葡聚糖凝胶过滤实际应用

㈠ 利用葡聚糖凝胶分离蛋白

一般是磷酸盐，如：K2HPO4-KH2PO4，要注意的有两点：
一是pH值，不要选在等电点；二是盐浓度，不能超过柱子的允许范围（手册上有）。
另外，这种柱子很娇气，也很贵，使用时一定要小心。

㈡ β-葡聚糖的用途

用途：

1、各种食品，如：肉制品、乳制品、饼干、饮料、果汁中原料；

2、保健食品及药品原料，用以增强免疫力、清除毒素、抗辐射、修复细胞、调节血脂；

3、各种化妆品原料，如：洗发水、沐浴露、面膜、护手霜、洗手液、洗面奶等；

4、作为饲料添加剂，能帮助畜牧，反刍，水产，家禽等动物提高免疫力，降低重金属作用。

β-葡聚糖存在于某些微生物在生长过程中分泌的粘液中，现代研究发现，姬松茸中含有的B葡聚多糖最为丰富且具有较高的生物活性。

酵母葡聚糖是存在于酵母细胞壁中的一种具有增强免疫力活性的多糖——β-葡聚糖。β-葡聚糖广泛存在于各种真菌和植物。

(2)葡聚糖凝胶过滤实际应用扩展阅读：

对醋酸、蚁酸以及磷酸是否适合于酸水解法提取酵母葡聚糖进行研究，结果表明酸解后提取酵母葡聚糖的主要结构和支链结构基本上并没有改变。采用醋酸对酿酒酵母中β—葡聚糖进行提取，研究发现酸法提取葡聚糖的最佳工艺条件是：提取剂HAc浓度为6%，提取温度为90℃，提取时间6h ， 固液比为1：6。

在最佳提取工艺下，酵母葡聚糖得率为21.58%，蛋白质含量为7.21%，多糖含量为71.46%，纸层析实验表明，水解产物中同时含有甘露糖和葡萄糖。

将酵母分散到NaOH溶液中搅拌，然后加入水，离心收集沉淀。沉淀再分散到NaOH溶液中，离心收集沉淀。沉淀用水洗3遍，用HCl浸提后，离心收集沉淀，干燥后得到酵母β-(1，3)-D葡聚糖产品。

明酸碱结合法提取的产品纯度较高，蛋白质含量少，收率也较高，但是这种方法过程复杂，操作繁琐，耗时较长，且使用多种有机溶剂进行脱水，废液较多，污染环境。

㈢ 交联葡聚糖凝胶的使用方法

1. 乙醇浸泡：
在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡：
室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；
3. 盐酸浸泡：
在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性；
4. 将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；
5. 上样前平衡层析柱至少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）；
6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1 即可；
7. 洗脱方法：
可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；
8. 在位清洗（CIP）
凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

㈣ 凝胶过滤层析的原理是什么

基本原理：凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖（如葡聚糖或琼脂糖）类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

凝胶层析的特点：

1）凝胶层析操作简便，所需设备简单。有时只要有一根层析柱便可进行工作。分离介质——凝胶完全不需要像离子交换剂那样复杂的再生过程便可重复使用。

2）分离效果较好，重复性高。最突出的是样品回收率高，接近100%。

3）分离条件缓和。凝胶骨架亲水，分离过程又不涉及化学键的变化，所以对分离物的活性没有不良影响。

4）应用广泛。适用于各种生化物质，如肽类、激素、蛋白质、多糖、核酸的分离纯化、脱盐、浓缩以及分析测定等。分离的分子量范围也很宽，如Sephadex G类为102-105 D；Sepharose类为105-108 D。

