超濾濃縮抗體時沉澱

⑴ 常有的蛋白濃縮方法有哪些

蛋白濃縮方法基本有： 丙酮沉澱法；免疫沉澱法；三氯醋酸沉澱法；硫酸銨沉澱法；（低溫）有機溶劑沉澱法；聚乙二醇沉澱法；超濾法；透析法；離子交換層析和冷凍乾燥法…… 1.丙酮沉澱法；三氯醋酸沉澱法 試驗要求的儀器簡單，但是常常導致蛋白質變性。 2.免疫沉澱法：得有特異性抗體！ 3.硫酸銨沉澱法：利用高濃度鹽將蛋白質析出（鹽析），選擇硫酸按是因為：鹽析有效性，pH范圍廣，溶解度高，溶液散熱少，經濟！ 4.（低溫）有機溶劑沉澱法：強調低溫（0-4度以下）是因為10度時蛋白會在有機溶劑中變性，可用乙醇，丙酮……注意：Mg2+離子，pH值 5.聚乙二醇沉澱法：使用PEG時旨在個別情況下才會是蛋白質稍有變性！他溶解是散熱低，形成沉澱的平衡時間短，通常達到30%時蛋白質就會達到最大量的沉澱！ 6.超濾法：主要針對小體積蛋白質溶液（幾ml）此法更不易引起變性！不過得有濃縮器，不是哪個實驗室都有的！ 7.透析法：主要用於更換蛋白質的緩沖液！的有透析袋！不需要特殊的儀器！ 8.離子交換層析：可用陰離子交換樹脂進行濃縮！ 9.冷凍乾燥法：在冷凍狀態下讓揚品種的液體升華 參考網址on http://www.bio1000.com/experiment/biochemical/351804.html

⑵ 為什麼抗體配好後會出現黃的沉澱

你指的抗體配好後，是指的抗體溶液稀釋好以後，還是直接乾粉抗體溶解以後？
如果是稀釋引起沉澱，可能需要查看稀釋溶液中是否有什麼物質會引起抗體沉澱，或者是溶液的pH值是否發生了改變，重新配稀釋液再試試。
如果是溶解乾粉的時候形成的沉澱，則通常沉澱有可能來自於凍干後無法復溶的抗體，或者是雜質。至於顏色來源，有可能是抗體上標記的染料的顏色，或者就是之前抗體粉劑就有一些泛黃了。無論是哪種原因，沉澱的出現都會造成抗體效價的下降，因為可能有一部分有效的抗體已經去到沉澱中，無法使用。當然也不排除抗體濃度很高，即使損失一部分沉澱，仍然有較高的效價的可能。

保證在溶解的時候，加入了足量的溶液，且充分溶解，例如可以在室溫放置2h，間或來回顛倒混勻，以查看溶解度是否增加。如果確實有一部分不溶解，拍照後，低速離心，取上清測蛋白濃度（280nm），如果濃度太低了，則建議與廠家聯系更換。如果濃度還可以的話，可以嘗試繼續實驗。

⑶ 求教抗體怎樣濃縮

抗體濃縮的方法有很多，你要是想簡單的只是去除其中的水分，來濃縮的話，那可以通過冷凍乾燥法來濃縮抗體；如果是想純化抗體然後在濃縮的話，那方法就多了，硫銨沉澱法最常用，不過現在很多實驗室都在用親和層析柱來洗脫與吸附劑不同親和力的蛋白，然後再冷凍乾燥即可。 當然方法很多。談了一下自己的想法，希望對你有幫助！

