親和flag樹脂

1. 基因與flag融合表達會影響基因功能嗎

能夠判斷目的基因的轉染效率
2.能夠對目的蛋白的表達進行定量，比如通過測定熒光強度轉化為量化值，間接反應目的蛋白表達的強度
3.由於PEGFP質粒帶有篩選標志，還可以進行穩定轉染的篩選，標記上熒光，有利於穩定轉染的篩選。
我個人認為1和3沒有什麼問題，但對2來說 我認為最好用WESTERN來定量，用GFP的抗體就可以。
MYC，HIS6，除了用作親和純化的標記，還可標記目的蛋白，由於他們很小，不會干擾目的蛋白的活性，不象GFP200多AA，所以有人在構建時常在目的基因和GFP 之間添加連接肽，以免目的蛋白與GFP相互影響。

2. 求英文翻譯

使用以下抗體：myc（9b11，細胞信號），Chk2（BD Biosciences），hRad50（新聞，nb100-154ss），hubr5（EDD）（聖克魯斯，sc-9562），旗（σ，f7425）或HA（科文斯，16b12），γH2AX（微孔，jbw301），53BP1（新聞，鈮100-304），GFP（Invitrogen，a6455），BRCA1（x余禮物），RNF168（D.迪羅謝禮物）和FK2（微孔，04-263）。免疫沉澱後抗體：myc（9b11，細胞信號）和標記M2親和凝膠（σ，a2220）。免疫熒光實驗量化是由至少200的細胞數進行計數的條件。從三個獨立的實驗數據被用來計算平均值和標准deviation.shrnaplko慢病毒載體被用來表達對下面的靶向序列的shRNAs：5′- gctcagtatttaccaagaatt-3′（brcc3），5′- gtccatccaagtggagtacat-3′（分布），5′- cccattcagtatcctggctt-3′（RAP80）和5′- aaccagatgtctgtactaagg-3′（BRCA1）。與iddr regionhek293細胞相互作用蛋白的純化轉染標記或標記trf1iddr TRF1旗旗。細胞裂解（50？–毫米的Tris HCl，pH值？7.5 150？mM NaCl，1？毫米EDTA緩沖液，0.5%的Triton X-100）和免疫純化的抗旗瓊脂糖樹脂（西格瑪）。洗滌後，蛋白質的肽競爭洗脫（σ）旗。質譜分析的樣品進行變性，還原和烷基化的胰蛋白酶消化前一夜。

3. flag標簽作用

可以通過基因工程技術手段將所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列連接起來，可以連接在目的蛋白的C端或N端， 然後將整合後的基因轉入細胞中或胚胎幹細胞抑或受精卵中。

後續檢測主要通過FLAG-tag這段肽鏈形成的免疫決定簇與其單克隆抗體的特異性結合來實現。 檢測手段有免疫熒光(immunofluorescence)， 免疫印記(Western Blotting)等。

隨著生物技術的發展，科研人員可以通過DNA重組技術，構建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白，進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化，以達到研究的需求。

(3)親和flag樹脂擴展閱讀

FLAG-tag類別：

1、Flag抗體-抗Flag標簽抗體

融合標簽，如Flag、GST等標簽的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。

2、GST抗體-抗GST標簽抗體

隨著越來越多的新基因的發現，基因融合蛋白表達體系以其在新發現蛋白研究中的顯著優勢已得到廣泛應用。其中GST標簽體系具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利於GST抗體制備等特點。

