① 求高手指点,本人现在在做Western-Blot.蛋白质浓度太低了!想浓缩!请问加了SDS的蛋白质怎么浓缩
可以冷冻抽,也可以直接正空抽,也可以直接在吹风台上吹。冷冻抽干后样品还要重新煮一遍。
WB没有条带?
浓缩样品应该效果不会很好吧,应该适当增加一抗浓度,或者延长曝光时间。
提醒下试验最好有正负对照。
② 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办
可能是抄这个蛋白的水溶性较差,也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了,超滤时保持低温,体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高,选择更合适的缓冲液,添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。
③ 做WB蛋白浓度低怎么办
提高SDS-PAGE的上样量
将蛋白样品超滤浓缩几倍提高浓度
WB压片时间稍微延长一点
④ 为什么提取细胞蛋白浓度总是很低
细胞总蛋白提取量少原因很多
比如可能是该细胞状态不好,造成表达量偏低,提取后蛋白总量就会少
蛋白与蛋白间性质差异大,因为所需的细胞提取液不一样,会造成一些蛋白不能溶解于提取液中而和细胞碎片一起沉淀掉
不同的提取方法不一样,可能造成部分蛋白沉淀,影响到提取总量
蛋白质溶液应该是澄清的,可以无色,可以有色,如果溶液不澄清,可能是离心力不够,混入了细胞碎片或者组织碎片。蛋白溶液澄清与否和浓度没有直接联系
⑤ 超滤浓缩蛋白溶液时其浓度该从高到低还是有低到高对超滤膜好呢
从低到高,当然首先3瓶中蛋白分子量应该差不多,否则先超滤小分子的,主要是减少超滤膜的堵塞程度
⑥ 超滤膜分离实验中,什么是浓度极差有什么危害有哪些消除方法
浓差极化,从理论上说,超滤膜是纯物理的过滤方式,它的分离后的效果应该是,版无相变,无权质变
如果浓差极化产生,那么超滤膜的分离效果就会有 质变的可能,其主要危害,就是让超滤膜分离的效果 不稳定了。
消除浓差极化,一般是2步骤,已经出现了。那么就清洗,用化学药剂清洗膜
最主要的是预防,主要是体现在,超滤膜之前工艺上,和超滤系统设计的。
反洗时间,反洗流量,反洗药剂,反洗药剂浓度,加药的时间,这些设计可以影响,超滤膜浓差极化的形成。也许有错字,,不我也不检查了。希望对您有帮助
超滤膜技术 问题,解决者
膜术师
⑦ 24h蛋白浓度低是什么原因
如果这个项目低的话,往往低的不多,否则各个项目间都有联系,不会只有这一个项目超出范围,引起这些原因是正常的,有的是有缺铁,有的缺乏VB12或者叶酸,其他项目正常时,没有必要进一步检查其它。
⑧ 蛋白纯化后浓度太低怎么办
蛋白纯化后浓度太低怎么办
提高SDS-PAGE的上样量 将蛋白样品超滤浓缩几倍提高浓度 WB压片时间稍微延长一点
⑨ 蛋白纯化后浓度多少算正常,怎么定义检测结果浓度偏高或偏低
蛋白纯化后浓度太低怎么办提高SDS-PAGE的上样量 将蛋白样品超滤浓缩几倍提高浓度 WB压片时间稍微延长一点
⑩ 使用分子筛纯化蛋白后发现收率较低,是什么原因
1.蛋白可能被蛋白酶降解。可以在样品和缓冲液中加入蛋白酶抑制剂,阻止蛋白酶降解作用
2.样品制备过程中可能吸附在滤器上,更换吸附性更低的滤器材质
3.样品沉淀,可能由于盐或不合适的缓冲液条件引起
4.疏水蛋白,可以酌情采用去污剂、降低极性的试剂和去污剂
5.非特异性吸附,可以通过降低盐离子浓度最小化疏水相互作用,增加pH,加入适量去污剂或有机溶剂