1. 用強酸性型陽離子樹脂分離谷氨酸與賴氨酸誰先流出
谷氨酸先流出,根據離子交換層析的原理,強酸性的陽離子樹脂有大量的強酸性基團,如磺酸基-SO3H,容易在溶液中離解出H+,故呈強酸性。樹脂離解後,本體所含的負電基團,如SO3-,能吸附結合溶液中的其他陽離子。賴氨酸帶正電,被其吸附,谷氨酸帶負電,相互排斥,則隨洗脫液先流出。
2. 求問怎麼用離子交換樹脂層析分離混合氨基酸
離子交換樹脂作為一種合成高聚物,不溶於水,能吸水膨脹。高聚物分子由能電離的極性基團及非極性的樹脂組成。極性基團上的離子能與溶液中的離子起交換作用,而非極性的樹脂本身物性不變。通常離子交換樹脂根據所帶基團可分為強酸(=R=SO3H)、弱(=COOH)、強鹼(=N+=R:)和弱鹼(=NH2=NHR=NR2)。離子交換樹脂適用於分離小分子物質,如氨基酸、腺苷、腺苷酸等。然而,對於生物大分子如蛋白質,則不太適宜,因為它們不能擴散到樹脂的鏈狀結構中。因此,如果需要分離生物大分子,可以選擇多糖聚合物如纖維素、葡聚糖為載體的離子交換劑。
本次實驗利用磺酸陽離子交換樹脂(Dowex 50)分離混合氨基酸,包括酸性氨基酸(天冬氨酸)、中性氨基酸(丙氨酸)和鹼性氨基酸(賴氨酸)。在特定的pH條件下,這些氨基酸解離程度不同,通過調整脫液pH或離子強度可以實現分離。實驗中所用到的材料包括層析柱、恆流泵、梯度混合器、試管及試管架、紫外分光光度計、2mol/L HCl、2mol/L NaOH、0.1mol/L HCl、0.1mol/L NaOH、pH4.2的檸檬酸緩沖液、pH5的醋酸緩沖液、0.2%中性茚三酮溶液以及氨基酸混合液。
樹脂處理步驟為:首先將樹脂置於100ml燒杯中,加入25ml 12mol/L HCl攪拌2小時,傾棄酸液後用蒸餾水洗滌至中性。隨後,再加入25ml 12mol/L NaOH攪拌2小時,傾棄鹼液後用蒸餾水洗滌至中性。最後,將樹脂懸浮於50ml pH4.2檸檬酸緩沖液中備用。
裝柱步驟包括:取直徑0.8cm~1.2cm、長度10cm~12cm的層析柱,底部墊玻璃棉或海綿圓墊,自頂部注入經處理的樹脂懸浮液。關閉層柱出口,待樹脂沉降後,放出過量溶液,再加入一些樹脂,使樹脂沉積至8cm~10cm高度即可。於柱子頂部繼續加入pH4.2檸檬酸緩沖液洗滌,確保流出液pH為4.2,關閉柱子出口,保持液面高出樹脂表面1cm左右。
加樣、洗脫及洗脫液收集步驟為:打開山口使緩沖液流出,待液面幾乎平齊樹脂表面時關閉出口。用長滴管將15滴氨基酸混合液直接加到樹脂頂部,打開出口使其緩慢流入柱內。當液面剛平樹脂表面時,加入0.1mol/L HCl 3ml,以10滴/分鍾~12滴/分鍾的流速洗脫,收集洗脫液,每管20滴,逐管收存。當HCl液面剛平樹脂表面時,用1ml pH4.2檸檬酸緩沖液沖洗柱壁一次,接著用2ml pH4.2檸檬酸緩沖液洗脫,保持流速10滴/分鍾~12滴/分鍾並注意勿使樹脂表面乾燥。
在收集洗脫液的過程中,逐管用茚三酮檢驗氨基酸的洗脫情況,方法是:於各管洗脫液中加10滴pH5醋酸緩沖液和10滴中性茚三酮溶液,沸水浴中煮10分鍾,如溶液呈紫藍色,表示已有氨基酸洗脫下來。顯色的深度可代表洗脫的氨基酸濃度,可比色測。在用pH4.2檸檬酸緩沖液把第二個氨基酸洗脫出來之後,再收集兩管茚三酮反應陰性部分,關閉層析柱出口,將樹脂頂部剩餘的pH4.2檸檬酸緩沖液移去。於樹脂頂部加入2ml 0.1mol/L NaOH,打開出口使其緩慢流入柱內,按上面步驟續用0.1mol/L NaOH洗脫並逐管收集,注意保持流速10滴/分鍾~12滴/分鍾,每管20滴。做洗脫液中氨基酸檢驗,在第三個氨基酸用0.1mol/L NaOH洗脫下來以後,再繼續收集兩管茚三酮反應陰性部分。
最後,以洗脫液管號為橫坐標,洗脫液各管光密度(以水作空白,在570nm波長讀取吸光度)或顏色深淺(以-,±,+,++...表示)為縱坐標作圖,即可畫出一條洗脫曲線。
實驗注意事項包括:保持流速10滴/分鍾~12滴/分鍾,並注意勿使樹脂表面乾燥。在裝柱時必須防止氣泡、分層及柱子液面在樹脂表面以下等現象發生。
3. 何謂氨基酸的離子交換本實驗採用的離子交換劑屬於哪一種
1、離子交換:是分析和制備樣品混合物的液-固相層析方法,是基於待測物質的陽離子或陰離子和相對應的離子交換劑間的靜電結合,即根據物質的酸鹼性、極性等差異,通過離子間的吸附和脫吸附原理將電解質溶液各組分分開。
2、離子交換劑:本實驗採用磺酸型陽離子交換樹脂(732型)分離酸性氨基酸(天冬氨酸AsppI=2.97)和礆性氨基酸(賴氨酸LyspI=9.74)的混合液。
4. 離子交換層析分離氨基酸時,(苯乙烯磺酸鈉)為什麼組氨酸後洗脫出來而賴氨酸先洗脫出來
你們是不是這樣分析的:組氨酸的PI是7.59,賴氨酸是9.74,這證明賴氨酸鹼性更強,酸性更弱,而用H+洗脫時,先洗脫是應該是酸性弱的物質所以賴氨酸應該先洗脫下來?
或許可以這樣解釋:鹼性氨基酸和陽離子交換樹脂的結合是以氫離子為媒介,藉助氫鍵的極性連接起來的。如果我沒記錯的話,伯氨基形成的氫鍵要比仲氨基形成的氫鍵強一些。
不管用是鈉型的還是氫型的陽離子交換樹脂,組氨酸和賴氨酸要與其吸附都必需通過氫離子。鈉型的陽離子交換樹脂並是不所有的磺酸基都與鈉離子結合的。你用平衡常數算一下。而且,你用來溶解氨基酸的溶液是強鹼性的嗎?你的樹脂是再生的嗎?
滿意請採納。
5. L-賴氨酸鹽二鹽酸鹽合成方法
L賴氨酸鹽二鹽酸鹽的合成方法主要有以下兩種途徑:
發酵法:
合成法結合光學拆分:
注意:以上方法僅供參考,實際操作中可能需要根據具體條件進行調整和優化。在合成過程中,還需要注意安全和環保問題,確保符合相關法規和標准。