3、HA抗體-抗HA標簽抗體

融合標簽，如HA、His等標簽的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。

4. Android 編程中，為什麼設置了 Intent.FLAG

Intent
FLAG介紹:
(1)
FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK:
設置此狀態，記住以下原則，首先會查找是否存在和被啟動的Activity具有相同的親和性的任務棧（即taskAffinity，注意同一個應用程序中的activity的親和性一樣，所以下面的a情況會在同一個棧中，前面這句話有點拗口，請多讀幾遍），如果有，剛直接把這個棧整體移動到前台，並保持棧中的狀態不變，即棧中的activity順序不變，如果沒有，則新建一個棧來存放被啟動的activity
a.
前提:
Activity
A和Activity
B在同一個應用中.
操作:
Activity
A啟動開僻Task堆棧(堆棧狀態:
A),
在Activity
A中啟動Activity
B,
啟動Activity
B的Intent的Flag設為
FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Activity
B被壓入Activity
A所在堆棧(堆棧狀態:
AB).
原因:
默認情況下同一個應用中的所有Activity擁有相同的關系(taskAffinity).
b.
前提:
Activity
A在名稱為"TaskOne應用"的應用中,
Activity
C和Activity
D在名稱為"TaskTwo應用"的應用中.
操作1:
在Launcher中單擊"TaskOne應用"圖標,
Activity
A啟動開僻Task堆棧,
命名為TaskA(TaskA堆棧狀態:
A),
在Activity
A中啟動Activity
C,
啟動Activity
C的Intent的Flag設為FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Android系統會為Activity
C開僻一個新的Task,
命名為TaskB(TaskB堆棧狀態:
C),
長按Home鍵,
選擇TaskA,
Activity
A回到前台,
再次啟動Activity
C（兩種情況1.從桌面啟動；2.從Activity
A啟動，兩種情況一樣）,
這時TaskB回到前台,
Activity
C顯示,
供用戶使用,
即:
包含FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK的Intent啟動Activity的Task正在運行,
則不會為該Activity創建新的Task,
而是將原有的Task返回到前台顯示.
操作2:
在Launcher中單擊"TaskOne應用"圖標,
Activity
A啟動開僻Task堆棧,
命名為TaskA(TaskA堆棧狀態:
A),
在Activity
A中啟動Activity
C,啟動Activity
C的Intent的Flag設為FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Android系統會為Activity
C開僻一個新的Task,
命名為TaskB(TaskB堆棧狀態:
C),
在Activity
C中啟動
Activity
D(TaskB的狀態:
CD)
長按Home鍵,
選擇TaskA,
Activity
A回到前台,
再次啟動Activity
C(從桌面或者ActivityA啟動，也是一樣的),
這時TaskB回到前台,
Activity
D顯示,供用戶使用.說明了在此種情況下設置FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK後，會先查找是不是有Activity
C存在的棧，根據親和性(taskAffinity)，如果有，剛直接把這個棧整體移動到前台，並保持棧中的狀態不變，即棧中的順序不變
(2)
FLAG_ACTIVITY_CLEAR_TOP:
前提:
Activity
A,
Activity
B,
Activity
C和Activity
D在同一個應用中.
操作:
Activity
A啟動開僻Task堆棧(堆棧狀態:
A),
在Activity
A中啟動Activity
B(堆棧狀態:
AB),
在Activity
B中啟動
Activity
C(堆棧狀態:
ABC),
在Activity
C中啟動Activity
D(堆棧狀態:
ABCD),
在Activity
D中啟動Activity
B,
啟動Activity
B的Intent的Flag設置為FLAG_ACTIVITY_CLEAR_TOP,
(堆棧狀態:
AB).
(3)
FLAG_ACTIVITY_BROUGHT_TO_FRONT:
前提:
Activity
A在名稱為"TaskOne應用"的應用中,
Activity
C和Activity
D在名稱為"TaskTwo應用"的應用中.
操作:
在Launcher中單擊"TaskOne應用"圖標,
Activity
A啟動開僻Task堆棧,
命名為TaskA(TaskA堆棧狀態:
A),
在Activity
A中啟動Activity
C,啟動Activity
C的Intent的Flag設為FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Android系統會為Activity
C開僻一個新的Task,
命名為TaskB(TaskB堆棧狀態:
C),
在Activity
C中啟動
Activity
D(TaskB的堆棧狀態:
CD),
長按Home鍵,
選擇TaskA,
Activity
A回到前台,
在Activity
A中再次啟動Activity
C,
在啟動Activity
C的Intent中設置Flag為FLAG_ACTIVITY_BROUGHT_TO_FRONT,
TaskB回到前台,
Activity
C顯示,
(TaskB的堆棧狀態:
C).
(4)
FLAG_ACTIVITY_MULTIPLE_TASK:
與FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK結合使用,
首先在Intent中設置FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
打開Activity,
則啟動一個新Task,
接著在Intent中設置FLAG_ACTIVITY_MULTIPLE_TASK,
再次打開同一個Activity,則還會新啟動一個Task.
(5)
FLAG_ACTIVITY_SINGLE_TOP:
當前Task堆棧中存在ABCD四個Activity,
A是棧頂Activity,
D為棧底Activity,
存在打開A的Intent中設置了
FLAG_ACTIVITY_SINGLE_TOP標志,
則會使用棧頂A,
而不會從新New
A.
(6)
FLAG_ACTIVITY_RESET_TASK_IF_NEEDED:
一般與FLAG_ACTIVITY_CLEAR_WHEN_TASK_RESET結合使用，如果設置該屬性，這個activity將在一個新的task中啟動或者或者被帶到一個已經存在的task的頂部，這時這個activity將會作為這個task的首個頁面載入。將會導致與這個應用具有相同親和力的task處於一個合適的狀態(移動activity到這個task或者從中移出)，或者簡單的重置這個task到它的初始狀態
FLAG_ACTIVITY_CLEAR_WHEN_TASK_RESET：在當前的Task堆棧中設置一個還原點，當帶有FLAG_ACTIVITY_RESET_TASK_IF_NEEDED的Intent請求啟動這個堆棧時(典型的例子是用戶從桌面再次啟動這個應用)，還原點之上包括這個應用將會被清除。應用場景：在email程序中預覽圖片時，會啟動圖片觀覽的actvity，當用戶離開email處理其他事情，然後下次再次從home進入email時，我們呈現給用戶的應該是上次email的會話，而不是圖片觀覽，這樣才不會給用戶造成困惑。
例:
存在Activity
A,
Activity
B,
Activity
C,
Activity
A啟動開僻Task堆棧,
命名為TaskA(TaskA堆棧狀態:
A),
在Activity
A中啟動Activity
B(TaskA堆棧狀態:
AB),
接著Activity
B啟動Activity
C(TaskA堆棧狀態:
ABC),
啟動Activity
C的Intent中設置FLAG_ACTIVITY_CLEAR_WHEN_TASK_RESET標題,
這樣TaskA中有一個還原點,
當有包含FLAG_ACTIVITY_RESET_TASK_IF_NEEDED的Intent請求TaskA堆棧時(比如請求Activity
A)
系統就會將還原點以上的Activity清除,
TaskA堆棧中只剩下了AB.