⑷ 的抗體，放置一段時間以後為什麼會出現白色絮狀沉

抗血清(兔抗雞血清) 試劑 1.乙酸—乙酸鈉緩沖液：60mmol/L,pH4.0 2.10×磷酸鹽-NaCl 緩沖液(PBS):100mmol/LPBS,pH7.4.稱NaCl 80g、Na2HPO4 12H2O 29g、KCl 2g 、KH2PO4 2g,加蒸餾水溶解,加入100mmol/LEDTA 20m1,用去離子水定容至l000mL.3.透析液 10mmoL／L Na2HPO4- KH2PO4緩沖液,含15mmol/LNaCl,pH7.2.4.硫酸銨 5.辛酸四、操作步驟 1.抗血清用4倍體積乙酸—乙酸鈉緩沖液稀釋,用0.1mol/LNaOH 調至血清稀釋液為pH4.5； 2.室溫下邊攪拌(磁力攪拌器或電功攪拌器),邊緩慢滴加辛酸(25mL/L 血清稀釋液),滴加完後繼續攪拌30min.3.離心(10000r/min,30min),收集上清夜,棄去沉澱； 4.上清液用多層紗布過濾； 5.按l/10體積加入10×PBS,用5mol/LNaOH 調至PH7.4.6.上清液4℃預冷,計算溶液總體積,在4℃按277g/L 加入硫酸銨粉沫(45％飽和度),邊加邊攪拌,加完後繼續攪拌30min.7.離心(5000r/min、15min),棄去上清液.收集沉澱.8.沉澱用少量透析液溶解(一般為血清體積的1/10),透析並更換兩次透析液或用Sephadex G-50脫鹽.9.Ig 溶液在50~55℃水浴中加熱20min,離心(5000r/min,20min),上清液-20℃保存或凍干保存.

