蛋白純化樹脂幹了

A. 蛋白純化的原理是什麼

蛋白質分離純化常用方法有： 1、沉澱， 2、電泳：蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。4、層析： a.離子交換層析，利用蛋白質的兩性游離
蛋白質的分離純化在生物化學研究應用中使用廣泛，是一項重要的操作技術。 一個典型的真核細胞可以包含數以千計的不同蛋白質，一些含量十分豐富，一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質，必須首先將該蛋白質從其他蛋白質和非蛋白質分子中純化出來。利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質的污染，而利用各蛋白質的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段二個階段。一般蛋白純化採用的方法為樹脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如DNA、RNA等分開，由於此時樣本體積大、成分雜，要求所用的樹脂高容量、高流速、顆粒大、粒徑分布寬．

B. 做Ni-NTA樹脂純化蛋白時時沒有層析柱怎麼辦可以用其他的什麼東西代替柱子嗎

(2) 與三價金屬離子螯合劑亞氨基二乙酸製成的Ni-IDA-瓊脂糖相比，Ni-NTA-瓊脂糖的非特異性吸附內明顯減少，可讓使用容者獲得更高純度的目標蛋白
(3) 支持變性包涵體蛋白的柱上復性，起到分離、復性同時進行的效果
(4) 可耐受溶液中更高濃度的還原試劑（β巰基乙醇最高可用到20mM）。
(5) 瓊脂糖基質在pH 3-12的范圍內保持穩定，可以耐受反復的在位清洗（CIP）。

(7) 可以反復使用和再生5-10次. 基質: 帶有Ni2+高度交聯的6%瓊脂糖; 平均顆粒大小: 90um; 動態結合載量: Breakthrough capacity at 10%,150 cm/h：大約40 mg histidine-tagged 蛋白質/ml 填料; 金屬離子載量: 大約 15 µmol Ni2+/ml 填料; 化學穩定性: 40°C 放置一周: 0.01 M HCl, 0.1 M NaOH 12 h: 1 M NaOH, 70% 乙酸30 min: 30% 2-異丙醇1 h: 2% SDSpH穩定性:3-12 Store:2-8°C

C. 蛋白樹脂是什麼化學性質穩定嗎

蛋白樹脂通常是指受熱後有軟化或熔融范圍，軟化時在外力作用下有流動傾內向，常溫下是固態、半固容態，有時也可以是液態的有機聚合物。嚴格來講，樹脂是一種酚醛結構的化學物質，種類有很多，廣泛應用於我們的輕工業和重工業當中，我們日常的生活當中也經常時候到，比如塑料、樹脂眼鏡，塗料、松香。
樹脂有天然樹脂和合成樹脂之分。天然樹脂是指由自然界中動植物分泌物所得的無定形有機物質，如松香、琥珀、蟲膠等。合成樹脂是指由簡單有機物經化學合成或某些天然產物經化學反應而得到的樹脂產物。
化學性質很穩定。 希望對你有所幫助

