及對策：a9D*Z3K?7W許多植物組織特別是植物的果實（如蘋果、櫻桃、李子、葡萄等）和樹木類植物中富含酚類化合物。酚類物質的含量會隨著植物的生長而增加。因而從幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外，針葉類植物的針葉中多酚的含量比在落葉植物的葉子中要高得多。在植物材料勻漿時，酚類物質會釋放出來，氧化後使勻漿液變為褐色，並隨氧化程度的增加而加深，這一現象被稱為褐化效應（browningeffect）。被氧化的酚類化合物（如醌類）能與RNA穩定地結合，從而影響RNA的分離純化。但Newbury等發現RNA提取的難易程度與材料中酚類物質的總量之間並無相關性，因此認為不是所有的酚類化合物都影響RNA的提取。但一般認為所謂的「縮合鞣質」即聚合多羥基黃酮醇類物質（如原花色素類物質）是影響RNA提取的一類化合物。目前去除酚類化合物的一般途徑是在提取的初始階段防止其被氧化，然後再將其與RNA分開。9b0S!}0U6|9k/l!v"vg1~/@防止酚類化合物被氧化的方法："v;y,a4k7n/Z1、還原劑法：一般在提取緩沖液中加入(-巰基乙醇、二硫蘇糖醇（DTT）或半胱氨酸來防止酚類物質被氧化，有時提取液中(-巰基乙醇的濃度可高達2％。(-巰基乙醇等還可以打斷多酚氧化酶的二硫鍵而使之失活。Su等認為在過夜沉澱RNA時加入(-巰基乙醇（終濃度1％）可以防止在此過程中酚類化合物的氧化。硼氫化鈉（NaBH4）是一種可還原醌的還原劑，用它處理後提取緩沖液的褐色可被消減，醌類化合物可被還原成多酚化合物。&H.z.p+~&t%t5G&G1M-P/q!u2、螯合劑法：螯合劑聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）中的CO－N＝基有很強的結合多酚化合物的能力，其結合能力隨著多酚化合物中芳環羥基數量的增加而加強。原花色素類物質中含有許多芳環上的羥基，因而可以與PVP或不溶性的PVPP形成穩定的復合物，使原花色素類物質不能成為多酚氧化酶的底物而被氧化，並可以在以後的抽提步驟中被除去。用PVP去除多酚時pH值是一個重要的影響因素，在pH8.0以上時PVP結合多酚的能力會迅速降低〔11〕。當原花色素類物質量較大時，單獨使用PVPP無法去除所有的這類化合物，因而需要與其它方法結合使用。p%N0w/t7r3、Tris-硼酸法：如果提取緩沖液中含有Tris-硼酸（pH7.5），其中的硼酸可以與酚類化合物依*氫鍵形成復合物，從而抑制了酚類物質的氧化及其與RNA的結合。這一方法十分有效，所以Lбpez-Gбmez等在提取緩沖液中不再加入其它還原劑。但如果Tris-硼酸濃度過高（＞0.2M）則會影響RNA的回收率。#p8]0^8K3a4、牛血清白蛋白（BSA）法：原花色素類物質與BSA間可產生類似於抗原－抗體間的相互作用，形成可溶性的或不溶性的復合物，減小了原花色素類物質與RNA結合的機會，因此提高了RNA的產量。BSA與PVPP結合使用提取效果會更好。由於BSA中往往含有RNase，因而在使用時要加入肝素以抑制RNase的活性。)~#H/y(P7Q)j4G*w1G8l5、丙酮法：Schneiderbauer等用-70℃的丙酮抽提冷凍研磨後的植物材料，可以有效地從雲杉、松樹、山毛櫸等富含酚類化合物的植物材料中分離到高質量的RNA。@+?-X/V9z8T8H:B3C!W'C酚類化合物的去除：&z#h)G0H&]$I1N"f.l9N通過Li+或Ca2+沉澱RNA的方法可以將未被氧化的酚類化合物去除。與PVP、不溶性PVPP或BSA結合的多酚，可以直接通過離心去除掉，或在苯酚、氯仿抽提時除去。Manning利用高濃度的2-丁氧乙醇（50％）來沉澱RNA，而多酚溶解於2-丁氧乙醇中而被除去。然後用含50％2-丁氧乙醇的緩沖液洗滌RNA沉澱以去除殘留的多酚。他認為即使多酚被氧化，其氧化產物仍可以溶解在高濃度2-丁氧乙醇溶液中而被去除，無需再用NaBH4來處理。5C6Y8a1SV:`2~多糖的干擾及對策：6I-b3R4~$T&O多糖的污染是提取植物RNA時常遇到的另一個棘手的問題。植物組織中往往富含多糖，而多糖的許多理化性質與RNA很相似，因此很難將它們分開。