陰離子交換色譜柱改善峰形

1. 什麼情況下需要更換液相色譜柱有什麼現象液相色譜保護柱的使用壽命是多少啊

轉載：《分析測試網路網》
色譜柱預防性保護與柱壽命的延長

通常，一根色譜柱在分析數千個樣品之後性能仍然保持良好，但也有的柱僅分析不多的樣品後幾乎就報廢了。影響柱壽命和其它問題的因素很多，而有些因素是操作者很難控制的，如果被分析的樣品（如分析生物樣品），怎麼凈化樣品也是「臟」的，好於色譜柱的影響是非常大的。然而採取下列措施後，在多數情況下總能夠人為地減少柱上故障，達到延長柱壽命的目的。

1．加流路過濾器和保護柱
流路過濾器緊靠進樣閥後面，位於分析柱前。0.5μm燒結不銹鋼片夾在死體積很小的套子中，擋住來源於樣品和進樣閥墊圈的微粒入柱。因為每個樣品都過濾既費事又帶來誤差，樣品量少過濾更困難，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法。也可以在流路加上保護柱，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器。保護柱的使命是收集阻塞柱進口的來自樣品的化學「垃圾」。這程垃圾最終隱藏低柱效能。保護柱應該是小體積，用分析柱的同種填料填裝。保護柱使用得當，對分離無影響，好像未裝保護柱一樣。有些廠商的商品將保護柱都是用短柱、不超過3cm長，內徑2～3mm，用較大粒度的填粒（15～20μm）干法填裝，會使分析柱的效能有所降低。

2．避免高壓沖擊
一般色譜柱都能經得起高壓，但經不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊，主要是因樣品閥的緩慢轉動、泵起動快，柱切換操作等。等面已討論過，轉動六通進樣閥時從泵到柱的液流會瞬時切斷。在閥的泵側壓力升高，在閥的柱側壓力降低（變化超過20%）。閥轉到底後壓力突然沖擊一下恢復正常，手動進樣閥的變化不大，自動進樣閥比較慢，可能造成壓力沖擊，可用氦氣代替空氣驅動進樣閥。因氨壓縮系數小。另外泵起動不應過快，可分步操作。如用3ml/min流速，先從1mL/min到2mL/min，然後再3ml/min，每個間隔應大於20s。
柱切換技術的應用也很廣泛，切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數字之間變化，會很快使柱報廢。

3．分離條件
多數色譜柱有很寬的試驗條件范圍，但具體應用又受到限制，主要是pH值、柱溫和流動相的選擇。
硅膠為基質的鍵合相要求pH在2.5～7之間，極端pH的流動相能「溶解」硅膠，使鍵合相流失。結果非鹼性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH的流動相，可加預柱（飽和柱）。預柱裝在泵和進樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝，或者用普通硅膠。硅膠飽和了流動相。減少了分析柱填料的損失。預柱不要求柱效高，用價格低的一般硅膠疏鬆地填裝，按期檢查硅膠的溶解情況。用預柱也有不利的影響。即新流動相難以平衡，保留時間不穩定或穩定慢。使用了預柱一定要加流路過濾器，以防止硅膠微粒引起的麻煩。
以硅膠為基質的柱和陰離子交換柱超過60℃後，會增加對流動相中化學物質的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，會使N值降低50%。
有些流動相中的溶劑不能用於某些柱，如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用於非水的排阻色譜。另一方面，有些柱與某些溶劑（如四氫呋喃）一旦達到平衡，不要隨意改用其它溶劑。有關這些特殊填料，可以參見有關資料。
水溶性流動相會引起微生物生長而造成阻塞柱。色譜柱應存放在純有機溶劑或加了50%有機溶劑的水中。凝膠柱可存放在水溶性緩沖液中，同時加0.01%疊氮鈉以防止微生物的生長。