D. 蛋白質純化儀

蛋白質純化與結晶的原理 獲得蛋白質的晶體結構的第一個瓶頸，就是制備大量純化的蛋白質（>10mg），其濃度通常在10mg/ml以上，並以此為基礎進行結晶條件的篩選。運用重組基因的技術，將特定基因以選殖（clone）的方式嵌入表現載體（expression vector）內，此一載體通常具有易於調控的特性。之後再將帶有特定基因的載體送入可快速生長的菌體中，如大腸桿菌（Escherichia coli），在菌體快速生長的同時，也大量生產表現載體上的基因所解譯出之蛋白質。一般而言純度越高的蛋白質比較有機會形成晶體，因此純化蛋白質的步驟就成為一個重要的決定因素。 在取得高純度的蛋白質溶液後，接下來就是晶體的培養。蛋白質晶體與其他化合物晶體的形成類似，是在飽和溶液中慢慢產生的，每一種蛋白質養晶的條件皆有所差異，影響晶體形成的變數很多，包含化學上的變數，如酸鹼度、沉澱劑種類、離子濃度、蛋白質濃度等；物理上的變數，如溶液達成過飽和狀態的速率、溫度等；及生化上的變數，如蛋白質所需的金屬離子或抑制劑、蛋白質的聚合狀態、等電點等，皆是養晶時的測試條件。截至目前為止，並無一套理論可以預測結晶的條件，所以必須不斷測試各種養晶溶液的組合後，才可能得到一顆完美的單一晶體。 蛋白質晶體的培養，通常是利用氣相擴散法（Vapor Diffusion Method）的原理來達成；也就是將含有高濃度的蛋白質（10～50mg/ml）溶液加入適當的溶劑，慢慢降低蛋白質的溶解度，使其接近自發性的沈澱狀態時，蛋白質分子將在整齊的堆棧下形成晶體。舉例來說，我們將蛋白質溶於低濃度（~1.0M）的硫酸銨溶液中，將它放置於一密閉含有高濃度（~2.0M）硫酸銨溶液的容器中，由氣相平衡，可以緩慢提高蛋白質溶液中硫酸銨的濃度，進而達成結晶的目的。 蛋白質晶體在外觀上與其他晶體並無明顯不同之處，但在晶體的內部，卻有很大的差異。一般而言，蛋白質晶體除了蛋白質分子外，其他的空間則充滿約40%至60%之間的水溶液，其液態的成分不僅使晶體易碎，也容易使蛋白質分子在晶格排列上有不規則的情形出現，造成晶體處理時的困難及繞射數據上的搜集不易等缺點。但也由於高含水量的特性，讓蛋白質分子在晶體內與水溶液中的狀態，極為相似。所以由晶體所解出的蛋白質結構，基本上可視為自然狀態下的結構。

E. 我也是做蛋白純化的，有種蛋白第一次純化時，也是非常雜，你之前又遇到過類似情況有什麼經驗嗎xiexie

一般可溶性表達都會遇同類問題，個人覺得有如下方面可以考慮：

1. 仔細研究填料的說明書，同樣是His-tag或GST標簽的填料，但不同廠家，或者不同解析度，其緩沖液和洗脫濃度都是有差異的，務必注意！比如，在選擇填料時，可選擇顆粒稍微細些的填料，解析度會更好些。

2. 在樣品的各階段都要控制雜蛋白，以最常見的His-tag，可溶表達為例，上樣時，加入低濃度（5-10mM咪唑）；上樣後，多洗幾個柱體積的緩沖液及低濃度咪唑（20-50mM），更多的洗掉雜蛋白（請注意，在這個過程也會伴隨目標蛋白的緩慢洗脫，會一定程度降低得率，所以需要優化時間和濃度）；再採用梯度咪唑洗脫目標蛋白。（所以，第一次用連續梯度洗脫，觀察最佳洗脫的咪唑濃度是很有必要的）；

3. 如果一種方法（如親和）經過優化，某些雜蛋白可能就是難以分離，仍不足以得到理想的純度，完全可以採用第二步純化，如離子交換，往往會達到事半功倍的效果，比你總折騰一種方法劃算。

