❶ DEAE纖維素柱子為什麼膠總是不貼壁
DEAE-纖維素 DEAE cellulose
DEAE-纖維素 DEAE cellulose 為二乙氨乙基纖維素。是陰離子交換纖維素之一。
DEAE—纖維素的活化：稱取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸餾水浸泡過夜，觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量，稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜，其間換幾次水，每次除去細小顆粒。抽干，改用0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用無離子水漂洗，使pH至8左右（用pH試紙檢查）。再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，浸泡平衡後使用。
用過的離子交換劑可以反復使用，使其恢復原狀的方法俗稱「再生」。再生並非每次用酸、鹼反復處理，通常只要「轉型」處理即可。所謂轉型就是使交換劑帶上所希望的某種離子，如希望陽離子交換劑帶上NH+4則可用NH4OH浸泡，如希望陰離子交換劑帶上Cl—則用NaCl溶液處理。本實驗中DEAE—纖維素在酸鹼處理後，用0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖溶液浸泡即可轉型，以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由於DEAE—纖維素使用後因帶有大量雜蛋白，所以再生時，先用0.5ml/L NaOH浸洗，用無離子洗至pH8左右，再轉型，即可再使用。
❷ DEAE－32與DEAE－52有何區別
兩者均為弱陰離子交換類型，DE52為預溶漲細顆粒DEAE-纖維素。DE32（乾燥細顆粒DEAE-纖維素）功能如同DE52，但需預處理。
❸ 多糖的純化方法與哪些
多糖純化：
a、分部沉澱法：根據各種多糖在不同濃度的低級醇或丙酮中具有不同溶解度的性質，逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同濃度下析出的沉澱，經反復溶解與沉澱後，直到測得的物理常數恆定（最常用的是比旋光度測定或電泳檢查）。這種方法適合於分離各種溶解度相差較大的多糖。為了多糖的穩定，常在pH7進行，唯酸性多糖在pH7時－COOH是以－COO` 離子形式存在的，需在pH2－4進行分離，為了防止苷鍵水解，操作宜迅速。此外也可將多糖製成各種衍生物如甲醚化物、乙醯化物等，然後將多糖衍生物溶於醇中，最後加入乙醚等極性更小的溶劑進行分級沉澱分離。
b、鹽析法：在天然產物的水提液中，加入無機鹽，使其達到一定濃度或飽和，促使有效成分在水中溶解度降低沉澱析出，與其它水溶性較大的雜質分離。常做鹽析的無機鹽的有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。
c、季銨鹽沉澱法：季銨鹽及其氫氧化物是一類乳化劑，可與酸性糖形成不溶性沉澱，常用於酸性多糖的分離。通常季胺鹽及其氫氧化物並不與中性多糖產生沉澱，但當溶液的PH增高或加入硼砂緩沖液使糖的酸度增高時，也會與中性多糖形成沉澱。常用的季銨鹽有十六烷基三甲胺的溴化物（CTAB）及其氫氧化物（cetyl trimethyl ammonium hydroxide，CTA－OH）和十六烷基吡啶（cetylpyridinm hydroride，CP－OH）。CTAB或CP－OH的濃度一般為1％－10％（W/V）的多糖溶液中，酸性多糖可從中性多糖中沉澱出來，所以控制季銨鹽的濃度也能分離各種不同的酸性多糖。值得注意的是酸性多糖混合物溶液的PH要小於9，而且不能有硼砂存在，否則中性多糖將會被沉澱出來
