陽離子交換色譜洗脫順序

1. 陽離子交換層析怎樣判斷中性氨基酸的洗脫順序。詳細一點，謝謝了。比如亮氨酸，色氨酸，甘氨酸。

首先得知道待分離氨基酸的等電點,洗脫液也分為幾種,一種洗脫液的pH對應一種氨基酸的pI,用某一洗脫液洗脫時,對應的氨基酸不帶電,然後就被洗脫下來了

2. sephadex lh20柱色譜洗脫順序

sephadex lh20柱色譜洗脫順序：色譜柱填料極性較弱，那麼被分析的物質就是極性大的先出峰；如果用的是正向色譜柱（CN、NH2），色譜柱填料極性較強，那麼被分析的物質就是極性小的先出峰。

Sephadex LH20 洗脫溶劑因分為兩類：反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫，以甲醇/水系統最為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，最後用100%甲醇沖柱。正相系統以氯仿/甲醇最為常見，先用50%氯仿/甲醇，逐漸增加甲醇比例，最後用100%甲醇沖柱。

洗脫層析法

戶Y是色譜法根據實驗技術進行分類中的一種。該法是先將需分離的混合物盡量濃縮，使體積縮小，引人層析柱頂端，然後用純悴的溶劑洗脫，洗脫溶劑可以是原來溶解混合物的溶劑，也可選用其他的溶劑二此法能使各組分分層且分離完全，甚至層與層間隔著一層濟劑、此法是應用的實驗技術。

以上內容參考：網路-洗脫層析法

3. 離子交換層析中流出物質順序是什麼

若用離子交換層析分離物質，以蛋白質為例，離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。

由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。

反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。

(3)陽離子交換色譜洗脫順序擴展閱讀：

對於離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉澱的顆粒，以保證有較好的均勻度，對於已溶脹好的產品則不必經這一步驟。

溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀鹼處理，使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用「鹼-酸-鹼」處理，使最終轉為-OH-型或鹽型交換劑；對於陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理，使最終轉為-H-型交換劑。

梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。

4. 離子交換層析的具體操作

對於離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉澱的顆粒，以保證有較好的均勻度，對於已溶脹好的產品則不必經這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀鹼處理，使之成為帶H+或OH-的交換劑型。陰離子交換劑常用「鹼-酸-鹼」處理，使最終轉為-OH-型或鹽型交換劑；對於陽離子交換劑則用「酸-鹼-酸」處理，使最終轉為-H-型交換劑。
洗滌好的纖維素使用前必須平衡至所需的pH和離子強度。已平衡的交換劑在裝柱前還要減壓除氣泡。為了避免顆粒大小不等的交換劑在自然沉降時分層，要適當加壓裝柱，同時使柱床壓緊，減少死體積，有利於解析度的提高。
柱子裝好後再用起始緩沖液淋洗，直至達到充分平衡方可使用。 加樣：
層析所用的樣品應與起始緩沖液有相同的pH和離子強度，所選定的pH值應落在交換劑與被結合物有相反電荷的范圍，同時要注意離子強度應低，可用透析、凝膠過濾或稀釋法達此目的。樣品中的不溶物應在透析後或凝膠過濾前，以離心法除去。為了達到滿意的分離效果，上樣量要適當，不要超過柱的負荷能力。柱的負荷能力可用交換容量來推算，通常上樣量為交換劑交換總量的1%-5%。 已結合樣品的離子交換前，可通過改變溶液的pH或改變離子強度的方法將結合物洗脫，也可同時改變pH與離子強度。為了使復雜的組份分離完全，往往需要逐步改變pH或離子強度，其中最簡單的方法是階段洗脫法，即分次將不同pH與離子強度的溶液加入，使不同成分逐步洗脫。由於這種洗脫pH與離子強度的變化大，使許多洗脫體積相近的成分同時洗脫，純度較差，不適宜精細的分離。最好的洗脫方法是連續梯度洗脫，洗脫裝置見圖16-6.兩個容器放於同一水平上，第一個容器盛有一定pH的緩沖液，第二個容器含有高鹽濃度或不同pH的緩沖液，兩容器連通，第一個容器與柱相連，當溶液由第一容器流入柱時，第二容器中的溶液就會自動來補充，經攪拌與第一容器的溶液相混合，這樣流入柱中的緩沖液的洗脫能力即成梯度變化。第一容器中任何時間的濃度都可用下式進行計算：
C=C2-(C2-C1)(1-V)A2/A1
式中A1、A2分別代表兩容器的截面積：C1、C2分別表示容器中溶液的濃度；V為流出體積對總體積之比。當A1=A2時為線性梯度，當A1>A2時為凹形梯度，A1>A2時為凸形梯度。
洗脫時應滿足以下要求：
①洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍於床體積，從而使分離的各峰不至於太擁擠。
②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。
③梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。
洗脫餾份的分析按一定體積（5-10ml/管）收集的洗脫液可逐管進行測定，得到層析圖譜。依實驗目的的不同，可採用適宜的檢測方法（生物活性測定、免疫學測定等）確定圖譜中目的物的位置，並回收目的物。
離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生，也可用乙醇洗滌，其順序為：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定（洗必泰），陽離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。