⑸ 用疏水層析法分離一種蛋白質類葯物的具體步驟

超濾是一種具有分子水平的薄膜過濾手段，超濾膜作為分離介質，以膜兩側的壓力差為推動力，將不同分子量的溶質進行選擇性分離。超濾過程一般是在常溫低壓下進行的，對分離熱敏性、保味性和易發生化學變化的物質最為適用。在生物合成葯物中主要用於大分子物質的分級分離和脫鹽濃縮，小分子物質的純化，醫葯生化制劑的去熱原處理等。
1除熱原
制劑中去除熱原一般是利用活性碳反復吸附，該方法勞動強度大、損耗大、得率低。超濾去除熱原的原理是使用小於熱原分子量的超濾膜攔截熱原，該方法已經得到美國食品與醫葯管理局認證，具有勞動強度小、產品得率高、產品質量好的優點。
上海第四制葯股份有限公司採用卷式超濾器小裝置，以截留分子量2萬的膜進行了硫酸（雙氫）鏈黴素葯除熱原試驗，試驗結果表明，採用超濾法代替傳統的活性炭吸附熱原，對於硫酸（雙氫）鏈黴素生產是可行的。上海福達制葯有限公司採用截留分子量1萬的磺化聚醚碸膜（SPES），進行黃芪注射液的除熱原超濾，再經活性炭吸附，使產品熱原合格率從原來的經常波動到目前的100%合格。上海天廚味精廠採用截留分子量為1萬的SPES超濾膜，對丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸等氨基酸溶液除熱原，通過鱟試劑法測試結果，結果均為陰性。
由於葯液有效成分（如黃酮類、生物鹼類、總甙類等），其分子量都在1000以下。故對制葯制劑尤其是注射劑使用超濾除熱原是最適合的。空軍北京醫院葯局用超濾法制備了復方丹參、茵梔花、生脈3種復方中草葯注射液，所得超濾產品澄清度好，放置3個月後，無沉澱出現。用化學分析法對注射液中的鞣質、蛋白質、澱粉等項含量進行測定，結果顯示超濾過的產品中，上述雜質的含量均低於衛生標准，除雜質的效果很好。實驗證明，經超濾處理後的去熱原注射液並不會使原方有效成分損失。如復方丹參超濾品測得的281nm光密度值較高，薄層層析檢測出有原兒茶醛斑點，可見的斑點及其熒光點多且清晰。張英輝採用超濾法去除人參皂苷熱原，結果發現：超濾法可有效的去除熱原，又可有效的減少人參總皂苷的損失，該法簡便、可靠、效果好，可用於去除人參皂苷熱原。
北京中醫葯大學葯廠對比了活性碳和超濾兩種工藝，發現對清開靈注射液除熱原，兩種工藝均可行，但超濾法得到產品中：黃岑甙的含量高，產品顏色淺，微粒數量明顯少。利用超濾膜過濾川參通注射液、冠舒注射液、松梅樂注射液及大輸液中的熱原，實驗表明，葯液通過超濾後，熱原的截除率獲得滿意的結果，達到葯典的規定，去除熱原是可靠的。超濾不但可去除熱原，還能去除大於膜孔的高分子物質，提高注射液的澄明度和穩定性，而且超濾膜孔徑越小，脫色作用越明顯。
2小分子精製
對於抗生素類的小分子物質，其傳統的生產過程，要經過過濾、萃取、濃縮、結晶等工藝，存在過程冗長、收率低、能耗大等缺點，而且在精製過程中有微量大分子雜質殘留，如蛋白質、核酸、多醣等，這些雜質可能對人體產生副作用。利用超濾膜可以除去大分子雜質，簡化操作工藝。
青黴素是一種熱敏性物質，其活性單位受環境影響較大，溫度稍高或者處理時間延長均會導致活性單位降解。因此青黴素精製要求在15℃以下快速完成。目前青黴素精製過程中，需要加入十五烷基溴化吡啶作為破乳劑，而該破乳劑毒性大、價格昂貴，採用超濾工藝去除發酵副產品和殘留物以及一些可溶性蛋白質，無需加入破乳劑，而且過程簡單快捷。
超濾系統已應用於紅黴素、青黴素、頭孢菌素、四環素、林可黴素、慶大黴素、利福黴素等抗生素的過濾生產。美國Merck公司利用截留分子量為2.4萬的超濾膜過濾頭黴素發酵液，收率比鋪有助濾劑層的鼓式真空過濾機高出2%,達到98%,材料費用降低2/3,設備投資費用減少20%。另外利用超濾膜可有效地對頭孢菌素C發酵液進行加工處理，而不使膜堵塞或結垢，提高回收率，使得濃縮液中頭孢菌素C的濃度比原發酵液中的更高。韓少抑等利用超濾膜提純螺旋黴素，發現：截留分子量為5000的芳香聚醯胺超濾膜能去除蛋白等大分子雜質，起到納濾預處理作用。
