超濾第一次加什麼

A. 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。

B. 如何用蛋白濃縮管

選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。

通常應回截留分子量答不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。

新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。

(2)超濾第一次加什麼擴展閱讀：

超濾濃縮離心管，最新推出專利產品Hydrosart膜2K型，具有極低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。

備有四種材質的超濾膜：聚醚碸、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart，可根據不同要求靈活選用；兩種回收濃縮液的方法：既可用吸管直接吸取並回收，又可將離心管放入離心機反甩，將濃縮液甩入回收帽中，加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收；

C. 單純超濾的抗凝

治療前患者凝血狀態評估和抗凝葯物的選擇
參照血液凈化的抗凝治療。
抗凝方案
1、普通肝素首劑量0.3～1.0 mg/kg，追加劑量0.1～0.5mg/kg·h，間歇性靜脈注射或持續性靜脈輸注（常用），治療結束前30～60 分鍾停止追加。應依據患者的凝血狀態個體化調整。
2、低分子肝素一般選擇60～80IU/kg（4000～5000IU），推薦在治療前20～30 分鍾靜脈注射，無需追加劑量。
3 、阿加曲班一般首劑量250μg/kg 、追加劑量2μg/(kg·min) ， 或2μg/(kg·min)持續濾器前給葯，應依據患者血漿部分活化凝血酶原時間的監測，調整劑量。
抗凝治療的監測和並發症處理
參照血液凈化的抗凝治療章節。

D. 超濾膜怎麼清洗 超濾膜多久清洗一次

超濾膜清洗方法主要分為物理清洗和化學清洗兩大類，清洗周期通常在3至6個月內進行一次，具體取決於水質狀況。

清洗周期： 水質較好時，可延長至5至6個月。 水質較差時，周期可能縮短至3個月甚至更短。

物理清洗法： 逆向沖洗：用原水沖洗膜內及進水端面雜質。 反沖洗：用超濾水沖松膜表面污染物，從進水口和濃縮口排出，可加酸、鹼或次氯酸鈉等葯品加強效果。 正洗沖洗：用原水沖洗膜內及端面雜質，按運行狀態清洗膜。

化學清洗法： 酸溶液清洗：常用鹽酸、檸檬酸、草酸等，調配溶液PH值為2~3，循環清洗或浸泡0.5至1小時，去除無機雜質。 鹼溶液清洗：常用NaOH，調配溶液PH值為10~12，循環清洗或浸泡0.5至1小時，去除雜質及油脂。 氧化劑清洗：如1%~3%H2O2、500~1000mg/L NaClO等，去除污垢和細菌。 加酶洗滌劑清洗：如1%胃蛋白酶、胰蛋白酶等，去除蛋白質、多糖、油脂，效果更佳時可在55～60℃下進行。

注意：使用化學清洗時需謹慎，避免破壞膜性能或污染物變形。清洗超濾膜時，應先了解污染物組成，選擇合適方法。清水沖洗為首選，化學清洗僅在必要時採用。