陰離子交換柱的填料deae

Ⅰ 用過的sephadex G-25層析柱和DEAE纖維素離子交換柱再生的方法為什麼不一樣

飛秒檢測發現sephadex G-25層析柱填料是葡聚糖交聯的凝膠柱，G-X, X：（1）交聯度。X越小，交聯度越大，網孔越小，適用於分離低分子量產品，反之亦然。（2）吸水量。為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克.凝膠柱使用一次後，必須反沖疏鬆一次，平衡後再使用。若使用數次，就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然後用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢，將再生後的凝膠在布氏漏鬥上用蒸餾水洗滌抽干，再用95%乙醇洗兩次，在60℃烘箱中烘乾，回收保存。
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素，是陰離子交換劑。基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生，也可用乙醇洗滌，其順序為：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定（洗必泰），陽離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。
兩種填料的抗酸鹼性和抗腐蝕性能不同。

Ⅱ DEAE Sephadex A-25的使用方法及注意事項

產品簡介

DEAE Sephadex A-25是以交聯葡聚糖為基質的弱陰離子交換劑，適合批量進行分離層析，具有很好的結合能力。葡聚糖離子交換劑是將功能基團通過醚鍵偶聯到交聯葡聚糖上。根據配基基團不同分為：DEAE、QAE和CM 3種，分別包括兩種不同的孔徑：A-25/C-25和A-50/C-50。

產品參數

產品名稱： DEAESephadex A-25

貨號： 17-0170-02

基質： 交聯葡聚糖

顆粒大小： 40-120μm

配基： 二乙胺乙基

離子容量： 3-4mmol/g

每毫升蛋白載量： HSA-30mg；α-乳白蛋白-140mg

最大流速： 45cm/h

工作pH： 2-9；2-13（在位清洗）

化學穩定性： 在水溶液中穩定例如：8M 尿素和6M鹽酸胍溶液

操作溫度：室溫

保存條件：4-30°C(乾粉)；4-8°C（用過的柱子，保存在20%乙醇或者0.01M NaOH）

實驗步驟

1.預處理

稱取所需質量的DEAE Sephadex A-25乾粉，溶於緩沖溶液中；不同緩沖溶液凝膠的膨脹系數不一樣。一般1g DEAESephadex A-25溶於25mL的鹽溶液中。選擇後續實驗相同的pH的緩沖液進行溶脹。室溫溶脹一般需要2天，沸水浴溶脹一般需要2小時，同時還能夠排除溶膠中的氣泡。磁力攪拌時應注意不要破環凝膠顆粒。用布氏漏斗進行沖洗，使其保存在初始的緩沖液中。按凝膠：緩沖液=3:1比例配成勻漿。

2.裝柱

（1）平衡所有試劑和填料平衡至室溫。

（2）將層析柱垂直固定於滴定鐵架上，柱底墊一園尼龍紗，出水口接一乳膠或塑料管並關閉開關。

（3）將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕並保持一小段液體（液面略高於濾膜），務必使底端無氣泡。

（4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意不要使用氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

3.平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。

4.上樣

（1）樣品用平衡液配製，渾濁的樣品要離心、過濾後上柱；

（2）一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡洗液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。

5.洗脫

對於DEAE Sephadex A-25一般使用增大鹽離子濃度或者降低pH的連續或者梯度洗脫。

6.再生

一般用高鹽濃度的緩沖液（1-2M NaCl）沖洗，洗10倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.在位清洗

（1）對於以離子鍵結合上去的蛋白，可以用0.5-1柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對沉澱蛋白、以疏水作用結合的蛋白或者脂類物質，可用1柱床體積的0.1M NaOH去除。

（3）對強疏水性結合的蛋白、脂類等，可用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。清洗完畢後，用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。

注意事項

（1）用過的柱子密封貯存於4°C（保存溶液為20%乙醇或者0.01 M NaOH），通風、乾燥的地方，不能冷凍。

（2）在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

Ⅲ DEAE纖維素柱的原理

DEAE纖維素柱原理，基於離子交換層析：離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖回維素組成。

陰離子答交換基質結合，帶有負電荷的蛋白質，然後這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質從而洗脫下來。

(3)陰離子交換柱的填料deae擴展閱讀：

基本信息：

性狀：乾燥纖維狀。

用途：用於柱色譜分析，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等，陰離子交換填料。

保存：常溫乾燥封袋保存。

DEAE—纖維素的使用方法：

稱取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸餾水浸泡過夜，觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量，稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜，其間換幾次水，每次除去細小顆粒。

