1. GST標簽蛋白的純化，目的蛋白在GST標簽切除後的濃縮、純化（離子交換和分子篩）過程中出現了聚集和降解。
gst-tag切除後直接過一個gst柱，tag就掛柱上了，目標蛋白就在穿透里了。
如果帶著標簽純化的話，過內離子柱不是還要容摸索條件嗎，而且分子篩的純化量很低。
建議先過gst柱，然後柱上酶切掉標簽，這樣穿透里就會是目標蛋白，也不容易發生聚集啥的
2. HIS蛋白純化後，沒有蛋白，是蛋白沒有掛柱，還是蛋白掛在柱子上沒有下來，有什麼好的解決方法嗎。。。
在親來和純化中，his標簽常常源會遇到這種問題， 沒有收集到蛋白可能是蛋白溜走了，沒有收集到，可能使樣品的緩沖液不正確，尤其針對pH值，或者是his標簽沒有暴露出來，因此沒有掛住，或者可以用WB檢測一下HIS是否還在，更多his親和純化的相關問題，可見文章，總結的比較實際有用，希望對你有所幫助，http://wenku..com/view/521ff9cec281e53a5902ff27
3. 蛋白質水解產物陽離子交換柱層析時的洗脫順序
pI 10.76的那個應該帶正電荷。陽離子交換柱本身帶負電荷。
4. 在離子交換層析中剛開始鹽梯度洗脫蛋白質就都被洗下來了，要怎麼處理這個問題
可以調節流動相的ph值試試
5. 用陽離子交換柱子分離蛋白，怎麼調緩沖液ph
不知你將什麼"緩沖液"調節到一定PH濃度？把問題講明了一點…
6. 蛋白掛在陽離子交換柱上洗脫不下來，怎麼辦
疏水層析目的蛋白結合太緊，一般需要降低疏水作用，可以考慮降低結合時中性鹽的濃度。使用疏水力較弱的層析填料，比如丁基疏水、辛基疏水的填料。 洗脫時可以用蒸餾水直接洗脫，如果還是那以洗脫的話可以嘗試添加低濃度乙醇
7. 純化的蛋白迅速降解原因
有的蛋白質在常溫常壓下是不能成功純化的，因此你首先應該了解你的目的蛋白。
我們比較幸運能在常溫常壓下純化，就我們的經驗來說：1.純化所用的玻璃器皿一定要徹底清洗，蒸餾水沖洗後140度以上高溫烘乾（可以參見普通的實驗室手冊）， 其他可高壓滅菌的高壓滅菌，或用一次性的。這些是最基本的。2.緩沖液中可以加入b-ME或DTT，不過DTT比前者貴得多。3.EDTA常規都加。4.如果你的樣本很少又珍貴並且不怕花錢的話，可以聯合使用兩種以上的蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)(protease inhibitor)（類似cocktail 的方法）如pepstatin、PMSF、leupeptin等，根據情況吧。5.如樓上所說，沒有層析櫃，可以用一個透明門的冰箱代替；有的實驗室有4度冷庫，可以直接在裡面操作，很不錯。6.樣品保存也很關鍵，上樣前收集後都須低溫保存，一旦鑒定完了就分裝凍起來，或是製成乾粉，避免反復凍融。
甘油沒有用過，你還是在查查吧。
不過各種類型的介質都有流量流速限制，這就不用說了。離子交換柱好像對速度的要求更加嚴格吧？這一點還請樓上的指教。
除了本身純化過程需要注意以外,也特別小心前面處理的過程,例如超聲破碎時間及強度,如果過強和時間長也可能斷裂,我覺得得從提取開始檢測到底是什麼原因,同時看一下蛋白的穩定性,如果是保存你的降解帶沒有明顯變化,那就不一定是自己降解的,也許是處理或者純化過程造成的,總之要全面監測,好知道到底是什麼原因,才好找到相應的辦法.
甘油是有一定的作用,但是如果是純化加的話,那最好別超過10%,否則太粘根本流不動,而且也許蛋白會沉澱堵柱子,還需要考察不同的鹽對降解的影響,我知道有的時候高鹽也可以抑制降解,還有注意pH,而且可以加點EDTA看看.因為不少酶需要金屬離子活性更高.
8. 蛋白純化時樣品過完層析柱後放於4度能放多久
看具體是什麼蛋白了，有些蛋白結構穩定可以在4度存放超過一周，有些蛋白結構不穩定需要純化完立刻-80度凍上。
同時還要取決於層析結束後的緩沖是否適合凍融，以及之後是否還有其他純化步驟。不過不論哪種情況下最長也不要再4度存放超過一周，即使蛋白穩定但也是會有長菌的情況。
9. 過柱子純化蛋白酶沒有活性是怎麼回事
這個很難說，因蛋白而異。另外，聚體是否一定沒活性也不好說，很多蛋白dimer才有活性，要具體分析。
蛋白聚集有很多原因，鹽，ph，溫度，蛋白的疏水性，蛋白與蛋白之間的作用。一般分子篩柱不會影響蛋白聚集。可以試試上樣的樣品是否有聚集。如果沒有，使用此緩沖液作為洗脫液。這樣就排除緩沖液的問題了
10. 求助離子交換柱純化蛋白的問題
離子交換樹脂是一類具有離子交換功能的高分子材料。在溶液中它能將本身的離子與溶液中的同號離子進行交換。按交換基團性質的不同，離子交換樹脂可分為陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂兩類。
陽離子交換樹脂大都含有磺酸基（—SO3H）、羧基（—COOH）或苯酚基（—C6H4OH）等酸性基團，其中的氫離子能與溶液中的金屬離子或其他陽離子進行交換。例如苯乙烯和二乙烯苯的高聚物經磺化處理得到強酸性陽離子交換樹脂，其結構式可簡單表示為R—SO3H，式中R代表樹脂母體，其交換原理為
2R—SO3H＋Ca2＋ （R—SO3）2Ca＋2H+
這也是硬水軟化的原理。
陰離子交換樹脂含有季胺基[-N（CH3）3OH]、胺基（—NH2）或亞胺基（—NH2）等鹼性基團。它們在水中能生成OH-離子，可與各種陰離子起交換作用，其交換原理為
R—N（CH3）3OH＋Cl- R—N（CH3）3Cl＋OH-
由於離子交換作用是可逆的，因此用過的離子交換樹脂一般用適當濃度的無機酸或鹼進行洗滌，可恢復到原狀態而重復使用，這一過程稱為再生。陽離子交換樹脂可用稀鹽酸、稀硫酸等溶液淋洗；陰離子交換樹脂可用氫氧化鈉等溶液處理，進行再生。
離子交換樹脂的用途很廣，主要用於分離和提純。例如用於硬水軟化和製取去離子水、回收工業廢水中的金屬、分離稀有金屬和貴金屬、分離和提純抗生素等。