5. 內參抗體和標簽抗體有哪些

標簽抗體（Tag Antibody）可用於檢測和純化各種商品化表達載體上的標簽序列，籍以分析檢目的蛋白的表達含量及其功能。其原理是抗原—抗體反應，這些標簽抗體可以高度特異地結合對應的標簽融合蛋白。
親和性標簽
親和標簽大都有特異性的配基，利用這些配基可以方便的用親和層析的方法對融合蛋白進行分離和純化。
共同特點：
● 純化方便，一般通過一步純化就可以獲得純度和質量比較好的融合蛋白；
● 標簽對目的蛋白的三維結構或是生物學活性影響很小；
● 標簽易於切除；
● 純化過程中可以對目的蛋白進行簡單而精確的測量；
● 適用於大量不同蛋白質的表達。
Flag標簽
Flag標簽是由八個親水氨基酸構成的一段寡肽，序列為Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可用於蛋白純化及檢測。
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作用機理
● Flag序列的第二個氨基酸是酪氨酸(Tyr)，屬於芳香族氨基酸，是抗原-抗體特異性反應的主要因素；
● 位於N端帶負電的天冬氨酸(Asp)可輔助酪氨酸的抗原性；
● 靠近C端的六個氨基酸( Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)組成一個親水序列，可能形成高度暴露的三位蛋白質構型在理論上可使序列達到最大的親水性，大大增強了Flag融合標簽的抗原性。
優點
● 序列短小，只用條人工合成的寡核苷酸鏈就可以編碼；
● 結晶條件時Flag融合蛋白的構象與單純目的蛋白的構象幾乎完全相同，通常不會與目的蛋白相互作用並且通常不會影響目的蛋白的性質和功能，這樣就有利用研究人員對融合蛋白進行下游研究；
● 融合有Flag標簽的目的蛋白，可以直接通過Flag進行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白，並且純化效率高；
● 抗Flag的抗體可有效識別Flag標簽，這樣就方便通過 Western blot、ELSA等方法對含有Flag的融合蛋白進行檢測、鑒定；
● Flag融合標簽含有一個腸激酶切割位點，腸激酶可以識別該短肽C端的五個氨基酸( Asp-Asp- Asp-Asp-Lys)，通過腸激酶處理除去標簽後即可獲得天然的非融合蛋白質。
Flag標簽抗體可以應用於檢測和Flag標簽融合蛋白的表達、細胞內定位，以及純化或定量檢測Flag融合表達蛋白等。
His標簽
His-tag由人工合成的組氨酸首尾相連構成，通常由6個氨基酸（HHHHHH）組成，也有3個和8個的情況。另外，也存在一種由19個組氨酸構成的天然多聚組氨酸標簽（HAT-tag)。
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作用機理
● 多種宿主細胞已被證實可用於His融合標化重組蛋白，包括:細菌、酵母、哺乳動物細胞、桿狀病毒感染的昆蟲細胞；
● His標簽能在變性條件下純化蛋白，故己經聚集成包涵體的蛋白可溶解在適當的溶劑中(如:尿素、鹽酸胍)；
● His融合標簽可以很容易通過PCR技術，利用聚合酶與目的基因連接在一起。一般情況下將His融合標簽添加在重組蛋白質的N端或C端，但添加在哪端需根據實際情況，最佳添加位置是針對特定蛋白而言的；
● 雖然多聚組氨酸融合標簽因為分子量小且帶電荷而幾乎不影響蛋白質的活性，但是通常不能完全排除親和標簽影響其蛋白質活性的可能，因此一般會選擇在變形條件下進行蛋白純化來避免這種現象的發生。

不能用此法純化的情況： ①由於金屬離子可被吸附到次氮基三醋酸(NTA)樹脂，帶金屬離子中心的蛋白質不可純化；
②由於N2NTA可被還原，在厭氧條件下也不要使用該辦法。
優點
● 分子量小，只有約0.84KD，一般不影響目標蛋白的功能；
● 既可純化疏水性強的蛋白(非離子型表面活性劑存在的條件下)，也可純化包涵體蛋白(變性條件下)；
● 可被用於蛋白質蛋白質、蛋白質DNA相互作用研究:可應用於多種表達系統，純化的條件溫和；
● 可以和其它的親和標簽一起構建雙親和標簽。
HA標簽
HA融合蛋白也是一種小肽，由9個氨基酸組成( YPYDVPDYA)，其來源於流感病毒的紅細胞凝集素表面抗原決定簇。對外源目的蛋白的空間結構影響較小，容易構建成標簽蛋白融合到N端或者C端。易於用抗HA抗體檢測和ELSA檢測。
c-myc標簽
C-myc標簽即人原癌基因產物myc蛋白表位，是一個由11個氨基酸殘基構成的小標簽，其序列為 GIu-GIn-Lys-eu- le-Ser-Glu-Glu-ALeu。這11個氨基酸作為抗原表位在不同的蛋白質框架中仍可識別其相應抗體。其對應單抗既可用於C-myc融合蛋白的免疫印跡和免疫沉澱，還可用於流式細胞術分析。C-myc標簽也已廣泛用於在酵母、細菌、昆蟲及哺乳動物等表達體系中重組蛋白的檢測和鑒定。
GST標簽
GST即谷胱甘肽-S-轉移酶，具有解毒作用，可將谷胱甘肽中的硫基轉移至含硝基或鹵化物的復合物中。其天然大小為26KD。
作用機理
● 應用於原核表達：
①作為一種高度可溶的蛋白，能增加外源蛋白的可溶性；
②在大腸桿菌中大量表達，起到提高表達量的作用。
● GST標簽蛋白可在溫和、非變性條件下洗脫，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性；
● GST在變性條件下會失去對谷胱甘肽樹脂的結合能力，因此不能在純化緩沖液中加入強變性劑（如：鹽酸胍或尿素等）；
● GST融合蛋白已經成為分子生物學領域的基本工具，其廣泛用於研究蛋白質-DNA及蛋白質-蛋白質間的相互作用，也可作為抗原用於免疫學或疫苗的研究。
非親和標簽
非親和標簽的作用不是用來純化重組蛋白，而是用於檢測重組蛋白的表達、分布，幫助重組蛋白正確折疊以及保護融合蛋白免受宿主細胞降解等。
綠色熒光蛋白( green fluorescent protein，GFP)
GFP是發光生物體內廣泛存在的一類蛋白質，不需要激發即可發出一定波長的熒光，因此被廣泛用於蛋白質在活細胞體內的空間定位、運動變化等的研究。
● 最新研究表明GFP融合蛋白可以通過銅離子或鋅離子固相化金屬層析柱純化；
● 抗GFP的抗體也被用於GFP融合蛋白的檢測，在GFP的熒光能力被破壞的情況下(如SDS-PAGE)

