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超濾管離心的時候為什麼炸裂

發布時間:2022-06-15 13:17:35

『壹』 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦

可能是抄這個蛋白的水溶性較差,也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了,超濾時保持低溫,體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高,選擇更合適的緩沖液,添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。

『貳』 離心管和離心超濾管

離心管就來是一個簡單的可自以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉澱。
離心超濾管會有一個類似於內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理。。。。常用於濃縮樣品。

『叄』 超濾離心管濃縮蛋白會損失嗎

會有少量損失。取決於緩沖液,濾網的網眼大小和蛋白質的分子量

『肆』 康寧50ml離心管炸裂,是為什麼,我的離心速度是20000g,還沒有達到最大的30000g。

1、康寧的50ml管子離不到20,000g,一般標准能到8,000-10,000,最高能到12,000就不錯了,但不能長時間離心,超過30min肯定會裂。
2、轉頭和離心管是否匹配?你用的離心機轉頭是什麼底的,如果是圓底的轉頭,超過10,000g,基本上幾分鍾離心管底就掉了,因為管底沒有有效支撐,要不就加個holder,專門放離尖底離心管的。但也幾乎不可能耐受20,000g。
3、20,000g離50ml管的話,建議用eppendorf的白蓋離心管(目前只有尖底的),能達到要求,且相對較便宜(大概2塊錢一個),或者用beckman的圓底離心管,相對較貴。轉速再高的話,長時間離心還是建議採用beckman的超速離心管配合超速離心機使用,注意安全。

『伍』 為什麼我的超濾離心管不濃縮

茶葉--抽提--過濾--澄清--濃縮(茶濃縮汁)-調配--加入抗氧化劑等--滅菌灌裝成純茶飲料。但是市場上現在絕大多數都不是純茶飲料,純茶飲料是很難喝的,大多數是調味型茶飲料,所以在無菌灌裝之前要加甜味劑或者檸檬酸食用香精,果汁,乳製品等。\r\n 茶葉注意不能用變質的綠茶,用粉碎機粉碎,准備浸提。\r\n 浸提:以水作為溶劑浸提,水對茶葉中的多酚類,生物鹼,苷,水溶性有機酸等都有很好的溶解性能。影響浸提效果的因素是 1水質的純度:水中的鈣鎂鐵氯,水質的硬度,影響浸提。2水溫越高,時間越長,原料顆粒越小(當然也不能無限制的小),茶水比列越大,萃取率越高,茶湯的苦澀味也越重,成本也高,香味新鮮度都受影響,建議萃取水溫在80-90度,這樣不至於將苦澀味較重的咖啡鹼萃取過多,同時也將茶多酚萃取出來。茶湯在萃取後,立即降溫冷卻。\r\n 茶葉在萃取冷卻後會產生白色乳狀沉澱,是由茶葉中的茶多酚及其氧化產物和咖啡鹼絡和而成,形成茶乳,蛋白質果膠,澱粉等大分子物質也容易出現沉澱,而水中離子又是促進渾濁和沉澱的首要原因。\r\n 目前採用的去除沉澱的方法是:離心法,超濾微濾和RO膜濃縮。或者加入助濾劑,添加鈣離子然後將茶湯過濾,或者加入離子螯合劑,加入食品添加劑,如環狀糊精,天然膠來抑制茶乳的產生,也可以用單寧酶來破壞茶乳。\r\n 加入添加劑;\r\n 茶飲料的滅菌:用UHT超高溫瞬時滅菌,滅菌時間短,有利於保持茶飲料的色香味。

『陸』 求助:第一次使用超濾離心管應該怎麼處理

可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑,那就一定要洗干凈再加樣品。版權
乾的超濾管也要先潤濕再用,否則可能不能完全利用膜面積。
最好,用樣品buffer潤洗下再加樣,最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好,使膜充分浸潤。

降低吸附的辦法有:
1,蛋白濃度不要過低
2,盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3,用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗(不影響蛋白活性的前提下)
4,加入保護蛋白,如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止長菌,依不同樣品可以重復使用不同的次數。

『柒』 超濾離心管可以滅菌嗎

1、可以用70%的酒精消毒
2、如果是高溫高壓滅菌,要注意滅完菌後,管裡面的超濾膜是處於濕潤的狀態,所以需要立即使用,因為膜濕潤後就不能幹

『捌』 離心超濾管 millipore 濾膜上好像有孔,離心後發現有大分子蛋白過來,怎麼回事該怎麼辦

離心超濾管是一次性的,原則上不能反復用的,所以濾膜上有孔就要更換了

『玖』 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。

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