在去除多糖的同時RNA也被裹攜走了，造成RNA產量的減少；而在沉澱RNA時，也產生多糖的凝膠狀沉澱，這種含有多糖的RNA沉澱難溶於水，或溶解後產生粘稠狀的溶液。由於多糖可以抑制許多酶的活性，因此污染了多糖的RNA樣品無法用於進一步的分子生物學研究。在常規的方法中，通過SDS-鹽酸胍處理可以部分去除一些多糖；在高濃度Na+或K+離子存在條件下，通過苯酚、氯仿抽提可以除去一些多糖；通過LiCl沉澱RNA也可以將部分多糖留在上清液中。但即使通過這些步驟仍會發現有相當多的多糖與RNA混雜在一起，所以還需要用更有效的方法來解決植物RNA分離純化時多糖污染的問題。7['X/e,d8x(B-p(|9C&n用低濃度乙醇沉澱多糖是一個去除多糖效果較好的方法。在RNA提取液或溶液中緩慢加入無水乙醇至終濃度10％～30％，可以使多糖沉澱下來，而RNA仍保留於溶液中。一般都是在植物材料的勻漿液中加入乙醇，如Lewinsohn等在從裸子植物的木質莖中提取RNA時，在勻漿上清液中加入乙醇至終濃度10％以沉澱多糖。但Tesniere等在從葡萄漿果組織中提取RNA時，是在用CsCl超離心，乙醇沉澱之後的RNA溶液中加入終濃度30％乙醇來沉澱多糖的，進一步純化了RNA樣品。!i5b5m*z9G8M4~-N/D另一個常用的方法是醋酸鉀沉澱多糖法。Bahloul等在提取雲杉組織的RNA時在勻漿上清液中加入1/3體積的5M醋酸鉀（pH4.8）溶液以沉澱多糖；Ainsworth在提取酸模植物花組織的RNA時加入的是1/5體積的5M醋酸鉀（pH4.8）溶液。Hughes等在提取棉花葉和花粉的RNA時是加1/3體積的8.5M醋酸鉀（pH6.5）溶液到勻漿液中以除去多糖等雜質。在提取某些植物材料的RNA時，是將上述兩種方法結合使用。如Lбpez-Gбmez等在提取芒果中果皮的RNA時，是在勻漿液中加入0.25體積的無水乙醇和0.11體積的5M醋酸鉀溶液以去除多糖雜質。Su等在去除褐藻的多糖時，單獨使用乙醇或醋酸鉀都無效，只有兩者結合使用效果最佳。6c9|5q1b9[5l1s+nFang等認為緩沖液中含有高濃度的NaCl有助於去除多糖。Chang等在提取松樹RNA時，緩沖液中NaCl的濃度為2.0M和1.0M，通過氯仿抽提和乙醇沉澱RNA將RNA與多糖分離。Manning是將胡蘿卜種子等材料苯酚提取後的上清液稀釋，調節Na+離子濃度至80mM，然後加入0.4體積的2-丁氧乙醇來沉澱去除多糖。3B1h#M'{+{0U%U,K2@,v蛋白雜質的影響及對策：$@-G5o(f1s9_2V*G2n/^蛋白質是污染RNA樣品的又一個重要因素。由於RNase和多酚氧化酶亦屬於蛋白質，因而要獲得完整的、高質量的RNA就必須有效地去除蛋白雜質。常規的方法是在冷凍的條件下研磨植物材料以抑制RNase等的活性；提取緩沖液中含有蛋白質變性劑，如苯酚、胍、SDS、十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）等，這樣在勻漿時可以使蛋白質變性，凝聚；有的方法是利用蛋白酶K來降解蛋白雜質。進一步可以用苯酚、氯仿抽提去除蛋白質。'T7v(F1J9@+EWilcockson利用蛋白質與RNA在高氯酸鈉溶液中的溶解度不同將它們分離。在70％高氯酸鈉溶液中，RNA的溶解度大於蛋白質的溶解度，因而將大部分蛋白質沉澱下來。接著在離心上清液中加入兩倍體積的無水乙醇，這時RNA能沉澱下來而能溶於70％高氯酸鈉溶液中的殘留蛋白質仍然留在上清液中。這樣可以除去絕大部分的蛋白質。3qe/\*I"A&@次級代謝產物的影響及對策：:N3|)NfK#n;p'f6h0J2A0{從植物組織中提取高質量RNA的另一個難點是許多高等植物組織尤其是成熟組織能產生某些水溶性的次級代謝產物，這些次級代謝產物很容易與RNA結合並與RNA共同被抽提出來而阻礙具有生物活性的RNA的分離。因不能確定這些次級產物具體是什麼物質，所以，目前還沒有什麼特殊的方法來解決這個問題。Baker等綜合Hughes等的選擇性沉澱法、Chirgwin的氯化銫梯度離心法和Iversen等的RNA回收方法純化了松樹種子、成熟松樹針葉等植物組織的RNA。(Ms5O%f!H-Q*\(m"`(}由於植物組織特別是高等植物組織細胞內外組成成分的復雜多樣性，使得植物組織RNA的提取相對於其它生物材料來說要困難的多。