① 用強酸性陽離子交換樹脂分離氨基酸混合物時，為什麼要逐步提高洗脫液的pH和離子強度
用強酸性陽離子交換樹脂分離氨基酸混合物時，氨基酸都是以陽離子的形式版，被吸附到樹脂權的離子交換位上。
由於氨基酸是兩性化合物，既有酸性，也有鹼性，因此氨基酸都有等電點，pH低於等電點時，呈陽離子狀態，pH高於等電點時，呈陰離子狀態。氨基酸被強酸性離子交換樹脂吸附後，都是以陽離子形式存在的，轉變為陰離子就會被洗脫。通過逐漸提高洗脫液的pH，利用氨基酸不同的等電點，使不同的氨基酸逐漸從陽離子改變為陰離子，而被洗脫出來，從而達到分離效果。
② 如何從植物中提取氨基酸
先用蛋白酶和肽酶處理得到氨基酸，然後用有機溶劑萃取，再進行分餾。
一，植物中游離氨基酸的提取；
1，烘乾材料中游離氨基酸的提取:
從植物的葉片、葉脈及種子中提取游離氨基酸一般先需要乾燥處理,葉片、葉脈要在105~110攝氏度殺青,然後60~80攝氏度烘乾、粉碎,過40目篩。一些研究者用75%或80%的酒精作溶劑從粉碎原料中提取氨基酸,也有用蒸餾水作萃取溶劑提取,提取的方法是常溫或加熱到一定溫度(小於100攝氏度)用一定體積分數的萃取溶劑浸泡2~6h,或加熱迴流20~30min,為了使原料中的游離氨基酸盡可能得以溶解,提取過程需重復2~3次,然後合並提取液、過濾,蒸發掉乙醇,既得到了氨基酸粗提液。也有人採用蒸餾水作溶劑超聲波提取提取的方法,或在室溫下樣品用50%乙醇浸泡微波萃取,然後離心過濾,若用氨基酸自動分析儀測定氨基酸的含量,常用2%~5%的磺基水楊酸水溶液浸提。
2，鮮葉片或鮮果肉中游離氨基酸的提取：
鮮葉片或鮮果肉中游離氨基酸的提取鮮葉片或鮮果肉一般用10%CH3COOH研磨或勻漿來進行提取,但由於鮮葉片或鮮果肉中的蛋白酶能水解蛋白質,造成游離氨基酸含量升高,故研磨要在冰浴中進行,新鮮材料中的脂、蛋白質、糖等易被提出,需加入一定的試劑除去。通常用10%三氯乙酸、一定濃度的醋酸鉛、磺基水楊酸或95%乙醇加入過夜沉澱,然後離心或過濾的方法除去蛋白質,用乙酸乙酯或乙醚萃取以除去脂類等。
二，游離氨基酸的純化；
從植物中提取的氨基酸粗提液中含有較多的色素、可溶性糖、有機酸及其他雜質,有必要對氨基酸粗提液進一步進行純化,以便下一步進行氨基酸含量的測定。
最常用的純化方法是用732陽離子交換樹脂進行純化。
732陽離子交換樹脂在使用前要進行預處理,用一定濃度的鹽酸浸泡樹脂24h以上,然後用蒸餾水漂洗至中性,為的是除去樹脂中的雜質,並使其完全轉化成氫型陽離子交換樹脂,濕法裝柱,注意樹脂間不能存有氣泡,把氨基酸粗提液經適當濃縮到小體積後,倒入樹脂柱中,讓其緩慢流入樹脂層,當氨基酸植物中游離氨基酸的提取、純化及分析方法粗提液全部進入樹脂後,停留10min,以便使氨基酸充分結合到樹脂上,接著用一定量的蒸餾水沖洗樹脂,以吸取色素、水溶性糖等雜質,當流出液變清後,用0.5~4mol/L的氨水進行洗脫,收集洗脫液至用茚三酮檢測無色為止。把洗脫液用旋轉蒸發儀減壓濃縮至干。用0.1mol/L鹽酸溶解並定容之一定體積即可。該方法氨基酸損失,純化效果好,故最常用於植物中提取的游離氨基酸的純化。
也有研究者用活性炭進行純化,把具有較強吸附能力的活性炭直接加入到氨基酸粗提液中,加熱一段時間,然後過濾,以除去色素等,但活性炭對部分氨基酸也能吸附,造成氨基酸的損失
③ 離子交換樹脂的選擇原則是什麼
離子交換樹脂的吸附交換原理：
