⑴ 使用蔗糖密度梯度離心時，不同濃度的蔗糖為什麼會分層
使用蔗糖密度梯度離心時，不同濃度的蔗糖為什麼會分層
純化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度離心法，能得到比較純的病毒。其過程如下：
1、將收集的組織或臟器或其他,用玻璃勻漿器充分研磨後製成懸液,經反復凍融3 次後,置- 20 ℃冰箱中,備用。
2、先以5000g離心15分鍾後，獲取上清夜，然後再20000g高速離心30分鍾後取上清夜。
3、接著10萬g超速離心2h，將沉澱用少量STE溶解。
4、先在超速離心管中加入5-8mL的第3步所獲取的含病毒樣品的溶解液，然後在離心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的時候是用長針頭從底部往上加的。11萬g離心2.5h,發現在30 %與45 % 以及45 % 與60 %之間都有一條明亮的帶，用長針頭將兩條不同部位的帶都吸取出來，分別收集到不同的瓶內。
5、去蔗糖；用STE緩沖液適量稀釋純化的病毒，然後11萬g離心3h,用少量STE（根據沉澱的量決定加入多少）緩沖液把沉澱懸起，即最後獲得了純化的病毒。-20度凍純備用，用時可用分光光度計測定其病毒含量。
⑵ 外泌體與蛋白比較，分子質量誰大
一般來說外泌體大，因為外泌體內可包含許多種蛋白和小RNA。
⑶ 什麼是外泌體
外泌體是健康和疾病中細胞間近距離通訊的介質，影響細胞生物學的各個方面。[1]
所有培養的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在於體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、「運載物」和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用於微創診斷的開發。
⑷ 離心分離外泌體是差速離心與密度梯度離心一起用嗎
標准方法：Ficoll-泛影鈉（Ficoll-Hypaque）密度梯度及紅細胞裂解法1）取一50ml聚乙烯管，無菌採集專人外周靜脈血屬，加4.4ml3.8%或5%的檸檬酸鹽液定容至40ml。上述全血300gX20min，離心，室溫。2）吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制備無血小板血漿（platelet-poorPlasma,PPP）。3）餘下的沉降全血加入5ml6%Dextran(分子量500,000，用無菌生理鹽水配製)，並用生理鹽水（0.9%）調節最終體積至50ml，輕輕、徹底混勻。室溫沉降30min。4）吸出富含白細胞的上層液，275gX6min。5）沉澱的細胞用8mlPPP-生理鹽水（1：4）重懸，並移到15ml離心管中。6）懸液細胞上面加入3mlFicoll-Hypaque（密度1.077），750gX5min，室溫。7）吸取富含中性粒細胞和紅細胞層，用0.155MNH4Cl重懸細胞，使紅細胞裂解，然後中性粒細胞用含0.25%BSAHanks平衡液（HBSA，無鈣）洗2次，最終用HBSA（含鈣）重懸。8）用此法可得95%以上的中性粒細胞。
⑸ 用血清超速離心法提取外泌體，能提取到多少
絕大多數培養基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養物質。最廣泛應用的培養基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規含有無機鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12 這兩種培養基各取1/2，形成神經生物學最通用的培養基。Dulbecco`s改良培養基——DMEM，現應用於快速生長的細胞，同MEM含有相同的營養成分，但濃度高出2~4倍
⑹ 什麼是外泌體保存液，外泌體保存液介紹
外泌體(exosomes)是一種由活細胞分泌，直徑在30-150nm，具有雙層脂質膜結構的小囊泡，它在機體內廣泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、腦脊液等各種體液中，內含豐富的蛋白質、脂質以及核酸等生物活性成分。外泌體參與物質運輸，還攜帶和傳遞重要的生物信息，在介導免疫抗原遞呈、樹突狀細胞的活化、神經退行性疾病發生、腫瘤細胞抗原的轉移及腫瘤診斷治療中發揮重要作用，吸引了很多科研人員的關注，在深入研究外泌體前，外泌體的提取純化、鑒定及合理保存是首要的步驟，也是一切後續實驗的基礎，只有高活性、高穩定性的外泌體才能確保後續實驗的質量和可信度。
目前外泌體只能在2～8℃穩定保存3天，-20℃穩定保存1個月。長期保存需要-80℃低溫，並且不能凍融，存儲條件要求高，這些缺點影響了外泌體的深入研究。
由此，有效保持外泌體的完整性、生物活性和內含物穩定性的外泌體保存液仍有待開發。
⑺ 如何對exosomes進行成分分析
外泌體（Exosomes）是一種直徑在40～100 nm的圓形單層膜結構，可由機體眾多類型細胞釋放，並廣泛分布於唾液、血漿、乳汁、尿液等體液當中。外泌體可攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA，參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生和腫瘤細胞生長等過程。2007 年，Valadi等發現細胞分泌的外泌體中含有生物學活性的mRNA、microRNA，使得研究人員對外泌體的研究熱情激增。
傳統的外泌體分離要涉及超速離心，操作繁瑣、過程冗長，所得到的外泌體純度較低。美國101Bio提供的系列外泌體分離試劑盒，可從細胞培養基或血清中富集大量完整的外泌體，試劑盒具有
ü 方便——無需超速離心；
ü 快捷——不到2個小時即可完成外切體分離純化；
ü 高回收率——是超速離心的5~10倍；
ü 高純度——所得外切體純度高達95% 以上；
ü 僅需2ml的細胞培養基或200ul血清，即可獲得足夠的外切體用於下游研究。
PureExo®Exosomes Isolation Kit for Cell Culture Media
試劑盒組分
Solution A、Solution B、Solution C和PureExo® Columns
操作步驟
1. 無血清培養或血清飢餓48小時的細胞培養液於4℃ 600 g 離心10mins取上清；
2. 在玻璃管中按照比例加入細胞上清液及ABC混合液搖勻；
3. 於4℃孵育1h後出現分層；
4. 棄上層培養基，並將其餘液體轉移至EP管；
5. 1000g離心3mins，出現分層，棄上層培養基及下層無色澄清液體；
6. 上述步驟重復操作一次；
7. 室溫乾燥5~10mins後用1X PBS重懸；
8. 重懸液轉移至純化柱中，2000g離心5mins；
9. 收集流出液即為外切體。