6. 細菌flag蛋白純化用什麼菌株和載體

3，重復(3)的步驟進行SDS-PAGE分析;ml 卡那黴素存儲液，若轉化DH5α。當需要表達蛋白時。750μl20mMTris-HCl，Western 印跡;ml乙醯BSA(根據需要補足水到30μl2)37℃溫浴2-4h3)取3μl樣品進行電泳檢測消化反應進行的程度4)消化完全後，克隆進T-載體，需進行包涵體純化、定量分析確定目的蛋白⑥放大試驗純化目的蛋白 放大試驗，介紹將目的基因克隆進載體並進行表達獲得重組蛋白的過程，在細菌培養基中加入IPTG來啟動表達，然後用與消化載體相同的內切酶進行消化和膠回收，陽性菌落數遠大於陰性菌落。然後1,pH7。1，然後上樣進行SDS-PAGE分析.總結(注意事項)(1)所有操作盡量在冰上操作通過大腸桿菌表達目的基因大量獲得重組蛋白是一個方便快捷的方法。(6)37℃生長常常會使一些蛋白累積形成包涵體。(4)長期保存的pET重組子在高濃度甘油(19%)中會導致質粒不穩定，需要重新抽提質粒。篩選LB平板需含50μg/、將搖瓶置於冰上5min,除去上清重復洗滌，低溫(15-20℃)延長誘導時間(過夜)可以使溶解性蛋白的產量達到最大。植物中克隆的目的基因被克隆到特異設計的質粒載體上。(5)T7lac啟動子是嚴謹啟動子，受噬菌體T7強啟動子控制、檢測或純化目的蛋白時提供方便。(4)若目標蛋白在不溶部分中，即沒有移碼.4-1、除去上清，保證讀碼框正確，切帶按照膠回收試劑盒說明回收目標片段;μl 卡那黴素。(7)進行SDS-PAGE分析時。[6]DE3溶原菌的誘導表達(1)，並注意不同的表達載體上的融合標簽和攜帶的抗性基因，其中有些標簽是可以去除的，37℃培養至OD600為0.5重懸沉澱，參照其它試驗手冊，增加模板和引物的濃度。3)宿主菌的保存，從而熟悉根據自己的要求採用不同的載體進行原核表達的全過程; 酶體積不要超過反應體系的10%)3μl 1mg/，在定位;表達由宿主細胞提供的T7 RNA聚合酶誘導.05U小牛鹼性磷酸酶。85℃迅速加熱3min使蛋白變性。(4).0)中.4mM(T7啟動子)或1 mM(T7lac啟動子)，制備粗提物。6)-20℃保存備用、培養基中加入100mMIPTG至終濃度為0.准備工作(試劑配置和器材准備)1)操作流程示意圖主要步驟操作①制備pET-32a(+)載體 用限制性酶消化，既可轉化BL21也可轉化DH5α。一般先用PCR擴增帶酶切位點的目標基因、質粒抽提及酶切分析，離心，盡量減少PCR循環次數。但在PCR過程中，IPTG誘導時可以優化最佳濃度(25uM-1mM之間)使目的蛋白達到最佳的活性和溶解性。4)感受態細胞的制備。[7]SDS-PAGE進行目標蛋白質分析(1)，5000g 4℃離心5min收集菌體。2、從新鮮的劃線平板中挑取單克隆到50ml含50μg/。[3]在pET32a載體中插入片段連接反應2μl 10×連接buffer2-5μl 50ng/μl 預制的pET32a載體1μl T4連接酶5-7μl 預制目標基因插入片段加水到20μl，包括PCR，37℃ 30min5)全部樣品在1%瓊脂糖膠上電泳。以pET-32a(+)為例。(3)構建好的載體最好進行測序驗證。(3)，再轉化BL21。(3)100μl可溶上清中加入100μl 4×SDS上樣buffer和水。[5]pET重組子鑒定如果亞克隆成功;μl 卡那黴素的液體培養基中。不同載體在鄰近克隆位點處具有編碼不同的多肽「標簽」的序列。[2]制備插入片段限制性消化和膠純化是制備插入片段的常規方法，觀察蛋白表達，以避免蛋白質發生變性，槍頭混勻，再回收③插入片段克隆到pET-32a(+)載體 插入片段與pET連接，繼續培養2-3小時、裂解液14000g離心10min，可採用高保真酶.25倍體積預冷的20mMTris-HCl (pH8。(5)，轉化④轉化表達宿主菌BL21 轉化帶有T7RNA聚合酶基因的菌株⑤誘導表達目的蛋白 SDS-PAGE,50μg/.操作步驟[1] 制備載體1)載體消化和膠純化3μg pET載體3μl 10×限制性內切酶buffer10-20U 兩種酶(是否共用buffer。(2)、機械破碎細胞、重懸細胞於0.5ml 1%SDS上樣buffer中重懸沉澱，去磷酸化後膠純化回收②制備插入DNA PCR裝入質粒後進行限制性消化，切除融合標簽2)配製生長培養基如LB;(2)根據自己的需要選擇不同的表達載體。在某些情況下，親和純化，菌體保存於-70℃或繼續純化。(2)，需要減少突變的發生，和100mM IPTG，分離可溶和不溶部分，16℃反應2h-過夜[4]轉化轉化方法同T-載體轉化大腸桿菌DH5α一樣，而30℃生長則可能產生可溶的和有活性的蛋白。長期存放菌株和pET重組子應保存於甘油中，需優化電泳上樣體積，離心10000g5min、測序。一般用弗氏壓碎法或超聲波處理，體外轉錄和翻譯。檢驗轉化子的方法很多，加入0

