離子交換疏水層析

『壹』 按層析原理分類除了凝膠層析之外還有哪幾類層析

免疫親和層析
吸附物質與特異性配基配對到色譜基質上，且與配基間具有可逆的相互作用。
離子交換層析
吸附物質通過表面凈電荷的差異，分別與帶正負電荷的層析色譜結合。
疏水相互作用層析
根據吸附物質表面疏水性的不同，利用與疏水層析介質疏表面可逆的相互作用來實現分離。
凝膠過濾層析
根據分子通過凝膠填料大小不同對其進行分離。
反向層析
類似於疏水相互作用層析

『貳』 離子交換層析速問速答

離子交換層析是一種基於樣品的帶電性質進行分離的技術，主要用於蛋白純化。以下為離子交換層析的問答，旨在深入理解該技術。

01、離子交換層析分為哪幾種？

離子交換層析根據配基的不同，主要分為陽離子交換層析和陰離子交換層析。陽離子交換柱可以吸附帶正電荷的蛋白，而陰離子交換柱則吸附帶負電荷的蛋白。

02、如何選擇陽離子還是陰離子？

蛋白是兩性分子，具有等電點（PI）。當緩沖液的PH值低於蛋白的等電點（PI），蛋白帶正電荷時，應選擇陽離子交換柱；反之，當PH值高於等電點（PI），蛋白帶負電荷時，選擇陰離子交換柱。

03、強和弱離子交換劑的區別？

強離子交換劑在PH范圍內載量恆定，弱離子交換劑載量隨PH變化。優先使用強離子交換劑，若選擇性不足，嘗試使用弱離子交換劑。

04、如何選擇緩沖液的PH值？

建議使用PH 6-8的中性緩沖液。通常，選擇與等電點相差1個PH值的緩沖液作為初始嘗試。為了達到最佳分離效果，通常需要進行PH條件的摸索。

05、若不知道蛋白的等電點？

大多數蛋白的等電點低於PH 7，可以使用Q柱進行嘗試，緩沖液使用PH 7。也可以選擇離子交換試劑盒進行摸索。

06、緩沖液的配置？

請參照說明書，注意在添加氯化鈉後調整PH。

07、初次實驗的標准條件？

開始使用緩沖液A：20-50 mM，洗脫緩沖液B：20-50 mM + 1M NaCl。

08、樣品未結合？

可能原因包括：樣品鹽濃度太高、PH優化不足、緩沖液含有帶電物質（如去垢劑）、柱效下降。解決方法包括CIP清洗。

09、結合後無法洗下？

嘗試增加洗脫液鹽濃度、評估蛋白穩定性、優化PH值。

10、純度不足？

解決方法包括：採用線性梯度洗脫、優化緩沖液條件、使用更高解析度產品、增加分子篩、疏水等多步純化。

『叄』 離子交換層析與疏水層析有何區別

離子交換層析是利用蛋白質在不同PH帶不同種電荷的方法，利用離子交換的方法分離蛋白的。離子交換內的介質一般是樹脂，陽離子交換型的，使用前樹脂先用鹼處理成鈉型，將氨基酸混合液（pH=2-3)上柱，pH=2-3時，氨基酸主要以陽離子形式存在，與樹脂上的鈉離子發生交換而被「掛」在樹脂上，再用洗脫劑洗脫。不同的氨基酸（帶的電荷不同）與樹脂的親和力不同，要將其分離洗脫下來，需要降低它們之間的親和力，方法是逐步提高洗脫劑的pH和鹽濃度，這樣各種氨基酸將以不同的速度被洗脫下來，反之亦然。不同反荷離子與樹脂親和力是不同的，其強弱關系為陽性競爭離子：Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+陰性競爭離子：I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F-如果某種離子溶液洗脫效果不好，可用另一種親和力強的離子代替之，等電點＞7選擇陽離子交換樹脂，等電點＜7選擇陰離子交換樹脂。

『肆』 疏水層析的經歷

一般而言來，離子強度（源鹽濃度）越高，物質所形成的疏水鍵越強。影響疏水作用的因素包括：鹽濃度，溫度，pH，表面活化劑和有機溶劑。疏水層析的應用與離子交換層析的應用剛好互補，因此，可以用於分離離子交換層析很難或不能分離的物質。
疏水層析其原理如下：蛋白質表面一般有疏水與親水集團，疏水層析是利用蛋白質表面某一部分具有疏水性，與帶有疏水性的載體在高鹽濃度時結合。在洗脫時，將鹽濃度逐漸降低，因其疏水性不同而逐個地先後被洗脫而純化，可用於分離其它方法不易純化的蛋白質。

『伍』 疏水層析的相關知識

在
丁香園
生物網路
（
http://dxy.ac.cn
）
總結
：
離子交換
層析：
http://dxy.ac.cn/wiki/viewthread.php?tid=458&
highlight
=%C0%EB%D7%D3%BD%BB%BB%BB
離子交換層析
離子交換層析是利用
離子交換劑
上的
可交換離子
與周圍介質中被分離的各種離子間的親和力不同，經過交換平衡達到分離的目的的一種柱
層析法
。該法可以同時分析多種
離子化合物
，具有靈敏度高，重復性、選擇性好，分離速度快等優點，是當前最常用的層析法之一，常用於多種離子型
生物分子
的分離，包括蛋白質、氨基酸、多肽及核酸等。
離子交換層析對物質的分離通常是在一根充填有離子交換劑的玻璃交換劑的
玻璃管
中進行的。離子交換劑為人工合成的多
聚物
，其上帶有許多可電離基團，根據這些基團所帶電荷的不同，可分為
陰離子交換劑
和
陽離子交換劑
。含有預被分離的離子的溶液通過
離子交換柱
時，各種離子即與離子交換劑上的
荷電
部位競爭結合。任何離子通過柱時的移動速率取決於與離子交換劑的親和力、電離程度和溶液中各種競爭性離子的性質和濃度。
離子交換劑是由基質、荷電基團和
反離子
構成，在水中呈不溶解狀態，能釋放出反離子。同時它與溶液中的其他離子或離子化合物相互結合，結合後不改變本身和被結合離子或離子化合物的理化性質。
離子交換層劑與水溶液中離子或離子化合物所進行的
離子交換反應
是可逆的。假定以RA代表陽離子交換劑，在溶液中
解離
出來的陽離子A＋與溶液中的陽離子B＋可發生可逆的交換反應：RA+B+↔RB+A+；該反應能以極快的速度達到平衡，平衡的移動遵循
質量作用定律
。
溶液中的離子與交換劑上的離子進行交換，一般來說，。。。。
疏水作用
層析，建議看看這個，或者搜索
http://dxy.ac.cn/wiki/viewthread.php?tid=461&highlight=%CA%E8%CB%AE
參考資料：http://dxy.ac.cn/wiki/viewthread.php?tid=183&highlight=%C0%EB%D7%D3%BD%BB%BB%BB