4．凈化樣品
用溶劑溶解的樣品，多數組分在一定的時間內能完全從柱中流出來，不會造成危害。
有些樣品可能含有微粒物質，樣品中的某種組分（如蛋白質）在柱頭上沉積下來，組分在固定相上保留很強，溶劑帶走柱填料，等等，這些都會造成柱效能下降或柱壽命的影響，有必要採取措施防止柱變壞。
如在光線照射下觀察樣品是渾濁的或帶有乳白色，進樣前必須要過濾。雖然流路上裝有過濾器和保護柱，但不能代替樣品的前處理，樣品中過多的微粒會使過濾器和保護柱超載，很快阻塞，或者微粒進入分析柱，所以在進樣前必須過濾樣品。
若懷疑樣品與流動相混合有沉澱而對色譜柱有阻塞，應先試驗一下，看樣品溶液加入流動相中有無變渾或乳白色出現。如果進樣後壓力突然增加而後又慢慢減小，表明樣品中有微粒或發生沉澱。如有沉澱要設法改變分離條件，包括換樣品溶劑和流動相；或處理樣品去掉不溶物質。應盡量用小體積的樣品。
有些樣品能很強地吸附在柱填料上，這樣會降低塔板數，改變樣品的保留時間、峰形，並且使得基線變差。除了用預處理的方法除去強保留物質外，還要加保護柱，定期清洗色譜柱。有時因為疏忽，用對柱有害的溶劑溶解樣品，比如用6mol/L的氫氧化鈉溶解樣品，這樣的樣品只要進50～100μL到硅膠基質柱中，硅膠就很快溶解而使柱報廢。在這種情況下，應立即中和樣品，或除去原溶劑中的有害成分。

5．用強溶劑定期沖洗柱
每次工作結束，用強溶劑沖洗柱是良好的習慣。可用甲醇、乙腈沖反相柱，沖去留在柱上的強吸附組分。用甲醇/水為流動相時也應沖洗。沖洗的程序在以下章節中介紹。
柱頭的燒結不銹鋼濾片，要求平整，死體積小，孔徑適當（2～5μm）。過濾片選擇不好會改變色譜峰形，增加阻力或起不到阻擋污染物的作用（填料很快變色）。

此外，對柱硬體的保養也不可忽視。實際操作中應注意以下幾點：
1、 接頭要配套，用同一廠商的組接件；
2 、接頭之間、柱壓帽螺母與密封卡磁之間無微粒（填料），否則收緊時容易咬死；
3 、密封卡套與柱管一次性卡緊後再也不能松動，所以拆開柱頭再上緊時要小心，不能使卡套移動，原來柱端的不銹鋼濾片和墊片的厚度和強度也不能改變（改變這些附件的性能就促使卡套移動）；
4 、接頭等組接件不要擰得過緊，適當上緊後接上泵試驗，分步擰緊，直到不漏為止。還有非常重要的是柱硬體的損壞往往會造成不可挽回的損失。

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2. 液相的柱壓不穩定，總是上下波動且幅度很大，可以怎麼解決

當液相柱壓不穩定時可以進行以下操作：

1、檢查是否脫氣，壓力不穩定很可能是管路中有氣泡。

2、更換密封墊，泵密封墊損壞，會把空氣帶進泵內。

3、打開泵的排氣閥，按purge健排氣，或者以大流速（2ml/m）排氣，流動相真空脫氣或者超聲脫氣。

4、換下雙泵,沖洗閥的過濾芯，將流動相混合均勻後,超聲20min後,真接單泵分析就可。

5、檢查是否是柱子久用引起的柱壓不穩，用異丙醇：甲醇＝10:90沖，流速要調低。

(2)陰離子交換色譜柱改善峰形擴展閱讀

在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質，他們的類型結構、極性、酸鹼性、分子量大小等等。

1.樣品是極性的且弱酸性的，就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。

2. 如果樣品極性太強，或酸性太強，可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

（缺點是離子對試劑平衡時間長，對流動相pH要求比較精密，否則很難重復實驗，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用於其它實驗）。

3. 若樣品是鹼性的，可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質，且硅膠端基封尾）或一些經過修飾的C18柱（如極性嵌入技術或鹼去活技術等）。

他們都會減少鹼性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏鹼的條件下做，因為這樣可增加鹼性樣品的保留。

4.如果鹼性化合物的極性太強，或鹼性太強，可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測（優點是方法開發簡單，缺點是目前實 現這一技術的色譜柱品牌比較少，價格也高）。

或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經典的檢測鹼性樣品的方法）選擇強離子交換柱也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。