7. MATLAB親和數怎麼編程

N=5000; %100000要算好長時間。這個演算法沒有改進過。
flag=zeros(N,1);
sumfac=zeros(N,1);
for n=1:N
if (flag(n)==0) %還沒有計算過n的真因子和
n1=1;
for i=2:n-1
if mod(n,i)==0
n1=n1+i;
if n1>N
break;
end
end
end
flag(n)=1;
sumfac(n)=n1;

if (n1>N)
continue;
end

if (flag(n1)==0 )
n2=1;
for i=2:n1-1
if mod(n1,i)==0
n2=n2+i;
end
end
flag(n1)=1;
sumfac(n1)=n2;
else
n2=sumfac(n1);
end

if (n==n2)
disp([n,n1])
end
end
end

8. 程序之間的親和性的理解。

一．ISO9000：94版標准存在的問題：

主要是生產硬體企業；針對規模較大的組織；三種質量保證模式，有一定的局限性；20項質量體系要素，要素間的相關性不好；17項程序文件限制了改進的機會；過多地強調了質量體系的符合性；缺少對顧客滿意或不滿意信息的監視；標准沒有建立ISO9001與ISO9004的聯系；標准沒有考慮與其他管理體系的相容性；標準的通用性差，數量太多，應用的很少。

二．2000版標準的優點

1、面向所有組織，通用性強；2、文字通俗易懂，結構簡明；3、建立八項原則，統一理念；4、鼓勵過程方法，操作性強；5、強化最高管理者的領導作用；6、突出顧客滿意和持續改進；7、考慮所有相關方的利益；8、增強與環境管理等其他管理體系的兼容性

三．(一)標準的目的

ISO9001:2000標準的目的在於明確保證產品的質量而使顧客滿意所必需的質量管理體系最低要求。

1.為各類型組織建立質量管理體系提供一個基礎性要求。組織達到了本標準的這一基本要求，也就說明它具備了穩定地提供符合規定要求的產品以及使顧客滿意的能力。

2.為質量管理體系的評價提供了基準，也就是外部依本標准對組織的能力進行評定，組織也可依此對外部提供質量保證。

(二)標準的范圍

從本標準的范圍看，質量管理體系所規定的要求是一種通用要求，對於各種類型，不同規模和提供不同產品的組織都可適用。

(三)標準的用途

1.適用於組織內部自身的質量管理，檢驗滿足組織自身要求的能力，並對組織內部的體系加以評價。 2.適用於組織外部，包括顧客和認證機構等對組織滿足顧客和法律法規要求的能力的評定，其中包括了第二方認定或注冊以及第三方認證。 3.本標准也可為相關的法規所引用時提供必要的參考。

四．質量管理體系

質量管理體系是指建立質量方針和質量目標並實現這些目標的體系。

述定義可以從以下幾個方面來理解：

(1)體系是指相互關聯或相互作用的一組要素。

(2)建立質量管理體系是為了有效地實現組織規定的質量方針和質量目標。

(3)組織建立質量管理體系不僅要滿足在經營中顧客對組織質量管理體系的要求，預防不合格品發生和提供使顧客與其他相關方滿意的產品，而且還應該站在更高層次上追求組織優秀的業績來保持和不斷改進、完善質量管理體系。

五、質量管理體系要求與產品要求的區別

產品要求是制訂產品和過程規范、驗證和改進產品過程的技術質量依據。

ISO9001質量管理體系要求並不規定產品要求，而是根據產品要求的目標，明確管理職責，加強資源管理，對產品實現過程進行控制，通過測量、分析和改進，確保持續穩定地提供符合規定要求的產品。

本條款首先申明ISO9000族標准區分了質量管理體系要求和產品要求。

ISO9000所規定的質量管理體系要求是對產品要求的補充，不是替代。

結合了產品要求的質量管理體系，才是一個組織的特定的質量管理體系。

六、質量管理體系的過程方法

1.過程的概念：過程是指將一組將輸入轉化為輸出的相互關聯或相互作用的活動。

2.過程的四大要素：輸入、輸出、活動和資源

一個組織要生產出能夠滿足顧客要求並使顧客滿意的產品，就必須系統地識別各個必需的過程，特別是相互關聯的過程和過程之間的介面，對這些過程切實加強組織和管理工作。這就是所謂的「過程方法」。

七．五、建立質量方針、質量目標的目的和意義

組織按照正確的途徑建立質量方針和質量目標，對實現持續改進，減少質量損失，降低質量成本，有效、高效地實現產品和過程質量並取得良好的經濟效益都會產生積極的影響。同時，組織通過制定和頒發質量方針與質量目標使顧客及其他相關方對本組織建立起充分的信心和信任感。

八．最高管理者在質量管理體系中的作用

1.制定組織的質量方針和質量目標2.貫徹以顧客為中心的原則3.貫徹過程方法的原則

4.遵循管理的系統方法的原則5.確保提供質量管理體系運行中所需的各種資源6.監視質量管理體系的運行7.決定實現質量方針和質量目標的有關措施8.按照持續改進的原則，決定實施改進的措施

一．審核准則、審核證據、審核發現、審核結論定義間的關系；

（1）審核證據：與審核准則有關的並且能夠證實的記錄、事實陳述或其它信息。質量管理體系的審核證據來源於質量記錄、文件、現場觀察以及詢問等多種信息源。（2）審核發現：將收集到的審核證據對照審核准則進行評價的結果。審核發現與審核證據有關聯關系，都與審核准則有關；對評價過程來講，審核證據是輸入，審核發現是輸出。（3）審核結論：審核組考慮了審核目標和所有審核發現後得出的最終審核結果。審核結論與審核發現的關系是，審核發現是輸入，審核結論是輸出。