個人見解，歡迎繼續討論，祝實驗順利！

F. 做ni柱蛋白純化時加樹脂0.5ml可以么

Ni離氫氧根離反應氫氧化鎳沉澱所Ni柱需要先用EDTA螯合掉鎳離再用氫氧化鈉沖洗避免沉澱物質堵塞柱
另外羅氏產 cOmplete His 直接用NaOH沖洗

G. 做蛋白純化的人主要去哪工作

蛋白質的分離純化方法
2.1根據分子大小不同進行分離純化
蛋白質是一種大分子物質,並且不同蛋白質的分子大小不同,因此可以利用一些較簡單的方法使蛋白
質和小分子物質分開,並使蛋白質混合物也得到分離。根據蛋白質分子大小不同進行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過濾等。透析和超濾是分離蛋白質時常用的方法。透析是將待分離的混合物放入半透膜製成的透析袋中,再浸入透析液進行分離。超濾是利用離心力或壓力強行使水和其它小分子通過半透膜,而蛋白質被截留在半透膜上的過程。這兩種方法都可以將蛋白質大分子與以無機鹽為主的小分子分開。它們經常和鹽析、鹽溶方法聯合使用,在進行鹽析或鹽溶後可以利用這兩種方法除去引入的無機鹽。由於超濾過程中,濾膜表面容易被吸附的蛋白質堵塞,以致超濾速度減慢,截流物質的分子量也越來越小。所以在使用超濾方法時要選擇合適的濾膜,也可以選擇切向流過濾得到更理想的效果
離心也是經常和其它方法聯合使用的一種分離蛋白質的方法。當蛋白質和雜質的溶解度不同時可以利用離心的方法將它們分開。例如,在從大米渣中提取蛋白質的實驗中,加入纖維素酶和α-澱粉酶進行預處理後,再用離心的方法將有用物質與分解掉的雜質進行初步分離[3]。使蛋白質在具有密度梯度的介質中離心的方法稱為密度梯度(區帶)離心。常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料的密度梯度。可以根據所需密度和滲透壓的范圍選擇合適的密度梯度。密度梯度離心曾用於純化蘇雲金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白,得到的產品純度高但產量偏低。蔣辰等[6]通過比較不同密度梯度介質的分離效果,利用溴化鈉密度梯度得到了高純度的蘇雲金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白。凝膠過濾也稱凝膠滲透層析,是根據蛋白質分子大小不同分離蛋白質最有效的方法之一。凝膠過濾的原理是當不同蛋白質流經凝膠層析柱時,比凝膠珠孔徑大的分子不能進入珠內網狀結構,而被排阻在凝膠珠之外,隨著溶劑在凝膠珠之間的空隙向下運動並最先流出柱外;反之,比凝膠珠孔徑小的分子後流出柱外。目前常用的凝膠有交聯葡聚糖凝膠、聚丙烯醯胺凝膠和瓊脂糖凝膠等。在甘露糖蛋白提純的過程中使用凝膠過濾方法可以得到很好的效果,純度鑒定證明產品為分子量約為32 kDa、成分是多糖∶蛋白質(88∶12)、多糖為甘露糖的單一均勻糖蛋白[1]。凝膠過濾在抗凝血蛋白的提取過程中也被用來除去大多數雜蛋白及小分子的雜質[7]。
2.2 根據溶解度不同進行分離純化

影響蛋白質溶解度的外部條件有很多,比如溶液的pH值、離子強度、介電常數和溫度等。但在同一條件下,不同的蛋白質因其分子結構的不同而有不同的溶解度,根據蛋白質分子結構的特點,適當地改變外部條件,就可以選擇性地控制蛋白質混合物中某一成分的溶解度,達到分離純化蛋白質的目的。常用的方法有等電點沉澱和pH值調節、蛋白質的鹽溶和鹽析、有機溶劑法、雙水相萃取法、反膠團萃取法等。

等電點沉澱和pH值調節是最常用的方法。每種蛋白質都有自己的等電點,而且在等電點時溶解度最
低;相反,有些蛋白質在一定pH值時很容易溶解。因而可以通過調節溶液的pH值來分離純化蛋白質。王洪新等[8]研究茶葉蛋白質提取過程發現,pH值為時茶葉蛋白提取效果最好,提取率達到36·8%,初步純化得率為91·0%。李殿寶[9]在從葵花脫脂粕中提取蛋白質時將蛋白溶液的pH值調到3~4,使目標蛋白於等電點沉澱出來。等電點沉澱法還應用於葡萄籽中蛋白質的提取。李鳳英等[10]測得葡萄籽蛋白質的等電點為3·8。他們利用鹼溶法提取葡萄籽蛋白質,得到了最佳的提取工藝為:以1×10-5mol·L-1的NaOH溶液,按1∶5的料液比,在40℃攪拌40 min,葡萄籽蛋白質提取率達73·78%。另外還可以利用鹼法提取大米蛋白,其持水性、吸油性和起泡性等均優於酶法提取[11]。利用酸法提取得到的鰱魚魚肉蛋白質無腥味、色澤潔白,蛋白質產率高達90%[12]。
蛋白質的鹽溶和鹽析是中性鹽顯著影響球狀蛋白質溶解度的現象,其中,增加蛋白質溶解度的現象稱鹽溶,反之為鹽析。應當指出,同樣濃度的二價離子中性鹽,如MgCl2、(NH4)2SO4對蛋白質溶解度影響的效果,要比一價離子中性鹽如NaCl、NH4Cl大得多。在葡萄籽蛋白提取工藝中除了可以利用鹼溶法還可以利用鹽溶法來提取蛋白質,其最佳提取工藝是:以10%NaCl溶液,按1∶25的料液比,在30℃攪拌提取30min,蛋白質提取率為57·25%[10]。鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法,如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法,其中硫酸銨鹽析法廣泛應用於生產。由於硫酸銨在水中呈酸性,為防止其對蛋白質的破壞,應用氨水調pH值至中性。為防止不同分子之間產生共沉澱現象,蛋白質樣品的含量一般控制在0·2% ~2·0%。利用鹽溶和鹽析對蛋白質進行提純後,通常要使用透析或者凝膠過濾的方法除去中性鹽[13]。

