蛋白浓缩被超滤管吸附

Ⅰ 如何用蛋白浓缩管

选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。

通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

(1)蛋白浓缩被超滤管吸附扩展阅读：

超滤浓缩离心管，最新推出专利产品Hydrosart膜2K型，具有极低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜。

备有四种材质的超滤膜：聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart，可根据不同要求灵活选用；两种回收浓缩液的方法：既可用吸管直接吸取并回收，又可将离心管放入离心机反甩，将浓缩液甩入回收帽中，加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收；

Ⅱ 超滤离心管如何选择以及使用方法

超滤离心管在蛋白质、DNA和生物分子的浓缩、纯化和脱盐过程中被广泛应用。选择和使用超滤离心管时，需要理解其与微滤的区别。

微滤（Microfiltration）利用微孔膜介质去除溶液中尺寸为0.1 μm至10.0 μm的颗粒或生物体，广泛应用于生物制药预过滤和除菌过滤。微滤在细胞实验中常用于样品和培养基灭菌，以及从细胞裂解物中去除完整细胞和碎片，确保下游应用结果准确性。

超滤（Ultrafiltration）通过压力或浓度梯度使料液通过半透膜进行分离，能截留尺寸范围为1-1000kDa的分子，并允许盐和水等小分子通过。它广泛应用于蛋白质溶液的分离和纯化，以及核酸样品制备，如分子克隆和质粒纯化。与沉淀法相比，超滤更为温和，避免生物大分子失活。

超滤离心管是一种利用离心力驱动溶液通过超滤膜进行快速浓缩、渗滤和缓冲液置换的装置，由盖子、过滤装置和离心管组成。通过选择适合的膜孔径，可进行除热源、澄清和分离大分子污染物，或浓缩和脱盐目标分子。

选择超滤离心管时，需考虑样品起始量及超滤膜的截留分子量（MWCO）。样品体积决定离心管尺寸，而截留分子量则需根据目标大分子的分子量选择，通常选择比目标分子小2-3倍的膜。

使用超滤离心管涉及准备、加样、离心和回收步骤。准备阶段需冲洗设备以消除甘油残留，然后在离心前加入适量纯水或缓冲溶液。离心前确保离心机转子平衡，以保持稳定。回收时，从过滤装置或离心管中轻轻提取样品，注意不要接触或损坏超滤膜。

遵循上述步骤，正确选择和使用超滤离心管，将有效实现蛋白质、DNA和生物分子的高效浓缩、纯化和脱盐，为科学研究和工业应用提供可靠支持。

Ⅲ 超过滤的工作原理及特点

进料液在一定压力作用下，水和小分子溶质透过膜成为透过液，而大分子溶质被膜截留为浓缩液。超滤过程主要有三种情况：
①被吸附在过滤膜的表面上和孔中（基本吸附）。
②被保留在孔内或者从那里被排出（堵塞）。
③机械地被截留在过滤膜的表面上（筛分）。
超过滤的特点：一是它的工作范围十分广泛，在水处理中分防细菌、大肠杆菌、热源、病毒、胶体微粒、大分子有机物质等，还可以用于特殊溶液返饥的分离。二是超过滤可以在常温下进行，因此对热敏感性物质如药品、蛋白质制剂、果汁、酶制品等的分离、浓缩、精制等，昌卜不会影响产品质量。三是超过滤过程不发生相变，因此漏迅返能耗低。四是超滤过程是压力作驱动力，故装置结构简单、操作方便、维修容易。因此，超过滤发展迅速，在过去的10年间，全世界超滤膜的生产平均年增长率在12%左右。