抽干，改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用無離子水漂洗，使pH至8左右（用pH試紙檢查）。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，浸泡平衡後使用。

Ⅳ deae-陰離子纖維素的使用方法

DEAE－纖維素的處理及裝柱
（1）處理
本實驗採用的是DEAE－纖維素DE 52 是弱酸型陰離子交換劑，具體處理方法為：先將DE52陰離子交換劑乾粉浸泡於蒸餾水中，去除雜質；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用無離子水或蒸餾水洗至pH值中性或PH4以上，並將其在抽濾漏斗中抽干；將抽乾的離子交換劑浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用無離子水或蒸餾水將其洗至中性。
（2）裝柱
將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上，加1/3體積的無離子水，打開下出液口，水流暢通，即刻將小燒杯中裝有適宜濃度的柱材，輕輕倒入層析柱中，凝膠自然慢慢沉降再層析柱底部，凝膠沉積直到離層析柱上端1.5－2cm處，停止裝柱。層析柱上端進液口連接恆流泵，下出口連接蛋白質監測儀，待層析柱的平衡。
（3）平衡
在柱層析上樣前必須對層析柱進行平衡，所謂平衡就是將層析柱中的溶液用層析過程的緩沖液（洗脫液）置換出來，使層析柱中的緩沖系統與柱層析過程中的系統一致。其方法是：利用層析柱上端的恆流泵將平衡緩沖液泵入到層析柱內，打開層析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，當下出口流出液的PH值與平衡緩沖液的PH值一致時，層析柱達到了平衡。在本實驗中，用0.002M Tris-HCL緩沖液PH7.4(內含0.0001M EDTA)，預先將DE-52柱進行平衡。

Ⅳ Deae52陰離子交換柱上樣量怎麼確定，想盡可能上很多樣品，但是不會影響分離效果

陰離子交換器 又叫陰床，作用是用陰樹脂中的氫氧根交換掉水中的其他陰離版子。離子交換器分為權:鈉離子交換器、陰陽床、混合床等種類，。離子交換柱(器)外殼一般採用硬聚氯乙烯(PVC)、硬聚氯乙烯復合玻璃鋼(PVC-FRP)、有機玻璃(PMMA)、有機玻璃復合透明玻璃鋼(PMMA-FRP)、鋼襯膠(JR)、不銹鋼襯膠等材質。主要用於鍋爐、熱電站、化工、輕工、紡織、醫葯、生物、電子、原子能及純水處理的前道處理，工業生產所需進行硬水軟化、去離子水制備的場合，還可用於食品葯物的脫色提純，貴重金屬、化工原料的回收，電鍍廢水的處理等。 有機玻璃離子交換裝置耐腐蝕、無色透明、適用於食品、醫葯、製糖及電子工業小規模純水制備。碳鋼襯膠離子交換裝置具有制水量大、強度高、成本低等特點，適用於大型鍋爐軟化水及大規模純水制備。

Ⅵ deae陰離子交換柱去除內毒素需要在一定的緩沖體系中嗎

DEAE是陰離子交換柱，一般適合於等電點比較低的酸性蛋白。
另外DEAE在結合內毒素上有很好的效果，所以在很多蛋白去除內毒素時可以用到DEAE。

Ⅶ DEAE纖維素是什麼

英文名稱：DEAE cellulose DE-23
CAS號：9000-11-7
功能團：二乙氨乙基
正常PH范圍：2～9.5
小離子電量：0.88～1.08meg/dg(dg=dry gram，千克重)
蛋白容積：425mg/dg（蛋白體積是指0.01M ph8.5磷酸緩沖液—牛血清白蛋白）
蛋白容積/柱體積：60mg/ml
每升所需的離子交換劑㎏柱床體積：0.19（離子交換劑重量的數字考慮到溶脹，容易去除及使用過程中離子離子交換剩餘顆粒）
填料密度：0.15dg/ml（填料密度的狀態為0.05M PH7.5磷酸緩沖液）
性狀：乾燥纖維狀

用途：用於柱色譜分析，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等，陰離子交換填料
保存：RT

Ⅷ DEAE-纖維素的簡介

性狀：乾燥纖維狀
用途：用於柱色譜分析，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等，陰離子交換填料
保存：常溫乾燥封袋保存

Ⅸ DEAE纖維素柱的原理

DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑.其原理基於離子交換層析：離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成.由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同.陰離子交換基質結...