以上内容参考：网络-凝胶过滤层析

㈤ 如何写关于葡聚糖凝胶层析的分子筛特性的实验报告拜托各位大神

【实验目的】 1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。 2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。 【实验原理】 凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。 葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。可分离的分子量范围从几百到几十万不等。 葡聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。 本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体，来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×106， 而溴酚蓝分子量为670，二者分子量相差较大，前者完全排阻，而后者则可完全进入凝胶颗粒网孔内，二者通过层析柱的时间不同而分开。 【实验材料】 1.实验器材 层析柱(1×20cm)附有一小段乳胶管及螺旋夹；洗脱液瓶(带下口的三角瓶，250m1)；试管及试管架；量筒10m1；721型分光光度计 2.实验试剂 (1) Tris—醋酸缓冲液(pH7.0):取0.0lmol/L Tris溶液(含0.1mol/L KCl)900ml，用浓醋酸调pH至7.0，加蒸馏水至1000m1。 (2) 溴酚蓝溶液：称取溴酚蓝10毫克，溶于5毫升乙醇中，充分搅拌使其溶解，然后逐滴加入Tris—醋酸缓冲液(pH7.0)至溶液呈深蓝色。 (3) 蓝色葡聚糖—2000溶液：称取蓝色葡聚糖—2000 10毫克，溶于2毫升Tris—醋酸缓冲液(pH7.0)中即成。 (4) 样品溶液：取溴酚蓝溶液0.1毫升，蓝色葡聚糖—2000溶液0.5毫升混匀后为上柱样品溶液。 (5)葡聚糖凝胶G-25 (Sephadex-G-25) 【实验操作】 1.实验凝胶的制备：商品凝胶是干燥的颗粒，使用时需经溶胀处理，称取4克葡聚糖凝胶G—25，加50毫升蒸馏水，搅拌均匀，在室温溶胀6小时，或沸水浴溶胀 2小时，一般采用后一种方法。再用倾泻法除去凝胶上层水及细小颗粒，用蒸馏水反复洗涤几次，再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次，使pH和离子强度达到平衡，最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡，凝胶可保存在缓冲液内。 2.装柱：将层析柱洗净，垂直固定在铁支架上，选择有薄膜端作为层析柱下口，将下口接上乳胶管并用螺旋夹夹紧。层析柱中加入洗脱液，打开下口螺旋夹，让溶液流出，排除残留气泡，最后保留约2厘米高度的洗脱液，拧紧螺旋夹。将凝胶轻轻搅动均匀，用玻璃棒沿层析柱内壁缓缓注入柱中，待凝胶沉积到柱床下已超过l厘米时，打开下口螺旋夹，继续装柱至柱床高度达到8厘米,关闭出口。装柱过程中严禁产生气泡，尽可能一次装完，避免出现分层。再用洗脱液平衡l至2个柱床体积，凝胶面上始终保持有一定的洗脱液。平衡后，拧紧下端螺旋夹。

㈥ 甲叉双丙烯酰和葡聚糖凝胶以及丙烯葡聚糖凝胶各有什么作用和用途

甲叉双丙烯酰胺：是一种交联剂，可以将丙烯酰胺单体连接起来，形成聚丙烯酰胺凝胶。聚丙烯酰胺凝胶，主要用于分离蛋白质。
葡聚糖凝胶：用于不同大小蛋白质或多肽的分离。
丙烯葡聚糖凝胶：用于分离球蛋白。

㈦ 怎样用葡聚糖凝胶测定多糖分子量,有原理和过程.

多糖的分子量测定常用的是凝胶滤过法.将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱,用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡,然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱,同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱,分步收集,苯酚-硫酸法监测,分别求得洗脱体积Ve,然后再将兰葡聚糖（MV>200万）上同一条柱,求出柱的空体积Vo,根据Ve/Vo与logM之间存在着线性关系,可绘制标准曲线.最后,将待测样品按上述不变的条件上柱,求得待测多糖的Ve.通过标准曲线上的Ve/Vo,查得待测多糖的分子量对数,便可求出M.
对于黏度大的多糖,可采用黏度法求得.亦有用蒸汽压渗透法（VPO,基本原理是根据理想溶液的拉乌尔定律,参考文献：崔锡红,等.蒸汽压渗透法分析异丁烯的数均分子量.河南化工.2001,1:32.骆传环.蒸气压渗透计测定多糖分子量.现代科学仪器,1994,4:11.）、超速离心法（骆传环,等.香姑多糖的分子量测定.科学技术与工程.2006,6(8):1058~1060）、光散射法（LS,光散射法测定高分子量基于高分子溶液的瑞利散射,垂直偏振光通过溶液产生的不同角度散射光的强度与溶质分子的大小即分子量成正比.参考文献：魏立平,姜雄平.光散射法在医学分子生物学中的应用.国外医学分子生物学分册.2000,22(2):123.）、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）,SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小.当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式：logMW=K-bX,式中：MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量.应用如,将标准相对分子量蛋白质与样品进行SDS-PAGE凝胶电泳,以标准蛋白质的迁移率为纵坐标,lgM为横坐标,绘制相对分子质量曲线.根据样品迁移率得出相对分子质量.）测分子量,黏度法及超滤法估计分子量.利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证,同时也是对多糖纯度的考察.在测定过程中要注意标准品的选择,尽量使用与被测多糖结构相似的标准品,因为不同结构的标准品虽然其绝对分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同.
多糖分子量的测定没有一种绝对的方法,其分子量只代表相似链长的平均配比而不是确切的分子大小.往往用不同的方法会得到不同的分子量.摘自：季宇彬 《中药多糖的化学与药理》人民卫生出版社