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Ⅳ 如何进行蛋白超滤设备选型

如何进行蛋白超滤设备选型？在分离分析特别是蛋白质分离分析中，层析是相当重要、且相当常见的一种技术，其原理较为复杂，对人员的要求相对较高，这里只能做一个相对简单的介绍。
一、 吸附层析
1、 吸附柱层析
吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。
2、 薄层层析
薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸层析操作进行展层。
3、 聚酰胺薄膜层析
聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分离目的。
二、 离子交换层析
离子交换层析是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。`
三、 凝胶过滤
凝胶过滤又叫分子筛层析，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。
四、 亲和层析
亲和层析的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中，特异的废物(S')才能和一定的酶(E)结合，产生复合物(E－S')一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生复合物。而亲和层析与酶一底物反应不同的是，前者进行反应时，配体(类似底物)是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体L(对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等)以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M(如活化琼脂糖等)上，制成亲和吸附剂M－L，或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此，当把围相载体装人小层析柱(几毫升到几十毫升床体积)后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附到固相载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个层析峰。然后，恰当地改变起始缓冲 液的PH值、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子，即可把物质S从固相载体上解离下来，并形成了第M个层析峰(见图6－2)。显然，通过这一操作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体具有亲和力(其大小有差异)时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后，可以重复使用。
上面介绍的亲和层析法亦称特异性配体亲和层析法。除此之外，还有一种亲和层析法叫通用性配体亲和层析法。这两种亲和层析法相比，前者的配体一般为复杂的生命大分子物质(如抗体、受体和酶的类似底物等)，它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单的小分子物质(如金属、染料，以及氨基酸等)，它成本低廉、具有较高的吸附容量，通过改善吸附和脱附条件可提高层析的分辨率。
五、 聚焦层析
聚焦层析也是一种柱层析。因此，它和另外的层析一样，照例具有流动相，其流动相为 多缓冲剂，固定相为多缓冲交换剂。
聚焦层析原理可以从PH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐述。
1、PH梯度溶液的形成
在离子交换层析中，PH梯度溶液的形成是靠梯度混合仪实现的。例如，当使用阴离子 剂进行层析时，制备PH由高到低呈线性变化的梯度溶液的方法是，在梯度仪的混合室(这层析柱者)中装高PH溶液，而在另一室装低PH极限溶液，然后打开层析柱的下端出口，让洗脱液连续不断地流过柱体。这时从柱的上部到下部溶液的PH值是由高到低变化的。而在聚焦层析中，当洗脱液流进多缓冲交换剂时，由于交换剂带具有缓冲能力的电荷基团，故PH梯度溶液可以自动形成。例如，当柱中装阴离子交换剂PBE94(作固定相)时，先用起始缓冲液(配方见表了一2)平衡到PHg，再用含PH6的多缓冲剂物质(作流动相)的淋洗液通过柱体，这时多缓冲剂中酸性最强的组分与碱性阴离子交换对结合发生中和作用。随着淋洗液的不断加人，住内每点的PH值从高到低逐渐下降。照此处理J段时间，从层析柱顶部到底部就形成了PH6～9的梯度。聚焦层析柱中的PH梯度溶液是在淋洗过程中自动形成的，但是随着淋洗的进行，PH梯度会逐渐向下迁移，从底部流出液的PH却由9逐渐降至6，并最后恒定于此值，这时层析柱的PH梯度也就消失了。
2．蛋白质的行为
蛋白质所带电荷取决于它的等电点(PI)和层析柱中的PH值。当柱中的PH低于蛋白质的PI时，蛋白质带正电荷，且不与阴离于交换剂结合。而随着洗脱剂向前移动，固定相中的PH值是随着淋洗时间延长而变化的。当蛋白质移动至环境PH高于其PI时，蛋白质由带正电行变为带负电荷，并与阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过，蛋白质周围的环境PH 再次低于PI时，它又带正电荷，并从交换剂解吸下来。随着洗脱液向柱底的迁移，上述过程将反复进行，于是各种蛋白质就在各自的等电点被洗下来，从而达到了分离的目的。
不同蛋白质具有不同的等电点，它们在被离子交换剂结合以前，移动之距离是不同的，洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。

