『壹』 離子交換纖維素有何特點.為什麼人們常用它來分離純化酶
離子交換纖維素復有何特點.為什制么人們常用它來分離純化酶
⑴具有開放性支持骨架,大分子可以自由進入和迅速擴散,故吸附容量大.⑵具有親水性,對大分子的吸附不大牢固,用溫和條件使可以洗脫,不致引起蛋白質變性或酶的失活.⑶多孔性,表面積大、交換容量大,回收率高,可用於分離和制備.
『貳』 一般,用於分離蛋白質的離子交換層析,應該用陰離子交換樹脂,還是陽離子交換樹脂
氨基酸一般用強酸性陽離子交換樹脂,蛋白質用陰離子交換樹脂
『叄』 陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂的區別和用法
陽離子交換樹脂:活性基團為陽離子,比如氫離子,鈉離子等。樹脂上的活性基團與上樣液中的陽離子發生交換,那麼氫離子或鈉離子流出,上樣液中的陽離子留在了樹脂上,再經過洗脫,將目的物陽離子洗脫下來,從而達到分離純化的目的。陰離子交換樹脂:活性基團為陰離子,比如氫氧根離子,氯離子等。上樣液中的陰離子與氫氧根離子或氯離子發生交換,目的物結合到了樹脂上,再洗脫下來。樹脂用法:以陽離子樹脂為例。1,樹脂用50~60℃熱水泡,不時攪拌,開始每隔15分鍾換水一次,換4次,再每隔半小時換水一次,換4次。此時水應為透明,若不透明還有其他顏色或渾濁,繼續水洗。2,樹脂裝柱。用1N鹽酸緩慢流過樹脂柱,大約每小時走1.5倍柱體積,共走3~4柱體積,換去離子水沖柱至中性。3,用1N 氫氧化鈉緩慢流過樹脂柱,大約每小時走1.5倍柱體積,共走3~4柱體積,換去離子水沖柱至中性。4,重復2,樹脂變為氫型。不重復2,樹脂為鈉型。 一般樹脂廠商都會告訴你如何處理活化的。
『肆』 我要分離純化一種未知酶,一切未知,想用凝膠層析和離子交換層析分離,不知選用什麼填料合適有好的建議
建議用離子交換層析。凝膠過濾層析流速慢,上樣量低,而且分離效果一般,凝膠回過濾答一般用於層析的後期包括除鹽,去除降解片段之類的。
離子交換一般就用到DEAE,因為大部分蛋白都偏酸。要是你的酶是鹼性蛋白,那就更好辦,上個CM柱,其他雜蛋白就留不下多少了。
所以先拿DEAE試試吧。
『伍』 在生化血清γ-球蛋白的分離純化實驗中,如果用陽離子交換柱,該怎麼操作
緩沖液改成酸性的 而且要根據不同的pI進行
『陸』 純化可以先陽離子結合再陰離子結合嗎
離子交換層析(Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。
1848年,Thompson等人在研究土壤鹼性物質交換過程中發現離子交換現象。
本世紀40年代,出現了具有穩定交換特性的聚苯乙烯離子交換樹脂。
50年代,離子交換層析進入生物化學領域,應用於氨基酸的分析。
目前離子交換層析仍是生物化學領域中常用的一種層析方法,廣泛的應用於各種生化物質如氨基酸、蛋白、糖類、核苷酸等的分離純化。
常用的離子交換劑有:離子交換纖維素、離子交換葡聚糖和離子交換樹脂 .
離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。
帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂;
而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。
離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。
由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下
『柒』 離子交換柱層析能分離純化蔗糖酶的主要依據是什麼
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。
其原理基於離子交換層析:離版子交換層析中,基質是由帶權有電荷的樹脂或纖維素組成。
由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。
『捌』 做酶的分離純化是做離子交換和凝膠層析時使用普通的玻璃層析柱,只選擇填料行不行
沒問題的。
普通的玻璃層析柱只是做離子交換、凝膠層析壓力沒問題,一般也用不到什麼有機溶劑,所以放心用吧。
『玖』 酶分離純化離子交換柱預裝柱怎麼使用
如果不限定純化方法,可以考慮親和層析或離子交換,但根據你問題的意思,是內選定離子交換。
此時容就要考慮你蛋白的等電點了,如果等電點在你穩定pH之上,就用陽離子交換柱:
設計陽離子交換層析:將你的樣品置換到你所指的穩定pH的running buffer。同時裝柱,平衡,然後上樣,平衡,洗脫(因為你的pH不穩定,建議鹽洗脫),收峰。得你的蛋白;
如果你的等電點在穩定pH之下,就用陰離子交換柱,其步驟如上,只是改變柱子類型。
『拾』 高考電化學問題中如何判斷用的是陰離子交換膜還是陽離子交換膜
經驗:高中所用到的更多是:⑴質子交換膜:H+離子 ⑵陰離子交換膜:OH-離子