A. 蛋白质、核酸等生物大分子为何能用离子交换色谱分离
因为他们来都带电荷啊,因为源你柱子上有相反的离子啊,他们可以通过离子键相互作用啊!
同时的柱子有孔径啊,可以将小的直接溜走,没有机会结合啊
可以让大的下来的更慢啊!
你满意不!
B. 阴离子交换分离-氨性底液极谱法
方法提要
试样经灼烧、酸溶分解,在2mol/LHCl介质中,锌以配阴离子形式吸附于阴离子交换树脂上,与镍、钴、锰、钒、砷等分离。铅、铁部分被吸附,镉同时被吸附。经1mol/LHCl淋洗交换柱,可分离绝大部分铜、铁,再用热水淋洗交换柱,锌先被淋洗,而镉仍吸附在树脂上而不影响锌的测定。在此条件下,用717型阴离子交换树脂分离富集锌,当溶液中存在100mgCu2+、Fe2+,5mgW6+、Mo6+、Sb5+、Bi3+,10mgSn2+,400μgIn3+,200μgCd2+、Tl3+,50μgSe4+、Au时,均可与锌分离。然后在氢氧化铵-氯化铵-亚硫酸钠底液中,用示波极谱仪导数部分进行锌的测定,峰电位约-1.20V(对银片电极)。如试样中铅量大于10mg,可在溶解试样时,加入2mL(1+1)H2SO4使铅呈硫酸铅沉淀而与锌分离。本法适用于0.001%以上锌的测定。
仪器
示波极谱仪。
银片作参比电极。
试剂
盐酸。
硝酸。
氢氟酸。
高氯酸。
氢氧化铵-氯化铵-亚硫酸钠混合底液称取12.5gNa2SO3和67gNH4Cl,用少量水溶解,加入250mLNH4OH,用水稀释至500mL,混匀。
717型阴离子交换树脂将80~100目717型阴离子交换树脂用20g/LNaOH溶液和(1+9)HNO3浸泡,处理杂质,然后用水洗至中性,按分析步骤装柱,进行空白试验检查后方可使用。
阴离子交换柱将717型阴离子交换树脂装入筒形漏斗,下接Φ8mm×100mm的交换柱,树脂床高约9cm,先用200mL水淋洗交换柱,漏斗上叠放滤纸后,再用2mol/LHCl平衡,备用(控制流速约1.5mL/min)。
锌标准储备溶液ρ(Zn)=1.00mg/mL配制方法见本章42.2.1锌的EDTA容量法测定。
锌标准溶液ρ(Zn)=100.0μg/mL由锌标准储备溶液稀释配制。
锌标准溶液ρ(Zn)=10.0μg/mL由锌标准储备溶液稀释配制。
校准曲线
分取0.00mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL锌标准溶液(100.0μg/mL),或0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL锌标准溶液(10.0μg/mL),分别置于25mL烧杯中,低温蒸至近干。加入5滴(1+1)HCl,盖上表面皿,微热,加入10.0mL氢氧化铵-氯化铵-亚硫酸钠混合底液和15.0mL水,摇匀,放置30min。倾出部分溶液于电解池中,选择适当电流倍率,用示波极谱仪导数部分测定,于起始电位-1.00V处记录峰电流值,绘制校准曲线。
分析步骤
称取0.1~0.5g(精确至0.0001g)试样置于瓷坩埚中,在550℃高温炉中灼烧1h。将试样转入100mL聚四氟乙烯烧杯中,用水润湿,加入10mLHCl,盖上表面皿,置于低温电热板上溶解20min。用少量水洗去表面皿,加入5mLHNO3和3mLHF,再加入1mLHClO4[如试样中铅含量大于10mg,改为加入2mL(1+1)H2SO4,继续加热溶解],加热蒸发至白烟冒尽,取下,冷却。