離子交換樹脂本身的離子一般是低價離子，所以離子交換樹脂在與水接觸時，根據樹脂的吸附選擇性，會將水中的高價離子吸附，將低價離子釋放，而這些被釋放的低價離子會與水中的其他離子結合，成為無害的物質，而在實際使用的過程中，經常都是將樹脂轉化為其他的離子形式進行使用，比如一般陽離子交換樹脂會轉化為鈉型樹脂再進行使用，從而達到軟化水的目的。
離子交換樹脂的吸附順序：
1.離子交換樹脂對陽離子的吸附順序：
Fe3+ > Al3+ > Pb2+ > Ca2+ > Mg2+ > K+ > Na+ > H+
2.強鹼性陰離子交換樹脂對陰離子的吸附順序：
SO42－ > NO3－ > Cl－ > HCO3－ > OH－
3.弱鹼性陰離子交換樹脂對陰離子的吸附順序：
OH－ > 檸檬酸根3－ > SO42－ > 酒石酸根2－ >草酸根2－ > PO43－ >NO2－ > Cl－ >醋酸根－ > HCO3－
詳情點擊：離子交換樹脂的選擇性
④ 什麼是氨基酸的離子交換
離子交換層析 (ion exchange chromatography，簡稱ICE)是分析和制備樣品混合物的液-固相層析方法，是基於待測物質的陽離子或陰離子和相對應的離子交換劑間的靜電結合，即根據物質的酸鹼性、極性等差異，通過離子間的吸附和脫吸附原理將電解質溶液各組分分開。它是從復雜混合物體系中分離性質極為相似的生物分子的有效手段之一。由於帶電荷不同的各種物質對離子交換劑有不同親和力，通過改變洗脫液的離子強度和pH值，控制這種親和力，即可使這些物質依據親和力大小順序依次從層析柱中洗脫下來。
氨基酸是兩性電解質，分子 上的凈電荷取決於氨基酸的等電點和溶液的pH值，各種氨基酸分子結構不同，在同一pH值時所帶電荷的性質(正、負)和多少不同，與離子交換樹脂的親和力有差異，因此可根據親和力從小到大的順序被洗脫液分別洗脫下來，達到分離的效果。
三、儀器與試劑
(一)實驗器材
(1)玻璃層析柱
(2)試管
(3)移液管
(4)恆壓洗脫瓶
(5)部分收集器
(6)水浴鍋
(7)分光光度計
(8)電爐
(二)材料與試劑
(1)苯乙烯磺酸鈉型樹脂(100~200目)
(2)2mol/L鹽酸溶液
(3)2mol/L氫氧化鈉溶液
(4)標准氨基酸溶液：將天門冬氨酸和賴氨酸分別配成2mg/mL的0.1mol/L鹽酸溶液。
(5)混合氨基酸溶液：將上述天門冬氨酸和賴氨酸溶液按1：4比例混合。
(6)檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸溶液(pH5.8，鈉離子濃度0.45mol/L)：取檸檬酸14.25克、氫氧化鈉9.30克分別溶於水後混合，加入濃鹽酸5.25毫升，定容至500毫升;4℃冰箱保存。
(7)顯色劑：2克水合茚三酮溶於95%乙醇中，加水至100毫升。
⑤ 一般，用於分離蛋白質的離子交換層析，應該用陰離子交換樹脂，還是陽離子交換樹脂
氨基酸一般用強酸性陽離子交換樹脂，蛋白質用陰離子交換樹脂
⑥ 如何用陰離子交換樹脂層析分離混合氨基酸
離子交換樹脂是一種合成的高聚物,不溶於水,能吸水膨脹.高聚物分子由能電離的回極性答基團及非極性的樹脂組成.極性基團上的離子能與溶液中的離子起交換作用,而非極性的樹脂本身物性不變.通常離子交換樹脂按所帶的基團分為強酸(＝R＝S03H)、弱(＝COOH)、強鹼 (＝N+＝R：)和弱鹼(＝NH2＝NHR＝NR2).
