❶ 請問羧甲基纖維素和DEAE纖維素分離蛋白有什麼區別
羧甲基纖維素是弱陽離子交換填料,要求使用時的pH值要低於目的蛋白質等電點起碼0.5個pH值單位,為了達到較好的分離效果,實際使用時最好是低於1個以上pH值單位。在低pH值下,有的不耐酸的雜質蛋白質會變性,屆時離心除去,可首先去除一部分雜質蛋白質。
DEAE纖維素是弱陰離子交換層析填料,要求使用時的pH值要高於目的蛋白質等電點起碼0.5個pH值單位,為了達到較好的分離效果,實際使用時最好是高於1個以上pH值單位。大多數蛋白質的等電點在6.0左右,可以耐受8.0,所以依據pH提高使得某些雜質蛋白質變性的做法多數情況下不可行。
這兩種填料的工作pH值不同,但都可以用氯化鈉來洗脫。交換基團不同,分離效果也不同,可以先用一種來純化,得到初步純化的產物之後再用另一種來純化。因為有些蛋白質不能耐受酸,所以我建議先用羧甲基纖維素弱陰離子交換層析,再用DEAE纖維素弱陽離子交換層析,產物的純度比單用一種時更高。
在對蛋白質的破壞方面,弱交換填料比強交換填料好,有的蛋白質用強離子交換來純化,蛋白質結合再交換之後會損失很多活力,但是弱離子交換則損失的活力較少。但是弱離子交換的解析度比強離子交換差一些。如果純化得不好,又有強離子交換的,就試一下吧。lxj341401(站內聯系TA)一個是陽離子交換填料,一個是陰離子交換填料,用哪個跟蛋白值的等電點pI還有所用緩沖液的pH有關,pH>pI時帶負電荷,蛋白質能吸附到陰離子交換填料,相反的用陽離子交換。所以能不能代替看具體情況了。悅迷008(站內聯系TA)Originally posted by 冼亮澱粉酶 at 2011-07-15 06:00:21:
這兩個填料雖然都是離子交換用的,但一個是弱陰一個是弱陽,效果不同,沒有一個能代替另一個的說法。
❷ 用過的sephadex G-25層析柱和DEAE纖維素離子交換柱再生的方法為什麼不一樣
飛秒檢測發現sephadex G-25層析柱填料是葡聚糖交聯的凝膠柱,G-X, X:(1)交聯度。X越小,交聯度越大,網孔越小,適用於分離低分子量產品,反之亦然。(2)吸水量。為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克.凝膠柱使用一次後,必須反沖疏鬆一次,平衡後再使用。若使用數次,就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡,然後用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢,將再生後的凝膠在布氏漏鬥上用蒸餾水洗滌抽干,再用95%乙醇洗兩次,在60℃烘箱中烘乾,回收保存。
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂;而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/:NaCl淋洗柱,若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱;若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生,也可用乙醇洗滌,其順序為:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定(洗必泰),陽離子交換劑可用乙基硫柳汞(0.005%)。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。
兩種填料的抗酸鹼性和抗腐蝕性能不同。
❸ deae翻譯為中文是什麼意思
DEAE—纖維素的活化
稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。
抽干,改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖液,浸泡平衡後使用。
用過的離子交換劑可以反復使用,使其恢復原狀的方法俗稱「再生」。再生並非每次用酸、鹼反復處理,通常只要「轉型」處理即可。所謂轉型就是使交換劑帶上所希望的某種離子,如希望陽離子交換劑帶上NH+4則可用NH4OH浸泡,如希望陰離子交換劑帶上Cl—則用NaCl溶液處理。
本實驗中DEAE—纖維素在酸鹼處理後,用0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖溶液浸泡即可轉型,以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由於DEAE—纖維素使用後因帶有大量雜蛋白,所以再生時,先用0.5mol/L NaOH浸洗,用去離子水洗至pH8左右,再轉型,即可再使用。
❹ DEAE纖維素是什麼
英文名稱:DEAE cellulose DE-23
CAS號:9000-11-7
功能團:二乙氨乙基
正常PH范圍:2~9.5
小離子電量:0.88~1.08meg/dg(dg=dry gram,千克重)
蛋白容積:425mg/dg(蛋白體積是指0.01M ph8.5磷酸緩沖液—牛血清白蛋白)
蛋白容積/柱體積:60mg/ml
每升所需的離子交換劑㎏柱床體積:0.19(離子交換劑重量的數字考慮到溶脹,容易去除及使用過程中離子離子交換剩餘顆粒)
填料密度:0.15dg/ml(填料密度的狀態為0.05M PH7.5磷酸緩沖液)
性狀:乾燥纖維狀
用途:用於柱色譜分析,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等,陰離子交換填料
保存:RT
❺ DEAE纖維素柱的原理
DEAE纖維素柱原理,基於離子交換層析:離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖回維素組成。