3. 加入戊烷磺酸鈉改善峰形原理

1 加入戊烷磺酸鈉可以改善峰形原理。

2 峰形原理是由於某些化合物在色譜柱中的吸轎純附和解吸過程中導致的，而戊烷磺酸鈉可以作為表面活性劑，減少化合物在柱子表面的吸附，從而改善峰形。

3 此外，加入戊烷磺酸鈉還可以提高某些化合物的溶解度，使得它態喊們更容易被分離和檢測出來，從而進一步改善峰形帆帆野。

4. 離子交換色譜法的原理、裝置及應用是什麼

一、原理：離子抄交換色譜（ion exchange chromatography，IEC）以離子交換樹脂作為固定相，樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時，組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。

二、裝置：

1、分離柱：裝有離子交換樹脂，如陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂或螯合離子交換樹脂。

2、抑制柱和柱後衍生作用：常用的檢測器不僅能檢測樣品離子，而且也對移動相中的離子有響應，所以必須消除移動相離子的干擾。

3、檢測器：分為通用型和專用型。通用型檢測器對存在於檢測池中的所有離子都有響應。離子色譜中最常用的電導檢測器就是通用型的一種。

三、應用：

離子色譜主要用於測定各種離子的含量，特別適於測定水溶液中低濃度的陰離子，例如飲用水水質分析，高純水的離子分析，礦泉水、雨水、各種廢水和電廠水的分析，紙漿和漂白液的分析，食品分析，生物體液(尿和血等)中的離子測定，以及鋼鐵工業、環境保護等方面的應用。

5. 色譜峰分叉是什麼原因

色譜峰分叉，主要是因為
1.有數個色譜峰重疊在一起了，可能是樣品污染或是色譜系統不適用，如流動相、波長、樣品純化程度不夠等方面的原因
2.色譜柱過載了，你可以嘗試著減少進樣量。

以後有什麼色譜方面的問題，可以向我們的團隊——色譜 求助或是交流。團隊宣言：色譜、分析、制備、純化技術交流。

6. 色譜硅膠的孔徑及用途

Kromasil柱

Kromasil是瑞典AKZO NOBEL公司生產的高性能硅膠基質液相色譜柱填料品牌。
Kromasil是一種高純度球形硅膠填料，金屬雜質含量極低，減少了有些金屬螯合物在硅膠基質上的絡合作用。
Kromasil硅膠的表面由獨特的硅羥基基團組成，硅烷的覆蓋率高，在較高的或較低的PH條件下不易水解和分解，可在PH=1.5～9.5條件下穩定使用。
Kromasil 的含碳量高，表面極性小，分離效能高。通常在分析鹼性樣品時，與酸性硅羥基反應會產生不利的拖尾現象，而Kromasil化學純度極高，它的表面由分布獨特、相對中生的硅羥基基團組成，並使不需要的酸性硅羥基基團減少到最低，從而使之具有良好的峰對稱性種較高的柱效。

Hypersil BDS

Hypersil BDS 類色譜填料是極好的反相柱填料，有很好的耐久性及重現性，應用范

圍極其廣泛。Hypersil BDS 硅膠擔體鍵合前經過專門的鹼鈍化處理，將殘余硅羥基降至極

限，這種改善的表面，使得鍵合後的硅膠具有很高的配位度，大大降低了硅羥基與分析物之

間的相互作用，改善了色譜峰形，降低了色譜峰的拖尾程度，提高了峰的對稱性。

Hypersil BDS填料的特徵：

l 對鹼性化合物有更好的峰型。

l 更長的壽命。

l 更好的穩定性。

l 同鹼性化合物一樣，酸性和中性化合物也有非常優異的峰值--真正的通用柱填料。

緊管常規填料色譜柱具有優異的選擇性和較長的色譜柱壽命。且對於簡單的兩元流動相(如

甲醇/水)，當樣品為酸性、中性和弱鹼性化合物時均可獲得較佳的峰不對稱度。但當分析葯

物等樣品中的強極性含氮的化合物時，樣品峰型就極查，拖尾嚴重，並導致定量分析精度下

降，時常會出現一些小峰埋沒於前一拖尾峰的尾巴中，造成該現象的原因是固定相上尚有殘

余的硅羥基。盡管很多廠家對硅膠表面作了第二次反應，即所謂的「封尾」，以減小殘余硅

羥基的作用，但往往都不能完全消除殘余的硅羥基的影響。Hypersil公司開發的將殘余的硅

羥基降至極限的Hypersil BDS(Base Deactived Silica,鹼純化硅膠)系列產品，並用現代衍生反應技術生產出特別適用於鹼性化合物的真正均一反相填料。