㈧ 琼脂糖凝胶和葡聚糖凝胶的用途各是什么，有哪些相同点和不同点，有哪些型号

一般测定多糖分子量是总分子量用葡聚糖凝胶柱层析

琼脂糖凝胶大多用来进行电泳 检测或回收DNA

㈨ 葡聚糖的应用

1､在食品工业中的应用
β- 1，3-葡聚糖具有很高的粘性、持水性、乳化稳定性等性能，在食品工业中常作为增稠剂、持水剂、粘结剂及乳化稳定剂应用于调味料、甜点等食品。由于β-1，3-葡聚糖在人的消化器官中难以被消化，可以作为非卡路里食品添加剂，提供脂肪样口感，研究表明，用β- 1，3-葡聚糖在肉制品中替代脂肪，它既可提供低脂肉制品滑润、丰厚的口感，又能改善低脂肉制品的脆度、硬度、胶粘性、咀嚼性等质构以及总的可接受性；将β- 1，3-葡聚糖作为脂肪取代剂及乳
化稳定剂应用于蛋黄酱中，不但有效地保持蛋黄酱的乳化稳定性，而且还延长产品的贮存期。另外，β- 1，3-葡聚糖是无热能的，且能强化纤维素阻止脂类吸收的效力，促进胆固醇排除，增加肠道蠕动，在食品中既可以作为膳食纤维来发挥作用，又是一种优质保健食品添加剂。
2.在化妆品中的应用
由于β- 1，3-葡聚糖特有的生物学功能和理化特性如抗凝血、抗氧化、促进细胞增生、抑菌和吸水性能，可产生保湿、延缓衰老、促进上皮纤维成细胞增殖和美化肤色等多种功能。研究表明，羧甲基化β- 1，3-葡聚糖可降低皮肤暴露于UVA 区域时对辐射的敏感性，起防止皮脂中角鲨烯氧化的作用，且因其具有成膜性，还可发挥它的第二皮肤作用，有助于提供给皮肤细胞许多生化活性。羧甲基化β- 1，3-葡聚糖能增加皮肤的保湿性并能减弱表面活性剂对皮肤的损伤，并能提高角质层的更新速度和改善皮肤的紧密度。

㈩ 分子筛层析的葡聚糖凝胶的种类与性能

葡聚糖又名右旋糖酐，在它们的长链间以三氯环氧丙烷交联剂交联而成。葡聚糖凝胶具有很强的吸水性，交联度大，吸水性小，相反交联度小，吸水性大。商品名以SephadexG表示，G值越小，交联度越大，吸水性越小，G值越大，交联度越小，吸水性就越大，二者呈反比关系，G值大约为吸水量的10倍。由此可以根据床体积而估算出葡聚糖凝胶干粉的用量。
表1－8 Sephadex1的种类与特性
G25、G50有四种颗粒型号：粗（100µ~300µ）、中（50µ~150µ）、细（20µ~80µ）和超细（10µ~40µ）。G75～G200又有两种颗粒型号：中（40µ～120µ），超细（10µ～40µ）。颗粒越细，流速越慢，分离效果越好。
表1－9 DEAE－纤维素与Sephadex1比较