1. 一篇看懂液相色谱柱的分类、选择及维护!
液相色谱柱的分类主要基于色谱固定相基质,选择需依据分析物性质,维护包括平衡、再生及日常保养。
一、液相色谱柱的分类
硅胶基质:
聚合物基质:如聚苯乙烯二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,适用于PH值范围宽及大分子物质的分离。
其他无机填料:如石墨化碳、氧化铝等,具有特殊性质,适用于特定分析需求。
二、色谱柱的选择
三、色谱柱的维护
平衡:使用甲醇或乙腈冲洗色谱柱,确保分析样品流动相与冲洗溶剂互溶,以保持色谱柱的性能稳定。
再生:长期使用后柱效下降,可进行再生处理,如使用特定溶剂冲洗以恢复柱效。
日常保养:使用预柱保护分析柱,避免流动相组成及极性的剧烈变化;使用前对流动相进行脱气和过滤处理,以减少杂质对色谱柱的污染。
2. 一篇看懂液相色谱柱的分类、选择及维护!
液相色谱柱的分类及选择与维护是进行高效液相色谱分析的关键。
一、液相色谱柱的分类
按照色谱固定相基质,液相色谱柱可以分为以下几类:
1. 硅胶基质
1.1 反相色谱柱:使用以硅胶为基础,表面键合有弱极性官能团的键合相。流动相通常为水、缓冲液与甲醇、已腈等混合物。样品流出顺序为极性强的先被冲出,极性弱的后被冲出。
1.2 正相色谱:使用硅胶作为固定相,其他具有极性官能团的键合相填料。流动相极性相对较低。分离顺序依据样品中各组分极性大小。
1.3 离子交换色谱柱:使用磺化交联强阴/阳离子键合硅胶色谱柱,如强阴离子色谱柱(SAX)和强阳离子交换色谱柱(SCX)。
2. 聚合物基质
聚合物调料如聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,优点是在PH值为1~14均可使用,对大分子物质分离有效。
3. 其他无机填料
如石墨化碳、氧化铝等,具有特殊性质,适用于特定用途。
二、色谱柱的选择
液相色谱柱的选择主要依据分析物的性质,如硅胶基质填料用于小分子量物质,聚合物填料用于大分子物质。
三、色谱柱的维护
1. 色谱柱的平衡:使用甲醇或乙腈冲洗色谱柱,确保分析样品流动相与冲洗溶剂互溶。
2. 色谱柱的再生:长期使用后柱效下降,可进行再生处理。
3. 色谱柱的维护:使用预柱保护分析柱,避免流动相组成及极性的剧烈变化,使用前经脱气和过滤处理。
3. 色谱柱使用和维护注意事项
正确使用和维护色谱柱至关重要,稍有不慎可能影响其性能和寿命。以下是几个关键注意事项:
1. 避免极端压力和温度变化,以及机械震动。温度骤变或柱体跌落可能导致填充物受损;柱压的快速升降也会冲击填料。调节流速需平稳,进样时阀门转动不可过缓。
2. 在调整溶剂组成时,尤其在反相色谱中,应逐渐进行,不可直接从有机溶剂变为全水,反之亦然。
3. 除非生产商明确允许,否则一般不推荐反冲色谱柱,因为这会快速降低柱效。若要反冲,必须确保柱头杂质已清除。
4. 选择适当的流动相(注意pH值),以免固定相受损。有时可在进样器前加预柱,以减少硅胶基质溶解分析柱的风险。
5. 避免直接注入复杂样品,特别是生物样品,可能需要预处理或加保护柱。保护柱应定期更换,填充与分析柱相似的固定相。
6. 定期用强溶剂清洗色谱柱,清洗时需逐步更换溶剂,每种溶液体积为柱体积的20倍左右。清洗顺序和溶剂可参考文章提供的例子。
7. 存储色谱柱时,要确保柱内充满乙腈或甲醇,接头紧固,防止溶剂挥发。避免在柱内留置缓冲液过夜。
8. 压力升高可能是滤片堵塞或大分子污染,柱效降低可能意味着柱头塌陷。处理方法包括取出部分填料,然后用相同溶剂填充并压平。
9. 保护柱可以延长柱子寿命,尽管会略降柱效。硅胶柱在pH2~9范围内使用,柱顶可能吸附物质,定期检查并处理。
10. 工作后使用强洗脱液冲洗,如ODS柱用甲醇。使用盐缓冲液后需用无盐流动相冲洗,避免卤族元素对管道的腐蚀。长期不使用,建议每隔几天开机冲洗。
色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。