離子交換樹脂分離小分子物質如氨基酸、腺苷、腺苷酸等是比較理想的.但對生物大於物質如蛋白質是不適當的,因為它們不能擴散到樹脂的鏈狀結構中.故如分離生物大子、可選用以多糖聚合物如纖維素、葡聚糖為載體的離子交換劑.
本實驗用磺酸陽離子交換樹脂分離酸性氨基酸(天冬氨酸)、中性氨基酸(丙氨酸)鹼性氨基酸(賴氨酸)的混合液.在特定的pH條件下,它們解離程度不同,通過改變脫液的pH或離子強度可分別洗脫分離.
⑦ 求問怎麼用離子交換樹脂層析分離混合氨基酸
【原理】離子交換樹脂是一種合成的高聚物，不溶於水，能吸水膨脹。高聚物分子由能電離的極性基團及非極性的樹脂組成。極性基團上的離子能與溶液中的離子起交換作用，而非極性的樹脂本身物性不變。通常離子交換樹脂按所帶的基團分為強酸(＝R＝S03H)、弱(＝COOH)、強鹼 (＝N+＝R：)和弱鹼(＝NH2＝NHR＝NR2)。
離子交換樹脂分離小分子物質如氨基酸、腺苷、腺苷酸等是比較理想的。但對生物大於物質如蛋白質是不適當的，因為它們不能擴散到樹脂的鏈狀結構中。故如分離生物大子、可選用以多糖聚合物如纖維素、葡聚糖為載體的離子交換劑。
本實驗用磺酸陽離子交換樹脂分離酸性氨基酸(天冬氨酸)、中性氨基酸(丙氨酸)鹼性氨基酸(賴氨酸)的混合液。在特定的pH條件下，它們解離程度不同，通過改變脫液的pH或離子強度可分別洗脫分離。
【材料】1．實驗器材層析柱（1.6X20cm）；恆流泵；梯度混合器；試管及試管架；紫外分光光度計、磺酸陽離子交換樹脂(Dowex 50)
2．實驗試劑
(1)2mol／L HCl
(2)2mol／L NaOH
(3)0.1mOl／L HCl
(4) 0.1mol／L NaOH
(5)pH4.2的檸檬酸緩沖液：0.lmol／L檸檬酸54m1加0.1mol／L檸檬酸鈉46ml
(6)pH5的醋酸緩沖液：0.2mol／L NaAc 70ml加 0.2mol／L HAc 30ml
(7)0.2％中性茚三酮溶液：0.2g茚三酮加100ml丙酮
(8)氨基酸混合液：丙氨酸、天冬氨酸、賴氨酸各10m1加0.1mol／L HCl 3m【方法】
1. 樹脂的處理
100ml燒杯中置約10g樹脂，加25ml 12mo1／L HCl攪拌2h，傾棄酸液，用蒸餾水充洗滌樹脂至中性。加25ml 12mol／L NaOH至上述樹脂中攪拌2h，傾棄鹼液，用蒸餾水洗滌至中性。將樹脂懸浮於50ml pH4.2檸檬酸緩沖液中備用。
2. 裝柱取直徑0.8cm～1.2cm、長度 10cm～12cm的層析柱，底部墊玻璃棉或海綿圓墊，自頂部注入經處理的上述樹脂懸浮液，關閉層柱出口，待樹脂沉降後，放出過量的溶液，在加入一些樹脂，至樹脂沉積至8cm～10cm高度即可。於柱子頂部繼續加入pH4.2檸檬酸緩沖液洗滌，使流出液pH為4.2為止，關閉柱子出口，保持液面高出樹脂表面1cm左右。