有機溶劑提取法的原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白質在水中的溶解度顯著降低;而且在一定溫度、pH值和離子強度下,引起蛋白質沉澱的有機溶劑的濃度不同,因此,控制有機溶劑的濃度可以分離純化蛋白質。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預冷的培養液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰核蛋白析出,從而純化冰核蛋白[14]。由於在室溫下,有機溶劑不僅能引起蛋白質的沉澱,而且伴隨著變性。因此,通常要將有機溶劑冷卻,然後在不斷攪拌下加入有機溶劑防止局部濃度過高,蛋白質變性問題就可以很大程度上得到解決。對於一些和脂質結合比較牢固或分子中極性側鏈較多、不溶於水的蛋白質,可以用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑提取,它們有一定的親水性和較強的親脂性,是理想的提取液。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白最早由Cohn於1949年提出,用於制備丙種球蛋白。冷乙醇法也是目前WHO規程和中國生物製品規程推薦的方法,不僅解析度高、提純效果好、可同時分離多種血漿成分,而且有抑菌、清除和滅病毒的作用[15]。

萃取是分離和提純有機化合物常用的一種方法,而雙水相萃取和反膠團萃取可以用來分離蛋白質。雙水相萃取技術(Aqueous two phase extraction,ATPE)是指親水性聚合物水溶液在一定條件下形成雙水相,由於被分離物在兩相中分配的不同,便可實現分離,被廣泛用於生物化學、細胞生物學和生物化工等領域的產品分離和提取。此方法可以在室溫環境下進行,雙水相中的聚合物還可以提高蛋白質的穩定性,收率較高。對於細胞內的蛋白質,需要先對細胞進行有效破碎。目的蛋白常分布在上相並得到濃縮,細胞碎片等固體物分布在下相中。採用雙水相系統濃縮目的蛋白,受聚合物分子量及濃度、溶液pH值、離子強度、鹽類型及濃度的影響[16]。

反膠團萃取法是利用反膠團將蛋白質包裹其中而達到提取蛋白質的目的。反膠團是當表面活性劑
在非極性有機溶劑溶解時自發聚集而形成的一種納米尺寸的聚集體。這種方法的優點是萃取過程中蛋
白質因位於反膠團的內部而受到反膠團的保護。程世賢等[17]就利用反膠團萃取法提取了大豆中的蛋白質。

2.3 根據電荷不同進行分離純化
根據蛋白質的電荷即酸鹼性質不同分離蛋白質的方法有電泳和離子交換層析兩類。
在外電場的作用下,帶電顆粒(如不處於等電點狀態的蛋白質分子)將向著與其電性相反的電極移動,這
種現象稱為電泳。聚丙烯醯胺電泳是一種以聚丙烯醯胺為介質的區帶電泳,常用於分離蛋白質。它的優點是設備簡單、操作方便、樣品用量少。等電聚焦是一種高解析度的蛋白質分離技術,也可以用於蛋白質的等電點測定。利用等電聚焦技術分離蛋白質混合物是在具有pH梯度的介質中進行的。在外電場作用下各種蛋白質將移向並聚焦在等於其等電點的pH值梯度處形成一個窄條帶。孫臣忠等[18]研究了聚丙烯醯胺電泳、等電聚焦電泳和等速提純電泳在分離純化蛋白質中的應用。結果發現,聚丙烯醯胺電泳的條帶解析度低,加樣量不高;等電聚焦電泳解析度最高,可以分離同種蛋白的亞成分,加樣量最小;等速提純電泳區帶解析度較高,可將樣品分成單一成分,加樣量最大。

離子交換層析(Ion exchange chromatography,IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。離子交換層析中,基質由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的為陰離子交換樹脂;反之為陽離子交換樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。當蛋白質處於不同的pH值條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,被留在層析柱上,通過提高洗脫液中的鹽濃度,將吸附在層析柱上的蛋白質洗脫下來,其中結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。李全宏等[19]將離子交換層析應用於濃縮蘋果汁中蛋白質的提純。另外,離子交換層析還用於抗凝血蛋白的提取[7]。