實踐中經常會發現，即使同一種植物的不同組織其RNA提取方法會有很大的不同；含有某種干擾因素的不同植物材料，其適用的RNA提取方法可能不同；即使是同一種植物同一種組織材料，但來源於不同基因型植株，其RNA提取方法也可能不一樣。所以，對於某一植物或其組織來說，其相應的RNA提取方法必需經過摸索和實踐才能確立。#S0a#G7L3S&A隨著植物分子生物學研究領域的拓寬，可以肯定地說，在作為其研究基礎的植物材料RNA提取過程中還會出現新的難點，但隨著不斷地探索和經驗的積累，科學工作者們一定會迅速地解決這些難點，為植物分子生物學的發展鋪平道路。植物RNA提取中的一些特殊方法植物RNA提取中的一些特殊方法$e*[2U(E%h'[多酚類植物的RNA提取：!j!d,]2V(R!B&o蘋果棉花等多酚類植物提取RNA用TRIZOL一般提不出來。這個方法是驗證過有效的,提取的RNA純度不是特別高,但是用作northern足夠。6j&d2u(\6W8_&o4E1X1t實驗試劑：#s7s8H!R#W1y#g提取buffer200ml：NaCl1.1688g100mMTris2.4228g10mM(tris-HCl8.0)EDTA5.8450g10mMSDS2.0000g1%NaOH調至8.0,定至200ml,加200ulDEPC融解.*j)s;t2@)t4W'F試驗步驟：!Ta0I*C(w5S"E*A'W1、1.5ml離心管用液N2冷凍吼加入0.1g樣品,立即加入500ul酚氯仿,再加入500ul提取buffer,劇烈振盪1-2min,冰上放置5min。"F3S0V5@0s7i1T2、4度12000rpm離心15min,上清轉入新管,加氯仿異戊醇抽提一次。)H'L7d#d"y8@3、取600ul異丙醇,-20度沉澱20min.&w:m2r:I4\4l#J4、12000rpm離心10min。!I.Y.\8b7A5、沉澱用70度乙醇洗。k!T.D1[0w+?)_0D5?6、8000rpm5min。"A;y#}'F(`5}6I+N!x7、沉澱晾乾,溶於30ulDEPC水。;^0Q-R+`5j(n'['m9M#m/r3o2O!T6z$`1m&e.^銀杏等木本裸子植物的RNA提取方法：&Ai&V!H0`?6R銀杏、香機等木本裸子植物，酚類和多糖等次生物質含量較多，對RNA的分離和純化有很大幹擾，嚴重影響了提取RNA的質量和產量，給相關的分子生物學實驗的進行帶來阻礙。目前，RNA的提取方法很多，採取常規的Trizol試劑盒、SDS等方法不能提取銀杏RNA，而ShujunChang等(1993)的CTAB法，提取RNA質量也較差，降解也十分嚴重。對其提取步驟進行改進，得到質量較高的銀杏RNA樣品。/s4i*Vk8S)x試驗試劑：!]!M(q#E7N3t;`#i.m([1、1Mtris:12.11gTris，溶於60mL水中，用濃鹽酸調至Ph8.0，定容至lOOmL.用滅菌的DEPC水溶解。`4c9{)p2\4t2、500mMEDTA:18.61gEDTA"H2O加入80mL水中，攪拌溶解，用NaOH調pH至8.0，定容至100mL。;V#x*j!H4y!G4M#q3c5P3、10mol/LLiCL:42.4gLiCL,100mL水溶解即可。9i)@a'\&w+cp*g4、提取緩沖液(DEPC水處理):2%CTAB（蛋白質變性劑）.2%PVPK30（去除多酚類物質）100mMTris-HCL(Ph8.0)25mMEDTA（金屬鰲合劑）2.0MNaCL（去除多糖和CTAB）配法:2gCTAB,2gPVP,10mL1mol/Ltris,5mL500mMEDTA,11.7gNaCL,定容到100mL。)o+\5E!X;O#A(M+P8H*K9n0q5、亞精胺(提取時加少量)（RNA酶抑制劑）#J9g6O/h(u'd6、4%0一疏基乙醇(提取時加)（去除多酚類物質）'De,d(J.K$z!O9f7、氯仿異戊醇(24:1)（抽提蛋白質）)U)A+]4\#Q8、10MLiCL（沉澱大分子RNA）7M+b)g4J4m5C0f-\9、SSTE（溶解RNA）1.0MNaCL0.5%SDS1mMEDTA(PH8.0)10mMTrisHCL(pH8）配法:2.9gNaCL,0.25gSDS,0.5mL1Mtris,100uL500mMEDTA,pH8.0,定容至50mL。.m5z+J3X0V&\6e7Y#R試驗准備：;_5z9}"f%q6t1、研缽和玻璃器皿用錫紙包好，200℃以上向溫烘烤2小時以上，或180*C高溫烘烤4小時。