維生素C是人體必需的一種營養成分，在醫學和營養學上有著廣泛的應用。目前，維生素C的生產方式主要有兩種：萊式法和兩步發酵法。其中兩步發酵法是我國科技人員首創的生產工藝，此工藝工程中常採用加熱沉澱法去除雜質，既耗能又造成有效成分古龍酸損失，收率也低。採用超濾膜系統代替加熱沉澱法去除發酵液中殘留的菌絲體、蛋白質和懸浮微粒等雜質，省去了預處理、加熱、離心等工序，既節約了能耗又提高了古龍酸的收率。
中葯中有效成分的分子量大多不超過1000，而無效成分如澱粉、多糖、蛋白質、樹脂等雜質的相對分子質量均在5萬以上。因此，用截留分子量適宜的超濾膜能夠很容易地將兩者分開。與傳統的化學分離方法相比較，膜分離的方法不僅效率高、操作簡便，而且成本低、經濟效益好，所以越來越多地被人們所採用。
3大分子精製
隨著生物技術的發展，大分子類葯物數量急劇增加，由於該類產品具有熱不穩定性，超濾的低溫快速過濾特性成為該類物質精製的重要方法。
利用截留分子量為2萬PS管式超濾膜系統濃縮植酸酶發酵液的實驗顯示，植酸酶的濃縮倍數可以達到6.53倍，濃縮收率為99.69%，截留率為99.93%。
利用PAN超濾膜從藏氂牛血中分離純化凝血酶的實驗顯示，所得凝血酶平均比活為38.24IU/mg，比傳統方法所得比活提高2倍。
利用超濾膜從豬血中純化SOD的方法有三個優點：①除去大量的小分子雜質；②濃縮SOD可節省隨後使SOD沉澱所需的溶劑；③能大大提高後續熱變性純化的效果，SOD總回收率達62%，比活性達5000U/mg。
在丙種球蛋白製品的生產過程中將超濾技術用於蛋白質的脫醇和濃縮。
將超濾技術用於人血白蛋白濃縮和脫醇。
採用超濾法濃縮分離免疫初乳中的抗體，以上這些應用都取得了良好濃縮效果。
用超濾法把高分子多糖類化合物單獨分離出來，制備具有特殊葯理作用的葯物，使中葯不同分子量組分用於不同的治療目的，達到葯物的綜合利用，是膜分離的重要功能。
選用截留分子量為5萬的PS超濾膜替代醇沉法處理板藍根水提液，實現了高效、節能。
利用CA超濾膜濃縮銀耳浸提液，其產品收率較常規濃縮方法提高了22.4%，同時縮短了濃縮時間。
採用超濾一滲濾法，改進香菇多糖的提取純化工藝，提高產品收率、降低生產成本。
用超濾法代替透析法去除海洋真菌多糖提取液中的小分子雜質，結果表明超濾法所得產品的得率和多糖含量都高於透析對照組，另外多糖中的色素大部分會被超濾膜吸附，這對提高粗品多糖含量是有利的。
中空纖維超濾膜可以有效提取六味地黃湯活性多糖，工藝簡單，生產周期短。
4膜蒸餾
膜蒸餾是利用疏水性微孔膜將兩種溫度不同的水溶液分隔開，在膜兩側水蒸氣壓力差的作用下，熱側的水蒸氣通過膜孔進入冷側，在冷側冷凝下來。膜蒸餾與常規蒸餾中的蒸發－傳送－冷凝過程相同。兩者都以氣－液平衡為基礎，都需要蒸發潛熱以實現相變。相對於常規分離過程，其優點是：①理論上100％分離離子、大分子、膠體、細胞及其他不揮發性物質；②操作溫度比傳統蒸餾過程低；③操作壓力比過程低；④對膜的機械性能要求低；⑤適於特種物質分離，而且可以分離極高濃度的物質，甚至可以產生結晶；⑥高效。將膜蒸餾用於熱敏性物質的濃縮，能很好地發揮其低溫濃縮的特性。青黴素作為抗生素應用於臨床已有50年歷史，一般採用溶媒萃取法提取，但提取過程復雜。利用直接接觸式膜蒸餾濃縮青黴素水溶液，濃縮過程比較穩定。益母草和赤芍是中醫臨床常用中葯，水蘇鹼和芍葯苷是兩者指標性成分，皆為水溶性，沸點比水高。將真空膜蒸餾法用於益母草與赤芍提取液的濃縮是可行的，具有效率高、耗能少、操作方便的優點，且有效成分的截留率為100%。