供静脉注射的25%人胎盘血白蛋白（即胎白）通常是用硫酸铵盐析法、透析脱盐、真空浓缩等工艺制备的，该工艺流程硫酸铵耗量大，能源消耗多，操作时间长，透析过程易产生污染。改用超滤工艺后，平均回收率可达97.18%；吸附损失为1.69%；透过损失为1.23%；截留率为98.77%。大幅度提高了白蛋白的产量和质量，每年可节省硫酸铵6.2吨，自来水16000吨。目前国外生产超滤膜和超滤装置最有名的厂家是美国的Milipore公司和德国的Sartorius公司。
随着现代生物技术的发展, 通过基因工程生产蛋白质药物在治疗人类面临的重大疾病如癌症等方面展示出巨大的潜力. 为满足生物技术产品工业化生产的需要, 开发高通量、低成本、高效的分离纯化方法已引起人们的高度关注. 超滤技术由于具有通量高, 操作条件温和, 易于放大等特点, 特别适合生物活性大分子的分离. 在生物技术领域, 超滤技术目前已广泛应用于细胞收集分离、除菌消毒、缓冲液置换、分级( fract ionatio n) 、脱盐及浓缩[ 1] . 近年来越来越多的研究表明, 通过选择适当的膜或膜表面改性,以及对分离过程进行优化, 充分利用和调控膜—蛋白质以及蛋白质—蛋白质之间的静电相互作用, 可以实现分子量相近的两种蛋白质的高选择性超滤分离[2- 7] .

为克服常规蛋白质超滤分离过程优化中存在的实验蛋白质消耗多、工作量大、费时以及费用高等缺点, 我们相继开发了脉冲进样技术( Pulsed sampleinject ion technique ) [8]和参数连续变化超滤技术( Parameter scanning ultraf ilt ration) [9]. 并以此为基础, 结合载体相超滤技术( Carrier phase ult rafil—t rat ion) [10]进一步提出了一种蛋白质超滤分离快速优化新方法[11], 实现了人血浆白蛋白—免疫球蛋白[12]、人源化单克隆抗体( A lemtuzumab) 单体— 二聚体[13]的超滤分离过程快速优化和高选择性分离,并在膜的筛选及其适用性快速评估方面展现出巨大的潜力. 该方法的主要特征是与AKTA Prime 系统联用, 采用脉动进样技术显著减少了蛋白质的用量;而利用双缓冲体系( 类似梯度洗脱) 的参数连续变化超滤技术, 在pH 或离子强度连续变化的情况下考查pH 或离子强度对蛋白质透过率或截留率的影响, 进一步缩短了实验时间, 降低了蛋白质的用量,极大地减少了实验量, 加快了过程优化进程; 另外,载体相超滤技术的应用则可保证超滤分离自始至终在设定的条件下进行, 从而最大限度地保证超滤过程的稳定性.
2012-02-25
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Ⅳ 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办

可能是抄这个蛋白的水溶性较差，也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了，超滤时保持低温，体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高，选择更合适的缓冲液，添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。

Ⅵ 离心超滤管怎么使用需要关注哪些点

离心超滤管的使用方法及注意事项如下：

使用方法：

1. 样品准备：首先，将待超滤的样品（如蛋白质溶液、细胞培养上清等）准备好，并确保其体积不超过离心超滤管的容量限制。

2. 安装超滤膜：将离心超滤管正确安装在离心机的适配器上，确保超滤膜的方向正确，通常超滤膜上会有箭头指示流向。

3. 离心：根据样品的性质和超滤管的规格，选择合适的离心速度和时间进行离心。离心过程中，样品中的小分子物质和溶剂会通过超滤膜被滤出，而大分子物质则被截留在膜上。

4. 收集滤液：离心结束后，小心取出离心超滤管，收集底部的滤液。如果需要进一步浓缩样品，可以重复离心过程。

注意事项：

1. 选择合适的超滤管：根据样品的性质和分子量大小选择合适的超滤管，确保超滤膜的截留分子量与样品中的目标分子相匹配。

2. 避免超速离心：不要超过离心超滤管推荐的最大离心速度，以免损坏超滤膜或造成样品泄漏。

3. 注意样品体积：确保样品体积不超过离心超滤管的容量限制，以避免在离心过程中样品溢出。

4. 防止交叉污染：使用前确保离心超滤管和适配器干净无污染，使用后可进行适当清洗和消毒，以防止交叉污染。

5. 记录实验条件：详细记录离心速度、时间和样品体积等实验条件，以便后续实验的数据分析和比较。