;X7n3w,W2}9M2、塑料製品(槍頭和離心管)最好用新的，並且用報紙包好，121'C高壓滅菌，滅菌40min，或連續兩次121'C高壓滅菌，每次滅菌20min，然後用烘箱烘千。;X*f+~,v7}.a3、所有溶液配製好後，加DEPC水使DEPCuJ濃度為0.1%,37℃過夜，1211C高壓滅菌40min.(其中Tris因為不能用DEPC處理，所以Tris用DEPC處理的水溶液滅菌後配製。))x&B,{%e"^&F:s0q試驗步驟："Y6U+`2C*\4X2a#r【根據文獻(ShujunChang,1993)CTAB法，稍作改進。】;F^+e9I#h/Q7m*A*]1、將4mL提取液加入到lOmL離心管c卜650C水域加熱。$D+?4w7\3J:w,M2、用液氮冷卻研缽，在研缽中加入少量的抗氧化劑PVP，取1g低溫冷凍的銀杏葉片，迅速置於研缽中，不時加入液氮以防止研磨過程中葉片融化，充分研磨後，立即加入到預熱好的提取緩沖液中，用手搖功混勻。6C4i+L/Z*C5G)v3、65℃，水域1min後冷卻至室溫。(N2@)U:S,{9M"e8f4、加入等體積(4mL)的氯仿:異戊X17(2=L:1)，混勻，10000rpm,40C，離心10min。(H6Po1y8p#?5、小心吸取上清液，加入等體積(4mL)的仿:異戊醇(24:1),混勻，10000rpm,40C,離心10min。.{#k/z5r:x:v1x6、吸取上清液，加1/4體積的IOMLiCL,混合，4℃沉澱過夜，然後10000rpm離心20min。7xP4o6z1D![8}7、用槍吸干，用500uLSSTE溶解沉澱，轉到1.5mL離心管.加等體積氯仿:異戊醇混勻，10000rpm,40C，離心10min。,H2b7C1d*[6r4c8、離心吸取取上清液，加兩倍體積的無水乙醉，-70℃沉澱至少30min，或一200C下沉澱2h。"W*c'Y1P-t5K)^,`9、12000rpm,40C,離心20min，去上請用70%的乙醇洗兩次，吹乾沉澱。1x,S*X0V"y6F/l10、用40uLDEPC處理的水溶解沉澱，得到RNA樣品。8f2C-S4R3O9R4Te&{11、除用於電泳和紫外檢測外，其餘RNA-70℃冰箱保存備用。Q0o7V.]9x,{1i:__!U*X1m5G9A(W%U改良Krapp提取法：1r)r#s3~|.q1v.w試驗試劑：'C7Z1^)J5A&f&W(Kd1、RNA抽提掖：母液：4mol異硫氰酸胍20mmolEDTA20mmolMESpH7.0。工作液：取400ml母液加入1.7ml2-ME貯存在4℃條件下備用。/a.I$E.RS%z2、RNA重懸液：2molLiCl10mmolNaAc調整終體積為250ml，pH5.2，滅菌後貯存在4℃條件下備用。2u;J1S9V8a.j試驗步驟：)O/o,L#q-D8v)U1、取新鮮植物材料0.5~1g，冷凍乾燥。如果必要可加入0.2g砂一起研磨，然後加入10mlRNA抽提掖充分混勻。7nQ:B"SN9B!J$u2、4℃條件下8000rpm離心10min，將上層水相轉移至一干凈離心管中，加入等體積的酚/氯仿抽提掖，在4℃條件下8000rpm離心10min。1N:K+]3R"a7`3、上清液轉移至一干凈離心管中，再用10ml氯仿洗上清液1次（加入10ml氯仿充分混勻後，在4℃條件下8000rpm離心10min.）。$p+y,P/^-w/E'g"k0y:[4、小心將上清液轉移至另一干凈離心管中，加入1/10vol3molNaAc和2vol冷無水乙醇，在-80℃條件下沉澱2小時。:t&M8O1O!C-w5a5、在4℃條件下8500rpm離心30min.，小心棄去上清液，沉澱重懸於RNA重懸液中，置於4℃條件下1小時。9b7Z#K4v(y%l8Q0a8N)I%|6、4℃條件下8500rpm離心10min.，棄去上清液，沉澱溶於適當體積的DEOC處理水中。檢測後分裝，置於-70℃條件下保存。