⑹ 抗體制備透析過程中出現蛋白沉澱會不會堵塞層析的柱子

抗體制備透析過程中出現蛋白沉澱當然會堵塞層析的柱子
需要將透析後的樣品高速離心或者點45膜過濾後再上樣層析柱，層析柱柱頭上方有一層保護填料的膜。有沉澱的樣品很容易先堵塞上膜，造成其餘樣品無法進入而堵塞柱子。即使通過了上膜沉澱也會附著在填料上，造成流動相空間減少柱子被堵塞。

⑺ 卵黃抗體肌是什麼

對於家禽來講，高滴度的抗體不僅產生在血清中，在卵黃中也會產生。因此，可以用特異性的弱毒苗或組織滅活苗多次免疫接種健康禽，待其卵黃內抗體滴度達到一定高度後，收集其所產之卵，制備卵黃抗體，同樣可用於特異疫病的緊急預防和治療。卵黃抗體，也稱高免卵黃液。

⑻ 抗體形成的材料是什麼

1. 將蛋白A-Sepharose置於Tris緩沖液中（超過50倍的量，v/v）充分溶脹。在室溫下將其灌入直徑為2.5 cm 玻璃層析柱中，用Tris緩沖液使其平衡。 2. 腹水濃稀釋於3倍體積的Tris緩沖液，以1~5 ml/min 的速度上樣於蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，採用A280監測。 3. 依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所收集蛋白體積的1/4。 4. 採用ELISA法檢測抗原特異性MAb。 5. 在超濾器中濃縮所分離的單克隆抗體到1~5 mg/ml，所用超濾膜為XM50，將單克隆抗體存於-20℃。