Hypersil 300A 填料是基於5um和10um,
孔徑為300A 的硅膠為基質的HPLC填料適合越來越多的生物大分子分離與分析的需要,現可提供C18 C8 C4 的填料

*Hypersil 300A C18 適合親水性強的分子量大於5000的小肽酶的水解片斷及各種天然和合成小肽的分析
*Hypersil 300A C4 適合疏水性的小肽及大分子的多肽分析
*Hypersil 300A C8 選擇性介於C18和C4之間適用於親水性及弱疏水性的小肽和蛋白質酶的水解片斷及各種天然和合成小肽的分析。

Hypersil ODS填料

Hypersil 填料是基於粒度為3um 、5um和10um, 孔徑為120A的硅膠為基質的HPLC填料其生產過程的質量控制標准非常嚴格全世界數千個實驗室使用Hypersil色譜柱已長達20多年很多應用實例可以從多種文獻及著名雜志上查到。大量的試驗測試已經證實Hypersil ODS2填料是替代Waters Spherisorb ODS2的最佳填料無論是在酸性還是鹼性樣品的分析上選擇性與峰型幾乎與其保持一致。

LiChrosorb填料常規色譜分析柱

產品介紹： LiChrosorb是德國MERCH公司出品的一種多孔無定型硅膠基質填料品牌，在過去的25年中非常成功地應用於液相色譜分離。
產品特點：LiChrosorb RP-8和RP-18適合於鹼性樣品的色譜分析。

技術參數：

LiChrosorb填料參數

Spherisorb 填料
Waters公司出品的Spherisorb填料有3um、5um和10um, 孔徑為80A 硅膠為基質的HPLC填料其高的分離性能已得到廣大色譜用戶的認可

Spherisorb填料有C18 C8 CN C6H5和NH2等固定相C18有經封尾處理的ODS-2和未經封尾處理的ODS-1 兩種ODS-2 的碳含量為11.5%ODS-1的碳含量為5.75%

Spherisorb SAX強陰離子交換柱和SpherisorbSCX強陽離子交換柱分別適合於對小分子的酸性和鹼性化合物的分析比
通常的正相和反相色譜柱有更佳的分離性能

BETASIL 填料
ThermoHypersil-Keystone公司非常有特點的新型通用填料裝填的色譜柱-BETASIL 為了達到原裝柱的水平公司採用全新結構柱管裝填以滿足您更高分析要求的需要

*高純硅膠徹底減去活處理提供完美的峰型
*高比表面積高覆蓋鍵合相
*真正的高效柱理論塔板數較高
*較強的保留,反相色譜應用中適宜強極性化合物的分離

7. 如何修復色譜柱

當色譜柱柱壓太高或旦型峰形嚴重變差無法繼續正常使用時，通常認為色納遲態譜柱的使用壽命已經結束，但其實有時候有些是可以修復的，而有些則確確實實是無法修復。如果僅僅是由於固體顆粒物質堵塞篩板引起柱壓升高和峰形變差，抑或僅是柱頭一點填料收到污染引起的峰形變差、洞源柱效下降，這兩種情況是可以修復的；如果是因流動相pH超標或其它原因造成柱床整體性損壞的，則無法修復。1. 先將柱子用甲醇：水＝75：25潤濕柱床（潤濕的時候，如果柱壓太高，則降低流速），這樣做的目的是避免使放置時間過長而引起填料的變得乾燥，如果填料是乾燥的，打開柱頭後呈粉末狀的填料是不好處理的，容易引起柱床松動。2. 打開柱頭，取下舊篩板超聲清洗或換上新篩板，目前市面上主要以下有兩種類型的篩板： 後面的主要，前面的就是讓你看下