5. 液相色譜法中應該怎麼解釋組分的洗脫順序

使用高效液相色譜儀進行分析時，常用兩種洗脫方式，一種為等度洗脫，另一種為梯度洗脫。

用等度洗脫進行色譜分離時，由不同溶劑構成的流動相的組成，如流動相的極性、離子強度、pH值等，在分離的全過程中皆保持不變。用梯度洗脫進行色譜分離時，在洗脫過程中含2種或兩種以上不同極性溶劑的流動相組成會連續或間歇地改變，其間可調節流動相的極性，改善樣品中各組分間的分離度。

使用梯度洗脫時，也會使干擾分離的強保留雜質組分在較短的時間內從柱中清楚，使色譜柱保持干凈狀態，以進行下一次的分析。梯度洗脫一般是指流動相的組成隨分析時間的延長呈現線性變化，即線性梯度洗脫，可用於反相和正相高效液相色譜儀及離子對色譜法。

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注意事項：

1、流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45μm或更細的膜過濾)。

2、流動相過濾後要用超聲波脫氣，脫氣後應該恢復到室溫後使用。

3、不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。

4、使用緩沖溶液時，做完樣品後應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然後用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鍾以上，以充分洗去離子。對於柱塞桿外部，做完樣品後也必須用去離子水沖洗20mL以上。

6. 離子色譜法主要應用何種物質的分析，如何解釋三個離子的出峰次序結果

離子交換色譜主要用於有機和無機陰、陽離子的分離，由於各種離子對離子交換樹脂的親和力不同，樣品通過分離柱時被分離成不連續的譜帶，依次被淋洗液洗脫。

7. 蛋白質水解產物陽離子交換柱層析時的洗脫順序

pI 10.76的那個應該帶正電荷。陽離子交換柱本身帶負電荷。

8. 各類色譜洗脫規律，簡明扼要

HPLC高效液相色譜按 固定相與流動相的極性相對大小分為正相和反相色譜
正相版中流動相極性小於固定相權，極性組分被滯留，出峰順序：非極性->弱極性->極性
反相色譜流動相極性大於固定相，固定相常用C8-C18，非極性組分最後流出，出峰順序：極性->弱極性->非極性，反相色譜因其與組分無強烈作用，組分不會長時間滯留污染柱子，且反相色譜用水做底溶劑，摻入其他弱極性、非極性溶劑如乙腈等有機物改變流動相極性達到分離目的，水的紫外吸收遏制波長低，不會干擾檢測，且水易得便宜
還有要注意的點：大量物質中分離雜質應先讓含量小的雜質先流出，如果讓量大的組分先流出會拖尾導致雜質分離不純
GC氣相色譜沒什麼說的，原理類似，主要就是保留時間、峰高峰寬、校正因子
毛細管電泳，一般毛細管壁修飾成帶負電，電滲流速率大於電泳速率，正負離子、中性分子均向陰極移動，檢出順序：正離子->中性分子->負離子

9. 離子交換層析可以用於哪些蛋白質的分離

可以分為陽離子交換層析和陰離子交換層析。
陽離子交換層析，使用含回有酸性基團的陽離子答交換樹脂等，可以結合待層析液中的陽離子，因而洗脫順序是，正電荷越多結合越緊密洗脫越晚。
陰離子交換層析則使用含有鹼性基團的交換樹脂，結合溶液中的含有陰離子基團的分子，因而負電荷越多結合越緊密，洗脫越晚。