⑼ 純化的單克隆抗體，超濾濃縮的時候會把磷酸鹽離心掉導致抗體的緩沖環境變成水嗎

不會的。。。
超濾濃縮對於緩沖液成分不會有任何改變的，因為PBS中的磷酸根離子回也好答，氯離子也好，鈉離子也好都是很小的離子，可以在溶液中自由擴散，不會因為超濾離心就被甩到下層濾液中去。
你可以做個簡單的實驗，取一定體積PBS溶液測一下pH值和電導率值，之後用超濾管去離心。取出上層未被濾完的溶液再測一下pH值和電導率值，會發現pH值和電導率值和之前測的是一樣的。即可證明未被濾完的溶液還是PBS溶液，而不是水。

⑽ 生物制葯純化段用哪些化學品

1、抗體：（1）澄清目前我們最常用的的技術方法是離心和深層過濾。在實驗室級別的樣品制備和純化，從效率和經濟成本方面考慮，通常會使用離心的方法去除細胞和大部分顆粒碎片。在大規模的情況下一般使用深層過濾，相比較離心，深層過濾在大規模發酵料液的處理過程中效率更高，對設備要求較低（與離心機比較），並且目前市面上復合材料的深層過濾器具有去除HCP和DNA等雜質的效果。因此不同情況下應選擇不同的方案。（2）親和深層過濾之後，在絕大部分情況下會使用親和層析。親和層析是應用生物高分子與配基可逆結合的原理，將配基通過共價鍵牢固結合於載體上而製得的層析系統。這種可逆結合的作用主要是靠生物高分子對它的配基的空間結構的識別。Protein A由於其與抗體Fc片段良好的特異親和性，較高的純化倍數，工藝的簡易性而被用於大多數抗體純化工藝中的捕獲階段。親和層析的填料價格較為昂貴，因此親和層析可能需要設計通過幾次循環層析來捕獲這一批產品的目標蛋白。在這里要考慮和平衡好時間長短和經濟成本的影響。時間太長，對上樣液中目標蛋白的穩定性不利；循環次數太低，填料需求量太大，生產成本會提高。（3）離子交換層析離子交換層析有陰離子層析和陽離子層析。依據蛋白的酸鹼性，極性，所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質，對填料上的離子交換劑有不同的結合和力，改變沖洗液的離子強度和pH值，物質就能依次從層析柱中分離出來。這兩種層析根據蛋白的特性來選擇結合或者穿透模式進行純化。其中，往往會有一個離子交換層析主要用來分離目標蛋白中的酸性、中性和鹼性組份；另一個離子交換層析用於少量雜質，如：HCP、DNA、內毒素等物質的分離。（4）疏水層析疏水層析從分離純化生命物質的機制來看，也屬於吸附層析一類，利用固定相載體上偶聯的疏水性配基與流動相中的一些疏水分子發生可逆性結合而進行分離。該方法基於的是蛋白質的疏水差異，在高鹽溶液中，蛋白質會與疏水配基相結合，而其他的雜蛋白則沒有此種性質，利用此種性質，可以將蛋白質進行分離。在某些單抗純化的工藝中會用到疏水層析。疏水層析在去除多具體、DNA、HCP和內毒素等雜志方面都有很好的效果。但要注意的是，這種層析方法往往緩沖液條件比較極端（鹽濃度很高，硫酸銨濃度甚至可以達到2摩爾）因此對一些蛋白可能會產生不利的影響。另外，由於疏水層析洗脫下的目標蛋白可能會含有較高的鹽濃度，在超濾換液的過程中會需要更多的換液次數和體積。（5）超濾和換液超濾的原理：以膜兩側的壓力差為驅動力，以超濾膜為過濾介質，在一定的壓力下，；當料液流過膜表面時，超濾膜表面密布的許多細小的微孔只允許小分子物質通過而成為透過液，而料液中體積大於膜表面微孔徑的物質則被截留在膜的進液側，成為濃縮液，因而實現對蛋白的純化、分離和濃縮的目的。最後還可以通過不斷置換蛋白液中的緩沖體，達到換液的效果。單抗的超濾除了選擇超濾膜包之外，還可以選擇中空纖維柱。但行業中基本都是選擇超濾膜包。雖然兩者各有優勢，但卻選擇超濾膜包，其中很大的一個原因是超濾膜包的耐壓能力比中空纖維強（超濾膜包8bar，中空纖維3bar），精純後的單抗往往穩定性比較好，所以選擇超濾膜包似乎更加合適。2、重組蛋白（1）菌體收集菌體收集一般有離心和中空纖維兩種方法。離心收集菌體，一般會用管式離心機；中空纖維收集菌體則是通過中空纖維的過濾，進行菌體的收集。收集菌體我們往往首先想到的是離心，但是放大無疑是離心機的軟肋。中空纖維有開放式的通道，能夠處理高固含量（菌體發酵液）、高粘度（菌體裂解液）和剪切力敏感型樣品（質粒），並且具有良好的線性放大能力。因此推薦選擇中空纖維，具體見後面的菌體洗滌步驟的描述。在這一步如果是收集和洗滌大腸桿菌，推薦使用透過孔徑為500、750KD 或 0.1、0.2um 的 1 mm 內徑的中空纖維（2）洗滌菌體菌體在收集之後，因為在過程中菌體和很多雜質都被一同收集了，所以之後有必要進行洗滌，把大量的顆粒、可溶或不可溶的雜質去除掉。這樣可以減少在後續純化中的雜質；另一方面，因為去除了大量的酶，因此對產品的活性也會有一定的保護作用。菌體洗滌主要有兩種方法。第一種方法，前一步驟收集的菌體用合適的緩沖液把菌體混懸在洗滌的Tank中，進行洗滌。然後讓菌體自然沉降，之後再置換菌體洗滌液混懸。以上步驟重復2~3次，之後收集沉降的菌體液，進行離心。第二種方法，中空纖維。如果菌體收集時使用的是離心法，則需要用合適的緩沖液把菌體混懸在洗滌的Tank中，之後一邊攪拌防止菌體沉降，一邊置換洗滌液。如果之前是用中空纖維收集的菌體，則可以在之前的設備上繼續操作，置換和洗滌菌體。因此在大規模菌體收集和洗滌的應用中，我會優先選擇中空纖維，一套設備多種用處。