審核是一個過程，也是把輸入轉化為輸出的活動

二．5.1頭腦風暴法

（1）頭腦風暴法的概念

頭腦風暴法又叫暢談法、集思法。它是採用會議的方式,引導每個參加會議的人圍繞某個中心議題(如質量問題),廣開言路,激發靈感,在自己的頭腦中掀起風暴,毫無顧忌、暢所欲言地發表獨立見解的一種創造性思維方法。

（2）頭腦風暴法的用途

頭腦風暴法在質量改進活動中的用途很廣,可以用來識別存在的質量問題並尋求解決辦法,還可用來識別質量改進的潛在機會。

三．親和圖法

（1）親和圖的概念

親和圖是針對某一問題,充分收集各種經驗、知識、想法和意見等語言、文字資料,通過匯總,並按其相互親和性,歸納整理這些資料,使問題明確起來,求得統一認識和協調工作,以利於問題解決的一種方法。

親和圖常用於歸納整理由頭腦風暴法所產生的意見、觀點和想法等語言資料，因此在質量保證和質量改進活動中經常用到。

（2）親和圖的主要用途：歸納思想,形成構思；認識事物；打破現狀,提出新的方針;；籌劃組織工作；徹底地貫徹方針。

四．水平對比法

水平對比法是指組織將自己的產品服務的過程和性能與公認的領先對手比較,識別組織自身存在的質量改進機會的方法。這是組織為了進行改進,與一些認定為最佳作業典範的組織相比較,然後以持續的、系統化的過程,評估自己的產品、服務和工作流程。

使用水平對比法,有助於組織認清目標和確定計劃編制的優先順序,使自己在市場競爭中處於有利地位。

五．流程圖就是將一個過程（如工藝過程、檢驗過程、質量改進過程等）的步驟用圖的形式表示出來的一種圖示技術。通過一個過程中各步驟之間關系的研究，一般能發現故障的潛在原因，知道哪些環節需要進行質量改進。流程圖可以用於從材料流向產品銷售和售後服務的全過程的所有方面。流程圖可以用來描述現有的過程，亦可用來設計一個新的過程。

六．樹圖

1．基本原理

樹圖又叫系統圖。樹圖能將事物或現象分解成樹枝狀，樹圖就是把要實現的目的與需要採取的措施或手段，系統地展開，並繪製成圖，以明確問題的重點，尋找最佳手段或措施。

在決策過程中，為了達到某種目的，就需要選擇和考慮某一種手段；而為了採取這一手段，又需要考慮它下一級的相應手段，參見下圖。這樣，上一級手段成為下一級手段的行動目的。如此把要達到的目的和所需的手段按順序層層展開，直到可以採取措施為止，並繪製成樹圖，就能對問題有一個全貌的認識，然後從圖形中找出問題的重點，提出實現預定目標的最理想途徑。

七．樹圖和因果圖的關系

樹圖亦是一種倒立樹狀邏輯因果關系圖。樹圖可以系統地把某個質量問題分解成許多組成要素，以顯示出問題與要素、要素與要素之間的邏輯關系和順序關系。比如，可以把頭腦風暴法產生的意見、觀點以及把用因果圖法和親和圖法形成的見解等轉換成樹圖，以便更清晰地顯示出諸要素、要素同主題之間的邏輯關系、順序關系或因果關系。樹圖一般是單目標的，但也可以是多目標的。

樹圖一般有側向型和寶塔型兩種

八．樹圖的主要用途

（1）目標、方針、實施事項的展開； （2）明確部門職能、管理職能； （3）制定質量保證計劃，對質量保證活動進行展開； （4）新產品研製過程中設計質量的展開； （5）對解決企業有關質量、成本、交貨期等問題的創意進行 （6）與因果圖結合使用。

一．分層法

概念

分層法又稱分類法，即：把收集來的原始質量數據，按照一定的目的和要求加以分類整理，以便分析質量問題及其影響因素的一種方法。

原則：根據分層的目的進行； 按照一定的標志； 按相同性質、相同條件數據的歸類； 同層波動小，層間差別大是分層的關鍵

二．因果分析圖法—概念

也叫特性因素圖/魚刺圖/石川圖，是整理和分析影響質量（結果）的各因素之間的一種工具。

形象地表示了探討問題的思維過程，通過有條理地逐層分析，可以清楚地看出「原因-結果」「手段-目標」的關系，使問題的脈絡完全顯示出來。

繪制因果分析圖最一般的方法是「大枝展開法」，這種方法是從大枝到中枝、從中枝到小枝，按此次序提出各種要因，這樣往往可以將各種因素限制在預先確定的框框內，容易形成小而整齊的因果圖。

三．調查表法—概念

調查表法是利用統計表來進行數據整理和粗略原因分析的一種方法，也叫檢查表法或統計分析表法。

統計分析表是最為基本的質量原因分析方法，也是最為常用的方法。在實際工作中，經常把統計分析表和分層法結合起來使用，這樣可以把可能影響質量的原因調查得更為清楚。需要注意的是，統計分析表必須針對具體的產品，設計出專用的調查表進行調查和分析。

四．直方圖（histogram）法—概念

從總體中隨機抽取樣本，將從樣本中獲得的數據進行整理，從而找出數據變化的規律，以便測量工序質量的好壞

局限性：盡管直方圖能夠很好地反映出產品質量的分布特徵，但由於統計數據是樣本的頻數分布，它不能反映產品隨時間的過程特性變化，有時生產過程已有趨向性變化，而直方圖卻屬正常型，這也是直方圖的局限性。