陰離子答交換基質結合,帶有負電荷的蛋白質,然後這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質從而洗脫下來。
(5)deae纖維素陰離子交換擴展閱讀:
基本信息:
性狀:乾燥纖維狀。
用途:用於柱色譜分析,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等,陰離子交換填料。
保存:常溫乾燥封袋保存。
DEAE—纖維素的使用方法:
稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。
抽干,改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖液,浸泡平衡後使用。
❻ deae-陰離子纖維素的使用方法
DEAE-纖維素的處理及裝柱
(1)處理
本實驗採用的是DEAE-纖維素DE 52 是弱酸型陰離子交換劑,具體處理方法為:先將DE52陰離子交換劑乾粉浸泡於蒸餾水中,去除雜質;再在0.5N的HCL溶液中浸泡1-2h,再用無離子水或蒸餾水洗至pH值中性或PH4以上,並將其在抽濾漏斗中抽干;將抽乾的離子交換劑浸泡在0.5N的NaOH溶液中1-2h,再用無離子水或蒸餾水將其洗至中性。
(2)裝柱
將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上,加1/3體積的無離子水,打開下出液口,水流暢通,即刻將小燒杯中裝有適宜濃度的柱材,輕輕倒入層析柱中,凝膠自然慢慢沉降再層析柱底部,凝膠沉積直到離層析柱上端1.5-2cm處,停止裝柱。層析柱上端進液口連接恆流泵,下出口連接蛋白質監測儀,待層析柱的平衡。
(3)平衡
在柱層析上樣前必須對層析柱進行平衡,所謂平衡就是將層析柱中的溶液用層析過程的緩沖液(洗脫液)置換出來,使層析柱中的緩沖系統與柱層析過程中的系統一致。其方法是:利用層析柱上端的恆流泵將平衡緩沖液泵入到層析柱內,打開層析柱下端的出口,平衡液流速在0.5-1ml/min,當下出口流出液的PH值與平衡緩沖液的PH值一致時,層析柱達到了平衡。在本實驗中,用0.002M Tris-HCL緩沖液PH7.4(內含0.0001M EDTA),預先將DE-52柱進行平衡。
❼ DEAE 層析原理是什麼
給你找了以前的文章,你可以看一下。如下。。
層析技術是以離子交換纖維素或以離子交換葡聚糖凝膠為固定相,以蛋白質等樣品為移動相,分離和提純蛋白質、核酸、酶、激素、多糖等的一項技術。
在纖維素與葡聚糖分子上結合有一定的離子基團,當結合陽離子基團時,可換出陰離子,則稱為陰離子交換劑。如二乙氨乙基(Dicthylaminoethyl,DEAE)纖維素。在纖維素上結合了DEAE,含有帶正電荷的陽離子纖維素—O—C6 H14N+H,它的反離子為陰離子(如Cl-等),可與帶負電荷的蛋白質陰離子進行交換。當結合陰離子基團時,可置換陽離子,稱為陽離子交換劑,如羧甲基(Carboxymethy, CM)纖維素。纖維素分子上帶有負電荷的陰離子(纖維素-O-CH2-COO一),其反離子為陽離子(如Na+等),可與帶正電荷蛋白質陽離子進行交換。
溶液的pH值與蛋白質等電點相同時,靜電荷為0,當溶液pH值大於蛋白質等電點時,則羧基游離,蛋白質帶負電荷。反之,溶液的pH值小於蛋白質等電點時,則氨基電離,蛋白質帶正電荷。溶液的pH值距蛋白質等電點越遠,蛋白質的電荷越多。反之則越少。血清蛋白質均帶負電荷,但各種蛋白質帶負電荷的程度有所差異,以白蛋白為最多,依次為 球蛋白, 球蛋白和 球蛋白。
在適當的鹽濃度下,溶液的pH值高於等電點時,蛋白質被陰離子交換劑所吸附;當溶液的pH值低於等電點時,蛋白質被陽離子交換劑所吸附。由於各種蛋白質所帶的電荷不同。它們與交換劑的結合程度也不同,只要溶液pH值發生改變,就會直接影響到蛋白質與交換劑的吸附,從而可能把不同的蛋白質逐個分離開來。
交換劑對膠體離子(如蛋白質)和無機鹽離子(如NaCl)都具有交換吸附的能力,當兩者同時存在於一個層析過程中,則產生競爭性的交換吸附。當Cl一的濃度大時,蛋白質不容易被吸附,吸附後也易於被洗脫,當Cl一濃度小時,蛋白質易被吸附,吸附後也不容易被洗脫。因此,在離子交換層析中,一般採用兩種方法達到分離蛋白質的目的。一種是增加洗脫液的離子強度,一種是改變洗脫液的pH值。pH值增高時,抑制蛋白質陽離子化,隨之對陽離子交換劑的吸附力減弱。pH值降低時,抑制蛋白質陰離子化,隨之降低了蛋白質對陰離子交換劑的吸附。當使用陰離子交換劑時,增加鹽離子,則降低pH值。當使用陽離子交換劑時,增加鹽離子濃度,則升高溶液pH值。
❽ 硝酸乙醇法策動纖維素的原理
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。 其原理基於離子交換層析:離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。 由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋
❾ DEAT-纖維素離子交換層析法可用於分離純化蛋白質,主要是由於 A蛋白質的溶解度不同
D.
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。
其原理基內於離子交換層析容:離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。
由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。
http://ke..com/view/81714.htm
❿ DEAE-52纖維素柱求助
DEAE-纖維素復 DEAE cellulose DEAE-纖維素 DEAE cellulose 為二乙氨乙基纖制維素。是陰離子交換纖維素之一。 DEAE—纖維素的活化:稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE