離子交換層析的影響

㈠ pH值是如何影響離子交換分離的

離子交換色譜中，PH的影響極大。要知道為何能夠利用pH梯度改善分離選擇性？就得知道其原理：版
離子色譜權是利用相反電荷之間的相互作用來分離的，當檢測物質帶負電荷時，要選擇陰離子色譜柱，陰離子色譜柱帶正電荷的配基，進行陰離子-陽離子交換，結合帶負電荷的分子，經過交換後檢測物質的帶負電荷的分子就會吸附色譜柱上，然後在用高鹽洗脫，洗脫的組分先後進入檢測器，就達到了檢測的目的。
當檢測物質帶正電荷時，道理類似，自己想吧。
pH梯度可以改變檢測物質電荷、偏離等電點的程度，從而影響帶正/負電荷的分子（或離子）與色譜柱的結合能力（可以認為是牢固程度），洗脫時的難易程度就改變，從而改變了分離選擇性。

㈡ 離子交換層析法分離純化蛋白質有哪些局限性

1，離子交換樹脂固定床的床層壓力會隨著分離過程的進程而不斷加大，需要重回新填充答。同時，也造成固定床填充過程操作麻煩，而且密封性要求高。2，蛋白質分離純度問題，如果在出峰之後再行切換接收餾分，而在峰行下降後提前切換，雖可以保證純度，但蛋白分離收率則會下降。3，由於交換層析介質決定，不同蛋白質相互分離效果也不確定，這種分離，也易造成各蛋白峰重疊，造成分離純度下降。4，自動化程度不高。主要也是受固定床以及樹脂交換飽和當量無法保持長期穩定造成的。無法像液相色譜柱那樣，可以在標樣標定後，建立方法，自動分離目標蛋白。5，不過，規模化分離純化蛋白質過程，使用這種層析法，還是具有一定優勢的。
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詳細資料請參考：
離子交換層析: http://proct.bio1000.com/100474/

㈢ 什麼因素可影響離子交換柱層析法分離氨基酸

柱溫；
柱長徑比；
進料量；
進料濃度；
洗脫速度；
洗脫液pH；
交換柱配體的極性強弱；
樹脂交聯度；
樹脂粒徑等因素都會有影響。

㈣ 離子交換色譜中緩沖液濃度的影響

主要體現在以下幾個方面：
1、分離能力：緩沖液濃度的變化會影響離子交換樹脂上的離子交換作用，從而影響不同離子之間的分離效果。通常情況下，隨著緩沖液濃度的增加，同種姿森早離子之間的排斥力會增強，而不同離子之間的吸引力會減弱。
2、保留時間：緩沖液濃度的變化還會影響離子交換的保留時間。一般來說，緩沖液濃度越高，保留時間越長，反之亦然。
3、pH值：緩沖液的濃度和組成也會對溶跡雀液的pH值產生影響，進而影響離子交換的分離效果和保留時間。在離子交換色譜分析中春陵，選擇合適的緩沖液濃度和組成可以通過調節溶液的pH值來優化分離效果。

㈤ 柱層析原理及影響因素

柱層析總的原理，就是讓目標蛋白結合在層析填料（樹脂）上，然後通過特定的緩沖液將其洗脫下來，以達到純化的效果。具體幾種分類稍微歸納了下給你參考
免疫親和層析
原理：親和色譜分離蛋白以一個蛋白與特異性配基配對到色譜基質上，且蛋白質與配基間具有可逆的相互作用作為基礎。目標蛋白與配基之間的生物學相互作用，可以是由於靜電學的相互作用或是分子間疏水的相互作用，也可以是范德華力或氫鍵結合力產生的。
影響因素：主要是親和標簽的完整程度，緩沖液的組分。
離子交換層析
原理：離子交換對分子的分離是基於它們表面凈電荷的差異。以蛋白質為例，它由許多包含弱酸弱鹼集團的不同氨基酸組成。它們表面的凈電荷會隨著周圍環境的pH值改變而改變。對某一特定蛋白質來說，其表面凈電荷與pH之間的相對關系是獨特的，而離子交換層析正是利用了這一特點來完成對不同蛋白質的分離。
影響因素：主要是緩沖液的pH值，鹽濃度。
疏水相互作用層析
原理：疏水層析根據蛋白表面疏水性的不同，利用蛋白質與疏水層析介質疏表面可逆的相互作用來分離蛋白。純水狀態下，任何疏水作用都太弱而不能導致配基與蛋白之間的相互作用。某些鹽卻可以增強疏水相互作用。高濃度的鹽會增強相互作用，而低濃度的鹽會降低相互作用。但是目前尚無被廣泛接受的關於疏水相互作用層析機制的理論。
影響因素：環境溫度，鹽濃度。
凝膠過濾層析
凝膠過濾根據分子通過凝膠填料大小不同對其進行分離。以蛋白質為例，因為分子不與凝膠填料結合，故緩沖液成分不會直接影響解析度。
影響因素：蛋白質分子量。

㈥ 請教離子交換層析與親和層析方面的問題

親和層析是通過層析介質表面鍵合的配基與目標物質特異性吸附，然後非目標物流穿，再改變流動相是目標物質的特異性吸附消失，從而達到純化目的。凝膠層析是通過層析介質孔徑的設定，使分子量大小相差比較大的物質通過的路徑不一樣，從而達到分離效果。離子交換是通過層析介質表面的帶電荷的基團與目標之間產生吸附，通過改變鹽濃度使吸附力的大小改變，從而使不同的物質解吸的速度不一樣，達到分離的效果。離子交換又分陰離子交換和陽離子交換。一般來說以上三種，離子交換應用面最廣，親和特異性最好，體積排阻的話只能對分子量差距很明顯的物質進行分離。

㈦ 交換容量的影響因素

影響交換容量的因素很多，主要可以分為兩個方面，一方面是離子交換劑顆粒大小、顆粒內孔隙大小以及所分離的樣品組分的大小等的影響。這些因素主要影響離子交換劑中能與樣品組分進行作用的有效表面積。樣品組分與離子交換劑作用的表面積越大當然交換容量越高。一般離子交換劑的孔隙應盡量能夠讓樣品組分進入，這樣樣品組分與離子交換劑作用面積大。分離小分子樣品，可以選擇較小孔隙的交換劑，因為小分子可以自由的進入孔隙，而小孔隙離子交換劑的表面積大於大孔隙的離子交換劑。對於較大分子樣品，可以選擇小顆粒交換劑，因為對於很大的分子，一般不能進入孔隙內部，交換只限於顆粒表面，而小顆粒的離子交換劑表面積大。本文來自:博研聯盟論壇
另一些影響因素如實驗中的離子強度、pH值等主要影響樣品中組分和離子交換劑的帶電性質。一般pH對弱酸和弱鹼型離子交換劑影響較大，如對於弱酸型離子交換劑在pH較高時，電荷基團充分解離，交換容量大，而在較低的pH時，電荷基團不易解離，交換容量小。同時pH也影響樣品組分的帶電性。尤其對於蛋白質等兩性物質，在離子交換層析中要選擇合適的pH以使樣品組分能充分的與離子交換劑交換、結合。一般來說，離子強度增大，交換容量下降。實驗中增大離子強度進行洗脫，就是要降低交換容量以將結合在離子交換劑上的樣品組分洗脫下來。本文來自:博研聯盟論壇

㈧ 離子交換層析法分離純化蛋白質有哪些局限性

1. 因為抄離子交換吸附蛋白質並不是特異性吸附，在某些情況下可能難以判斷結合的蛋白質是否為當初設計的目的蛋白。

2. 離子交換吸附依賴於蛋白質表面的靜電荷，如果蛋白質結構比較特殊，可能會有在各種pH都難以結合上離子交換層析的情況。

3. 離子交換層析對於等電點與目標蛋白接近的雜蛋白並沒有很好的分離效果。

㈨ 離子交換層析名詞解釋

解釋：

離子交換層析(ion-exchange chromatography,IEC) 是在生物大分子提純中得到最廣泛應用的方法之一。

離子交換層析分離蛋白質是根據在一定pH 條件下，蛋白質所帶電荷不同而進行的分離方法。常用於蛋白質分離的離子交換劑有弱酸型的羧甲基纖維

離子交換層析分離蛋白質是根據在一定pH 條件下，蛋白質所帶電荷不同而進行的分離方法。常用於蛋白質分離的離子交換劑有弱酸型的羧甲基纖維

離子交換層析分離蛋白質是根據在一定pH 條件下，蛋白質所帶電荷不同而進行的分離方法。常用於蛋白質分離的離子交換劑有弱酸型的羧甲基纖維

㈩ 離子交換層析層析柱上樣體積大會導致什麼

影響解析度。離子交換層析層析柱上樣體積大會受外界影響較大，體積可能隨離子強度和pH變化有較大改變，影響解析度。離子交換層析是一種根據被分離物質的分子表面電荷性質來分離的吸附層析，通過電荷性質分離相反電荷性質之間的作用，蛋白質上的電荷與填料表面的電荷相互作用。