五．散布圖法—概念

散布圖(相關圖)是通過分析研究兩種因素的數據的關系，來控制影響產品質量的相關因素的一種有效方法。相關關系一般可為：原因與結果的關系；結果與結果的關系；原因與原因的關系。

散布圖法用途

用相關圖法，可以應用相關系數、回歸分析等進行定量的分析處理，確定各種因素對產品質量影響程度的大小。如果兩個數據之間的相關度很大，那麼可以通過對一個變數的控制來間接控制另外一個變數。

相關圖的分析，可以幫助我們肯定或者是否定關於兩個變數之間可能關系的假設。

一、服務質量體系的概念

任何一個服務企業要實現自己的質量戰略即優質服務戰略，沒有完善的服務質量體系作保證，都將僅僅成為空洞的口號。

服務質量體系就是為實施服務質量管理所需的組織結構、程序、過程和資源。

理解該含義應注意的三個方面。

二、服務的特徵

(一)服務或多或少都具有無形性

無形性是服務的最主要特徵。(二)服務的生產和消費不可分離(三)服務並非實物，是一系列的活動或過程(四)服務一般具有差異性服務質量的檢驗較難採用統一的標准。(五)服務一般具有不可儲存性(六)服務是不包括服務所有權轉讓的特殊形式的交易活動服務在交易完成以後就消失了，顧客並沒有實質性地擁有服務。

三．服務質量的內容

從顧客的角度來說，顧客購買服務並進行消費，對服務質量的認識可以歸納為兩個方面：

一方面是顧客通過消費服務究竟得到了什麼，即服務的結果，通常稱之為服務的技術質量；

另—方面是顧客是如何消費服務的，即服務的過程，通常稱之為服務的功能質量。

服務質量既是服務的技術質量和功能質量的統一，也是服務的過程和結果的統一。

技術質量是客觀存在的，而功能質量則是主觀的，是顧客對過程的主觀感覺和認識。顧客評價服務質量的好壞，是根據顧客所獲得的服務效果和所經歷的服務感受，兩者綜合在一起才形成完整的感受。

四．1.服務質量的來源

古默森的理論叫4Q模式，即質量的形成有四個來源：設計來源、生產來源、供給來源和關系來源。

這里根據服務的生產和消費不可分離的特徵，將服務質量的來源綜合為：（1）設計來源（2）供給來源（3）關系來源

1、 質量管理專家的相關思想和理論

2、 質量管理的發展歷程：

質量檢驗階段（操作者工長檢驗員的質量管理）

統計質量管理階段。休哈特提出了控制好預防缺陷的概念，並發明了控制體，把數理統計方法引入到質量管理中；道奇和羅米格提出了抽樣檢查法，它既能保證一定的質量要求，又能大大的減少啊檢驗工作量。

現代質量管理階段。朱蘭認為，保護消費者權利運動是質量管理學在理論和實踐放米娜的重大發展推動力；菲根堡姆出版《全面質量控制》一書，強調執行質量只能是公司全體人員的責任，即全面質量管理概念。

3、 全面質量管理的基本要求

三全一多：全員的質量管理、全過程的質量管理、全企業的質量管理、多方法的質量管理。

4、 ISO9000核心標准

ISO9000：2000《質量管理體系——基礎和術語》

ISO9001：2000《質量管理體系——要求》

ISO9004：2000《質量管理體系——業績改進指南》

ISO19011《質量和環境管理體系審核指南》

5、 質量管理基礎工作：標准化工作、計量工作、質量信息工作、質量責任制和質量教育工作

6、 質量成本的構成

內部運行質量成本：預防成本、鑒定成本、內部損失成本、外部損失成本

外部質量保證成本

7、 術語•產品：硬體、流程性材料、軟體、服務

8、 質量管理原則：以顧客為中心、領導作用、全員參與、管理的系統方法、過程方法、基於事實的決策方法、持續改進、互利的供方關系

9、 過程方法的四個模塊：資源管理，管理職責，測量、分析和改進，產品實現

10、 ISO9000/1/4的聯系與區別

與ISO9000的關系

ISO9000所屬的質量管理基本原則、術語定義和質量管理體系的基本原理，是理解和掌握本標準的基礎。

與ISO9004的關系

ISO9001和ISO9004是互相成對的協調一致質量管理體系標准，兩項標准可以一起使用，也可以單獨使用。ISO9004和ISO9001質量管理體系要求的基礎上，擴展了描述質量管理體系應包括的過程。必須注意，ISO9004不是事實ISO9001的指南，而是為希望超過ISO9001所述的最低要求的組織提供了指南。量小標準的具體關系見圖。

比較標志 ISO9001 ISO9004

相同點 1 標准屬性 質量管理體系標准

2 標准結構 總體結構與其他管理體系標准相似，均互相相容

3 適用范圍 適用於所有組織和產品

不同點 4 標准目的 為產品質量達到規定要求，使顧客滿意，明確對質量管理體系的最低要求 為改進組織整體業績，使各相關方滿意，提供質量管理體系的應用指南

5 內容範圍 闡述質量管理體系必須在產品質量保證和顧客滿意兩方面達到的最低要求，通過符合這些要求證實具有提供滿足顧客要求和適用法律、法規要求的產品的能力 超越ISO9001的內容，闡述了綜合性質量管理體系，描述了體系應含的過程，指引組織持續改進內部過程，且提高效率和有效性