8. 為提高離子色譜分離效果可改變的色譜條件有什麼

1、稀釋樣品
對組成復雜的樣品，若待測李空離子對樹脂親合力相差頗大，就要作幾次進樣，並用不同濃度或強度的淋洗液或梯度淋洗。對固定相親合力差異較大的離子，增加分離度的最簡單方法是稀釋樣品或作樣品前處理。例如鹽水中SO2-4和Cl-的分離。若直接進樣，其色譜峰很寬而且拖尾，表明進樣量已超過分離柱容量，在常用的分析陰離子的色譜條件下，30min之後Cl-的洗脫仍在繼續。在這種情況下，在未恢復穩定基線之前不能再進樣。若將樣品稀釋10倍之後再進樣就可得到Cl-與痕量SO2-4之間的較好分離。對陰離子分析推薦的最大進樣量，一般為柱容量的30%，超過這個范圍就會出現大的平頭峰或肩峰
2、改變分離和檢測方式
若待測離子對固定相親合力相近或相同，樣品稀釋的效果常不令人滿意。對這種情況，除了選擇適當的流動相之外，還應考慮選擇適當的分離方式和檢測方式。例如，NO-3和ClO-3，由於它們的電荷數和離子半徑相似，在陰離子交換分離柱上共淋洗。但ClO-3的疏水性大於NO-3，在離子對色譜柱上就很容易分開。又如NO-2與Cl-在陰離子交換分離柱上的保留時間相近，常見樣品中Cl-的濃度又遠大於NO-2，使分離更加困難，但NO-2有強的UV吸收，而Cl-則很弱，因此，應改用紫外作檢測器測定NO-2，用電導檢測Cl-，或將兩種檢測器串聯，於一次進樣同時檢測Cl-與NO-2。對高濃度強酸中有機酸的分析，若採用離子排斥，由於強酸不被保留，在死體積排除，將不幹擾有機酸的分離。
3、樣品前處理
對高濃度基體中痕量離子的測定，例如海水中陰離子的測定，最好的方法是對樣品作適當的前處理。除去過量Cl-的前處理方法有：使樣品通過Ag+型前處理柱除去Cl-，或進樣前加AgNO3到樣品中沉澱Cl-；也可用閥切換技術，其方法是使樣品中弱保留的組分和90%以上的Cl-進入廢液，只讓10%左右的Cl-和保留時間大於Cl-的組分進入分離柱進行分離。對含有大的有機分子的樣品，應於進樣前除去有機物，較簡單的方法是用Dionex的前處理柱OnGuard的RP或P柱或在線閥切換除去有機基體。
4、選擇適當的淋洗液
離子色譜分離是基於淋洗離子和樣品離子之間對樹脂有效交換容量的競爭，為了得到有效的競爭，樣品離子和淋洗離子應有相近的親合力。下面舉例說明選擇淋洗液的一般原則。用CO2-32HCO-作淋洗液時，在Cl-之前洗脫的離子是弱保留離子，包括一價無機陰離子、短碳鏈一元羧酸和一些弱離解的組哪磨瞎分，如F-，甲酸，AsO-2，CN-和S2-等。對乙酸，甲酸與F-、Cl-等的分離應選用較弱的淋洗離子，常用的弱淋洗離子有HCO-3，OH-和B4O2-7。由於HCO-3和OH-易吸收空氣中CO2，CO2在鹼性溶液中會轉變成CO2-3，CO2-3之淋洗強度較HCO-3和OH-大，因而不利於上述弱保留離子的分離。B4O2-7亦為弱淋洗離子，但溶液穩定，是分離弱保留離子的推薦淋洗液。中等強度的碳酸鹽淋洗液對高親和力組分游碧的洗脫效率低。

9. 色譜柱的注意事項

色譜柱 的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
②應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。
③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠「飽和」，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
⑤避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
⑥經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規分析需要50~75ml。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然後再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，那麼可以省略最後用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質，在甲醇（乙腈）沖洗時重復注射100~200μl四氫呋喃數次有助於除去強疏水性雜質。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞碸數次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀鹼緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然後用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。
⑦保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發乾燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
⑧色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。
在後兩種情況發生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內填料整平。然後用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理後柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護、延長柱壽命的作用。採用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料，只能在pH2~9范圍內使用。柱子使用一段時間後，可能有一些吸附作用強的物質保留於柱頂，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。新的色譜柱在使用一段時間後柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復。
每次工作完後，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當採用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完後應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用，應每隔4~5天開機沖洗15分鍾。

10. 安捷倫1260，新色譜柱老化後使用，進標准品，峰形就拖尾，什麼原因

有一種可旅慶能是樣品溶解的溶劑不合適若是反相體糸可適當增加水的比例，還有進樣量過大禪祥樣品也可能過載不同長度的柱子有相應最大進樣量。peak 頭與管路的連接死體積過大也會有拖尾。如果液相條賀鎮搏件可自由更改加少量三氟乙酸也會改善峰形。（質譜比例低於萬分之五，紫外可加加百分之一）。