2.4 利用對配體的特異親和力進行分離純化
親和層析是利用蛋白質分子對其配體分子特有的識別能力(即生物學親和力)建立起來的一種有效的純化方法。它通常只需一步處理即可將目的蛋白質從復雜的混合物中分離出來,並且純度相當高。應用親和層析須了解純化物質的結構和生物學特性,以便設計出最好的分離條件。近年來,親和層析技術被廣泛應用於靶標蛋白尤其是疫苗的分離純化,特別是在融合蛋白的分離純化上,親和層析更是起到了舉足輕重的作用,因為融合蛋白具有特異性結合能力[20]。親和層析在基因工程亞單位疫苗的分離純化中應用也相當廣泛[21]。范繼業等[22]利用殼聚糖親和層析提取的抑肽酶比活達到71 428 BAEE·mg-1,純化回收率達到62·5%。該方法成本較低,吸附劑價格低廉、機械強度高、抗污染能力較強、非特異性吸附較小、可反復使用、適用性廣,產品質量穩定。
3 展望
在實際工作中,很難用單一方法實現蛋白質的分離純化,往往要綜合幾種方法才能提純出一種蛋白質。
理想的蛋白質分離提純方法,要求產品純度和總回收率越高越好,但實際上兩者難以兼顧,因此,考慮分離
提純的條件和方法時,不得不在兩者之間作適當的選擇;一般情況下,科研上更多地選擇前者,工業生產上
更多地選擇後者。因此,每當需要提純某種蛋白質時,首先要明確分離純化的目的和蛋白質的性質,以便選擇最佳的分離純化方法,從而得到理想的效果。今後,蛋白質提純技術的發展將不斷促進對蛋白質性質的研究,同時對蛋白質性質的研究也將反過來提高蛋白質分離純化技術,兩者的互相促進終將會對生命科學的進步作出重大貢獻。

H. GST Sefinose Resin純化蛋白時樹脂出現裂痕有什麼影響

是進入空氣引起的嗎？那會影響柱效，你的洗脫峰的峰型可能有變化

I. 急求畢業論文摘要的外文翻譯~要求語法詞彙准確~不要軟體在線等翻譯~謝謝啦~

你這摘要難度太高了，專業詞彙太多，真是自己給自己找麻煩。

J. 求樹脂快速乾的方法

樹脂快速乾的方法：

1、提高溫度：如果要從理論上來說它的溫度每升高 10℃，那麼它的固化速度就可以快 1 倍。

2、提高促進劑用量：比如說促進劑越多，那麼就會固化得越快。

3、改變促進劑類型：最好就是使用活性更高的促進劑。不過這邊要注意就是活性更高，那麼它的潛伏性就差，如果是單組份的產品，那麼就可以找一個平衡，雙組份就不要考慮這個了。

4、固化劑加量：可以考慮改變固化劑量那麼就會改變固化物結構，這樣也就改變了漆膜或者塗層或者製品的性能，這點一定要考慮清楚。

5、改變固化劑類型：這樣做也是能夠使用更高活性的固化劑，此法風險跟上面兩點差不多，使用的時候要注意，最好提前試驗比較好。

6、加入高活性成分：比如用鄰甲酚醛型環氧替換雙酚 A 型環氧，可以說這種在使用的時候也是有一定的風險。

7、使用高固分環氧或者粉末環氧：可以減少溶劑揮發時間。

(10)蛋白純化樹脂幹了擴展閱讀：

注意事項：

1、配料的影響

A、B料一般按重量配比或體積配比進行混料，一般重量配比≠體積配比，配比不正確會影響固化物的性能，有的會引起無法固化，調節A、B配比並不能達到調節固化速度的目的。

配料要注意做好A、B料的攪拌，攪拌要均勻，注意做好容器壁和容器底部的攪拌；攪拌不均勻，固化受影響，攪拌很不均勻，會導致不固化

2、水的影響

對於非水性環氧體系，固化之前不能接觸水，固化之前不能接觸水，固化之前不能接觸水。

3、時間的影響

環氧膠是通過A、B料混合，通過一定的溫度，一定的時間，由液體狀態最終固化為固體狀態，一般固化時間為8-12小時，48小時達到一個相對穩定的反應程度。