加入15mL2mol/LHCl,盖上表面皿微热溶解盐类,溶液冷却后倾入交换柱上进行过滤、交换。用1mol/LHCl洗涤烧杯和滤纸至无黄色,弃去滤纸后,继续用1mol/LHCl洗交换柱(洗尽铜、铁等干扰元素,洗液约需30~50mL)。然后用50mL热水淋洗锌(水加热至沸,稍待片刻,分次倒入漏斗),流出液用50mL烧杯承接,溶液在电热板上蒸发至小体积,用水吹洗烧杯壁,继续蒸发至近干。然后按校准曲线分析步骤操作,测得锌量。
锌含量的计算公式同式(42.2),校准曲线上查得锌量(单位为μg),公式中10-3改为10-6。
C. 用于蛋白质提取分离的离子交换剂有哪些特殊的要求,主要有哪几类
离子交换层析根抄据带电强弱分为:强阳离子交换层析、强阴离子交换层析、弱阳离子交换层析、弱阴离子交换层析。填料的孔径也有分别,详细可以咨询各品牌代理商。
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D. 怎样判断蛋白用阴离子柱还是阳离子柱
离子色谱柱由于孔径和填料的关系,不能用来分离蛋白质
您的问题可能在液相色谱论坛中询问更好一点,用的应该是带氨基基团的阴离子交换柱(不是阴离子色谱柱哦)
E. 色谱柱的填料
常见的分配柱填料:碳十八柱 (ODS/C18)、碳八柱(MOS/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、
碳四柱(Butyl/C4)、碳一柱(Methyl/C1)、阴离子交换柱(SAX)、
阳离子交换柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、
氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)
常见的吸附柱填料:硅胶柱
F. 阴离子交换柱用什么冲洗和保养方法
氢氧化钠浸泡,水洗至微碱性,盐酸浸泡,水洗至中性,即可。
G. 设计一个利用阴离子交换柱纯化一个等电点为7.5的蛋白质的实验
既然是抄阴离子交换,就要让目标蛋白带负电,那么缓冲液PH就要大于等电点。缓冲体系的选择也很重要,一般用TRIS-HCl,特别是弱阴离子柱不可选用带负电强的磷酸盐缓冲液,否则上样液中被交换的将是磷酸根而不是目标蛋白。一般用NaCl平衡后上样进行离子交换,然后再用较强的阴离子洗脱。
H. 阴离子交换柱是什么
阴离子交换器 又叫复阴床制,作用是用阴树脂中的氢氧根交换掉水中的其他阴离子。离子交换器分为:钠离子交换器、阴阳床、混合床等种类,。离子交换柱(器)外壳一般采用硬聚氯乙烯(PVC)、硬聚氯乙烯复合玻璃钢(PVC-FRP)、有机玻璃(PMMA)、有机玻璃复合透明玻璃钢(PMMA-FRP)、钢衬胶(JR)、不锈钢衬胶等材质。主要用于锅炉、热电站、化工、轻工、纺织、医药、生物、电子、原子能及纯水处理的前道处理,工业生产所需进行硬水软化、去离子水制备的场合,还可用于食品药物的脱色提纯,贵重金属、化工原料的回收,电镀废水的处理等。
有机玻璃离子交换装置耐腐蚀、无色透明、适用于食品、医药、制糖及电子工业小规模纯水制备。碳钢衬胶离子交换装置具有制水量大、强度高、成本低等特点,适用于大型锅炉软化水及大规模纯水制备。
I. 阴离子交换柱 流动相是酸性还是碱性
理论上说:阳离子交换设备出水开始时呈酸性,阴离子交换设备开始时呈碱性,刚两者组起来接近如中性…。
J. 阴离子交换柱能去除水中的什么
作用是用阴树脂中的氢氧根交换掉水中的其他阴离子。混合物通过阴离子交换柱,阴离子可以被吸附从而与其他物质分开,一般来说,阴离子交换柱的吸附剂应该呈阳性。