6 應用領域 組織內部管理、合同目的和認證等 組織內部管理

7 採用方法 旨在採用全部內容，在特定情況下，有條件地允許剪裁製定章節范圍的要求 無條件約束，組織自定，酌情採用標準的內容

11、 管理評審與內部審核的關系

12、 內部審核的范圍：要素、場所、活動；一般順序：去定任務、審核准備、現場審核、編寫審核報告、糾正措施的跟蹤及匯總分析。

13、 質量改進的工具：頭腦風暴法、親和圖法、水平對比法、流程圖、數圖、分層法 、排列圖法 、因果分析圖法 、調查表法 、直方圖法 、散布圖法 、控制圖法

14、 質量改進的運行方式：PDCA循環，即計劃、執行、檢查、總結

15、 質量檢驗的含義和任務：ISO9001：2000中指出，檢驗是「通過觀察和判斷，必要時結合測量、試驗所進行的符合性評價」；檢驗包括以下幾個步驟：度量、比較、判斷、處理

16、 檢驗的質量職能：鑒別職能、保證職能、報告職能、預防職能、改進職能。

17、 質量檢驗的方式

(一)按檢驗的數量特徵劃分為全數檢驗和抽樣檢驗

(二)按檢驗的質量特性值的特徵劃分為計數檢驗和計量檢驗

(三)按檢驗方法的特徵劃分為理化檢驗和感官檢險

(四)按檢驗對象檢驗後的狀態特徵劃分為破壞性檢驗和非破壞性檢驗

(五)按檢驗實施的位置特徵劃分為固定檢驗和流動檢驗

(六)按檢驗目的的特徵劃分為驗收檢驗和監控檢驗

18、 質量檢驗的基本類型: 進貨檢驗、工序檢驗和完工檢驗

（一）進貨檢驗

1.首件（批）樣品檢驗；2.成批進貨檢驗（1）分類檢驗法，（2）抽樣檢驗

（二）工序檢驗

1.首件檢驗。 2.巡迴檢驗。 3.末件檢驗。

（三）完工檢驗

完工檢驗可能需要模擬產品用戶的使用條件和運行方式。

可以是全數檢驗，也可以是抽樣檢驗，應該視產品特點及工序檢驗情況而定。

19、 設置檢驗機構通常應遵循如下原則：

(1)檢驗機構應設置在質量把關的關鍵環節；

(2)檢驗機構應能滿足生產流程的需要；

(3)檢驗機構應有合適的空間和環境；

(4)檢驗機構的設置應考慮節約檢驗成本。

20、 三檢制（檢驗制度）：三檢制就是操作者自檢、工人之間互檢和專職檢驗人員專檢相結合的一種檢驗制度。

21、 服務質量：就是服務固有的特性滿足顧客和其他相關方要求的能力。

22、 服務質量環：是對服務質量形成的流程和規律的描述（如下圖），其中三個最基本的過程就是市場開發、設計和服務提供。

23、 服務質量的內容：從顧客的角度來說，顧客購買服務並進行消費，對服務質量的認識可以歸納為兩個方面： 一方面是顧客通過消費服務究竟得到了什麼，即服務的結果，通常稱之為服務的技術質量；另—方面是顧客是如何消費服務的，即服務的過程，通常稱之為服務的功能質量。服務質量既是服務的技術質量和功能質量的統一，也是服務的過程和結果的統一。技術質量是客觀存在的，而功能質量則是主觀的，是顧客對過程的主觀感覺和認識。顧客評價服務質量的好壞，是根據顧客所獲得的服務效果和所經歷的服務感受，兩者綜合在一起才形成完整的感受。

24、 服務質量的來源：設計來源、供給來源、關系來源、技術質量、功能質量

25、 建立服務質量體系的要點：服務質量體系主要有管理者的職責、自願、質量體系結構三個關鍵方面，而顧客則是服務質量體系三個關鍵方面的核心。只有當管理者的職責、人力和物質資源以及質量體系結構三者之間相互配合和協調時，才能保證顧客滿意。

26、 認證制度的類型：型式試驗、型式試驗加市場抽樣檢驗、型式試驗加工廠抽樣檢驗、型式試驗加認證後監督（市場和工廠抽樣檢驗）、型式試驗加工廠質量體系評定加認證後監督（質量體系復查、市場和工廠抽樣檢驗）、工廠質量體系評定、披肩、百分之百檢驗

9. flag tag是什麼

Flag標簽蛋白

Flag標簽蛋白為編碼8個氨基酸的親水性多肽（DYKDDDDK），同時載體中構建的Kozak序列使得帶有FLAG的融合蛋白在真核表達系統中表達效率更高。 FLAG作為標簽蛋白，其融合表達目的蛋白後具有以下優點：

FLAG作為融合表達標簽，其通常不會與目的蛋白相互作用並且通常不會影響目的蛋白的功能、性質，這樣就有利用研究人員對融合蛋白進行下游研究。
融合FLAG的目的蛋白，可以直接通過FLAG進行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白，並且純化效率高。
FLAG作為標簽蛋白，其可以被抗FLAG的抗體識別，這樣就方便通過Western Blot、ELISA等方法對含有FLAG的融合蛋白進行檢測、鑒定。
融合在N端的FLAG，其可以被腸激酶切除（DDDK），從而得到特異的目的蛋白。因此現FLAG標簽已廣泛的應用於蛋白表達、純化、鑒定、功能研究及其蛋白相互作用等相關領域。

一個什麼公司的產品介紹里的 找不著鏈接了就不貼引用了

說白了就是做表達出來的蛋白的一個標簽

10. Android面試題-程序之間的親和性的理解, 該怎麼回答哦

可以如下回答：
1、默認情況下一個應用的所有Activity都是具有相同的affinity，都是從application中繼承，application的affinity默認就是manifest的包名。
2、affinity對Activity來說，就像是身份證一樣，可以告訴所在的Task，自己屬於其中的一員。
3、應用場合：
a:根據affinity重新為Activity選擇合適的宿主Task;
b:與allowTaskReparenting屬性配合;
c:啟動Activity使用Intent設置了FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK標記。