3. 加樣、洗脫及洗脫液收集
打開山口使緩沖液流出，待液面幾乎平齊樹脂表面時關閉出口(不可使樹脂表面乾燥)。用長滴管將15滴氨基酸混合液仔細直接加到樹脂頂部，打開出口使其緩慢流入柱內。當液面剛平樹脂表面時，加入0.1mol／L HCl 3ml，以10滴／min～12滴／min的流速洗脫，收集洗脫液，每管20滴，逐管收存。當HCl液面剛平樹脂表面時，用1m1 pH4.2檸檬酸緩沖液沖洗柱壁一次，接著用2ml pH4.2檸檬酸緩沖液洗脫，保持流速10滴／min～12滴／min並注意勿使樹脂表面乾燥。
在收集洗脫液的過程中，逐管用茚三酮檢驗氨基酸的洗脫情況，方法是：於各管洗脫液中加10滴pH5醋酸緩沖液和10滴中性茚三酮溶液，沸水浴中煮10min，如溶液呈紫藍色，表示已有氨基酸洗脫下來。顯色的深度可代表洗脫的氨基酸濃度，可比色測。
在用pH4.2檸檬酸緩沖液把第二個氨基酸洗脫出來之後，再收集兩管茚三酮反應陰性部分，關閉層析柱出口，將樹脂頂部剩餘的pH4.2檸檬酸緩沖液移去。
於樹脂頂部加入2ml 0.1mo1／L NaOH，打開出口使其緩慢流入柱內，按上面I續用0.1mo1／L NaOH洗脫並逐管收集 (注意仍然保持流速10滴／min～12滴／min)，每管20滴。做洗脫液中氨基酸檢驗，在第三個氨基酸用0.1mo1／L NaOH洗脫下來以後，再繼續收集兩管茚三酮反應陰性部分。
最後以洗脫液管號為橫坐標，洗脫液各管光密度（以水作空白，在570nm波長讀取吸光度）或顏色深淺（以 -，±，+，++．．．表示）為縱坐標作圖，即可畫出一條洗脫曲線。
【注意事項】
1. 一直保持流速10滴/min～12滴／min，並注意勿使樹脂表面乾燥。
2. 在裝柱時必須防止氣泡、分層及柱子液面在樹脂表面以下等現象發生。
⑧ 離子交換層析分離混合氨基酸實驗能否用陰離子交換樹脂
離子交換層析分離混合氨基酸實驗也能用陰離子交換樹脂,但是一般都是用強陽性離子交換樹脂在pH2-3之間進行分離.
因為大部分氨基酸等電點都偏酸,如果用強陰離子交換樹脂的話,洗脫鹽濃度較大,而且分離效果不如陽離子交換的好.
網路教育團隊【海納百川團】為您解答.
⑨ 在PH3左右，氨基酸混合液（酸性，鹼性，中性三類），經陽離子交換樹脂被洗脫分離，這三類氨基酸的洗脫順序
原因：氨基酸與陽離子交換樹脂的靜電引力大小依次是 鹼性氨基酸＞中性氨回基酸＞酸性氨基酸，所以答洗脫的順序就
先是酸性氨基酸（負電荷最多），然後是中性氨基酸，最後是鹼性氨基酸（帶正電荷最多）。
詳見《生物化學》王鏡岩 第三版 上冊 153頁
⑩ 不適宜用離子交換樹脂法分離的成分為
答案（E）
生物鹼、生物鹼鹽：（強酸性）陽離子交換樹脂；
有機酸：（強鹼性）陰離子交換樹脂；
氨基酸：鹼性氨基酸，選用弱酸性陽離子交換樹脂；酸性氨基酸，選用弱鹼性陰離子交換樹脂。