d、柱層析：
纖維素柱層析：纖維素柱層析對多糖的分離既有吸附色譜的性質，又具有分配色譜的性質，所用的洗脫劑是水和不同濃度乙醇的水溶液，流出柱的先後順序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最後出柱，與分級沉澱法正好相反。
纖維素陰離子交換柱層析：最常見的交換劑為DEAE－纖維素（硼酸型或鹼型），洗脫劑可用不同濃度的鹼溶液、硼砂溶液、鹽溶液等。此方法目前最為常用。它一方面可純化多糖，另一方面還適於分離各種酸性多糖、中性多糖和粘多糖。
凝膠柱層析：凝膠柱層析可將多糖按分子大小和形狀不同分離開來，常用的凝膠有葡聚糖凝膠（sephadex G）、瓊脂糖凝膠（sepharose bio－gel A）、聚丙烯醯胺凝膠（bio－gel P）等，常用的洗脫劑是各種濃度的鹽溶液及緩沖液，但它們的離子強度最好不低於0.02。出柱的順序是大分子的先出柱，小分子的後出柱。由於糖分子與凝膠間的相互作用，洗脫液的體積與蛋白質的分離有很大的差別。在多糖分離時，通常是用孔隙小的凝膠如sephadex G－25、G－50等先脫去多糖中的無機鹽及小分子化合物，然後再用孔隙大的凝膠sephadex G－200等進行分離。凝膠柱層析法不適合於粘多糖的分離。
❹ 離子交換柱層析原理是什麼
離子在離子交換柱上的移動速度受其半徑和電荷的影響，這決定了它們在柱內的行為。具體來說，離子的大小和電荷的強度決定了它們與固定相的結合力和解離速度。較大的離子或電荷較高的離子通常與固定相的結合力更強，移動速度較慢；相反，較小的離子或電荷較低的離子結合力較弱，移動速度較快。
離子交換柱層析利用的是離子間的這種差異，通過特定的固定相和流動相的選擇，可以有效地分離混合物中的不同離子。固定相通常由帶有特定電荷的樹脂或纖維素組成，能夠與流動相中的離子發生可逆性的結合。當混合物通過柱子時，不同離子與固定相的結合力不同，從而導致它們在柱內的移動速度不同。
為了提高分離效果，實驗人員可以調整流動相的pH值或離子強度，以改變離子的電荷狀態，進而影響它們與固定相的結合。此外，還可以通過改變固定相的類型，如使用不同基質或帶有不同電荷的樹脂，來獲得更好的分離效果。
離子交換柱層析廣泛應用於生物化學、葯物學、環境分析等領域。例如，在生物化學中，它可以用於蛋白質和核酸的純化；在葯物學中，它有助於新葯化合物的篩選；在環境分析中，則可用於檢測水和土壤中的重金屬離子。通過精確控制離子交換柱的條件，可以實現對復雜混合物中微量成分的有效分離。
❺ DEAE-纖維素使用方法
DEAE—纖維素的活化過程如下：首先，取適量的IgDEAE32或52，比如1克，放入5毫升的量筒中，加入蒸餾水並浸泡過夜。待DEAE完全溶脹後，觀察其體積。根據需要的層析柱柱床體積，計算所需的DEAE用量，然後同樣用蒸餾水浸泡過夜，期間需更換幾次水，以去除細小顆粒。使用布氏漏斗抽干後，用0.5毫升/升的NaOH溶液浸泡至少1小時，再抽干。接著，用無離子水漂洗，直至pH值達到約8（通過pH試紙檢查）。然後，再用0.5毫升/升的HCl溶液浸泡1小時，去除酸性物質，用無離子水清洗至pH值約為6。在本實驗中，DEAE—纖維素應在使用前用0.0175摩爾/升的pH6.7磷酸鹽緩沖液浸泡，以達到平衡狀態。
DEAE—纖維素的再生是一個循環過程，雖然並非每次都需用酸和鹼進行反復處理。通常，只需進行「轉型」處理即可。比如，如果希望陽離子交換劑帶有NH+4，可以使用NH4OH溶液浸泡；若要陰離子交換劑帶上Cl—，則使用NaCl溶液處理。在本實驗中，DEAE—纖維素在經過酸鹼處理後，只需用0.0175摩爾/升的pH6.7磷酸鹽緩沖液浸泡，以HPO4替換DEAE中的OH—，即可完成轉型。在再生過程中，由於DEAE—纖維素常會吸附大量雜蛋白，因此，再生時應首先用0.5毫升/升的NaOH溶液浸洗，沖洗至pH約8，然後進行轉型，即可再次使用。