中空纖維無論在成本、能耗、人力、時間、場地等方面都有很大的優勢。除此之外在粗純的過程中，中空纖維還有出色的應用。（3）破菌破菌主流的方法有：高壓勻漿機破菌 和 菌體裂解—鹼裂解。高壓勻漿機破菌：個人認為，高壓勻漿機破軍效率較低，對設備要求較高，破菌之前還要把菌體做相應比例的稀釋和混懸，破菌過程中噪音大，能耗也較高。但其一直是比較成熟且可靠的破菌方法，一直在被行業使用。鹼裂解：鹼裂解法由於具有操作簡便、重復性好等優點,已成為目前最為廣泛應用的破菌方法，但是一些蛋白在鹼裂解的過程中容易失活，因此要做評估和實驗比較。除此之外還有使用細菌溶解酶破菌，如果使用這個方法，在產品的檢測項目中要加入殘留檢測。（4）粗純與單抗相比，微生物破菌後，其雜質負荷非常高，很難直接使用深層過濾的方法進行處理，所以粗純方法很不相同。當破菌完成後，料液不推薦直接上色譜，因為雜質含量太高會影響層析的的解析度，降低了目標蛋白的載量，並且還可能損害樹脂的再生。粗純可以用萃取的方法，如PEG沉澱、硫酸銨沉澱或硫酸鈉沉澱等方法。如果目標蛋白是在沉澱中，則在沉澱之前還有必要進行離心去除微生物碎片。因此在規模越大的純化中這種方法越難操作。我們推薦中空纖維進行粗純，中空纖維還可以有效去除細胞碎片。之後再用更小孔徑的中空纖維進行換液，可以有效去除RNA、色素和部分 HCP、HCD 等雜質，以減少層析階段的負荷並且可以濃縮樣品，減小上樣的體積和時間。注意：在菌體收集、洗滌、粗純的過程中，超濾膜包不可替代中空纖維。雖然兩者都是切向流，但兩者的結構設計還是有很大的不同，粘稠的料液容易堵死超濾膜包。相比而言，中空纖維的設計更適合處理高粘度且固體含量高的樣品。（5）精純如果目標蛋白本身帶有標簽，則可以考慮使用親和填料。比如帶有His標簽的蛋白，我們可以用Ni親和填料進行純化。但如果蛋白不帶標簽，則可以考慮使用離子交換、疏水層析以及其他層析方式進行精純。精純的層析往往需要2步甚至3步，這里不詳述。在這里我們要注意的一點是：重組蛋白與單抗相比，往往不太穩定，容易失活和沉降，在開發過程中要尤為注意到這點。（6）超濾超濾參考單抗。3、病毒樣顆粒：病毒樣顆粒（VLP）是與病毒極為相似的分子，但由於它們不含病毒遺傳物質而具有非傳染性。它們可以是天然存在的，也可以通過病毒結構蛋白的單獨表達而合成，然後可以自組裝成病毒樣結構。來自不同病毒的衣殼蛋白的組合可用於創建重組VLP。這幾年大家談論最多的病毒樣顆粒產品有HPV疫苗，除此之外，還有HFMV等疫苗。VLP可以在多種細胞培養系統中產生，包括細菌，哺乳動物細胞系，昆蟲細胞系，酵母和植物細胞。我們就以酵母胞內表達的產品為例，因為酵母胞內表達的產品通常純化比較具有挑戰性。如果要了解動物細胞表達的純化方法，可以參考後面「慢病毒純化」的內容。（1）菌體收集、洗滌菌體、破菌、粗純這幾部分可以參照前面重組蛋白純化的方法，但在這要注意的是，中空纖維的選擇因菌體的不同，選型要有所調整。舉個例子：果是收集和洗滌的是大腸桿菌，推薦使用透過孔徑為500、750KD 或 0.1、0.2um 的 1 mm 內徑的中空纖維，如果微生物是酵母，則推薦使用通過孔徑為0.45 um、0.65 um或1 um的中空纖維進行菌體的收集和清洗。（2）精純VLP與單抗和重組蛋白相比，其分子量要大很多，顯微鏡下一般在20~100納米之間，它的穩定性較差。純化過程中應盡量選擇溫和的條件，否則VLP容易出現在形狀不規則、不均一或殘缺的情況。精純一般有1~3個步層析和超濾換液組成（根據產品的質量要求而定）。常規的層析組合如下：離子交換層析：捕獲VLP，一般離子交換層析對VLP的載量都不高（10mg/ml左右）。分子篩復合填料：如Core 700（根據VLP的大小進行選擇），以穿透的模式進一步純化。它比傳統的分子篩純化有著巨大的優勢，第一，載量大。甚至可以一次性上樣相當於10倍以上柱體積的樣品。第二，它具有吸附小分子雜質的作用（根據填料型號不同，吸附雜質大小的上限也不同），可以進一步去除DNA、HCP、內毒素、VLP碎片等雜質。疏水層析：可以去除一些不規則或者聚集的VLP，以及其他微量雜質。但疏水層析條件比較劇烈，可能會對對產品有有著負面影響。（3）超濾與超濾膜包相比，中空纖維剪切力更低。VLP對剪切力的耐受力較低，建議使用剪切力小的中空纖維，起到降低對產品的負面影響。如果可以去掉超濾步驟則更好。4、慢病毒純化目前慢病毒培養的的主流是貼壁細胞和懸浮細胞（動物細胞）。（1）澄清過濾無論是貼壁細胞還是懸浮細胞，發酵液中都會存在一些細胞、顆粒和脂質體，因此有必要進行澄清過濾。慢病毒的澄清過濾一般不推薦使用深層過濾膜包，因為深層過濾膜包容易把病毒一同去除掉。可以嘗試使用中空纖維或囊式濾器進行過濾，如：0.45μm孔徑，收集透過液。之後的精純可以根據產品的情況進行模塊組合，一般有：濃縮、離子交換層析、分子篩，以上的模塊組合不分先後，根據產品情況決定。最後超濾換液。下面我們闡述。濃縮或換液，有些公司的產品病毒表達量較低，或者產品中的培養基和者其他雜質很有必要在層析之前去掉，那麼就有必要加入濃縮或換液這個步驟。用中空纖維把料液超濾濃縮，之後換液成下一步層析的上樣緩沖溶液。慢病毒對剪切力的耐受力較低，使用超濾很容易降低病毒的收率，建議使用剪切力小的中空纖維，起到降低對產品的負面影響。離子交換層析，分子篩復合填料，可以參考之前VLP的描述。