凝膠過濾多糖

1. 多糖樣品做凝膠層析為什麼會有多個洗脫峰

多糖樣品做凝膠層析為什麼會有多個洗脫峰
凝膠層析操作中應注意的一些具體問題.
(1)層析柱的選擇
層析柱大小主要是根據樣品量的多少以及對解析度的要求來進行選擇.一般來講,主要是層析柱的長度對解析度影響較大,長的層析柱解析度要比短的高；但層析柱長度不能過長,否則會引起柱子不均一、流速過慢等實驗上的一些困難.一般柱長度不超過100cm,為得到高解析度,可以將柱子串聯使用.層析柱的直徑和長度比一般在1:25－1:100之間.用於分組分離的凝膠柱,如脫鹽柱由於對解析度要求較低,所以一般比較短.
(2)凝膠柱的鑒定
凝膠柱的填裝情況將直接影響分離效果,關於填裝的方法前面已有介紹,這里主要介紹對填裝好的凝膠柱的鑒定.凝膠柱填裝後用肉眼觀察應均勻、無紋路、無氣泡.另外通常可以採用一種有色的物質,如藍色葡聚糖-2000、血紅蛋白等上柱,觀察有色區帶在柱中的洗脫行為以檢測凝膠柱的均勻程度.如果色帶狹窄、平整、均勻下降,則表明柱中的凝膠填裝情況較好,可以使用；如果色帶彌散、歪曲,則需重新裝柱.另外值得一提的是,有時為了防止新凝膠柱對樣品的吸附,可以用一些物質預先過柱,以消除吸附.
(3)洗脫液的選擇
由於凝膠層析的分離原理是分子篩作用,它不象其它層析分離方式主要依賴於溶劑強度和選擇性的改變來進行分離,在凝膠層析中流動相只是起運載工具的作用,一般不依賴於流動相性質和組成的改變來提高解析度,改變洗脫液的主要目的是為了消除組分與固定相的吸附等相互作用,所以和其它層析方法相比,凝膠層析洗脫液的選擇不那麼嚴格.由於凝膠層析的分離機理簡單以及凝膠穩定工作的pH 范圍較廣,所以洗脫液的選擇主要取決於待分離樣品,一般來說只要能溶解被洗脫物質並不使其變性的緩沖液都可以用於凝膠層析.為了防止凝膠可能有吸附作用,一般洗脫液都含有一定濃度的鹽.
(4)加樣量
關於加樣前面已經有所介紹,要盡量快速、均勻.另外加樣量對實驗結果也可能造成較大的影響,加樣過多,會造成洗脫峰的重疊,影響分離效果；加樣過少,提純後各組分量少、濃度較低,實驗效率低.加樣量的多少要根據具體的實驗要求而定：凝膠柱較大,當然加樣量就可以較大；樣品中各組分分子量差異較大,加樣量也可以較大；一般分級分離時加樣體積約為凝膠柱床體積的1％－5％左右,而分組分離時加樣體積可以較大,一般約為凝膠柱床體積的10％－25％.如果有條件可以首先以較小的加樣量先進行一次分析,根據洗脫峰的情況來選擇合適的加樣量.設要分離的兩個組分的洗脫體積分別為Ve1和Ve2,那麼加樣量不能超過(Ve1－Ve2).實際由於樣品擴散,所以加樣量應小於這個值.
從洗脫峰上看,如果所要的各個組分的洗脫峰分得很開,為了提高效率,可以適當增加加樣量；如果各個組分的洗脫峰只是剛好分開或沒有完全分開,則不能再加大加樣量,甚至要減小加樣量.另外加樣前要注意,樣品中的不溶物必須在上樣前去掉,以免污染凝膠柱.樣品的粘度不能過大,否則會影響分離效果.

2. 凝膠過濾分離多糖 多糖樣品的濃度范圍

多糖樣品的濃度在20mg/ml左右

3. 凝膠過濾方法有什麼局限性

葡聚糖凝膠對蛋白質往往有不可逆的吸附性能，需先用易得到的蛋白質進行預層析，以便消除其影響(雖然吸附的數量較少，但是在製作測定蛋白質分子質量的標准曲線時，或者分離純化極難得到的物質時,需預層析)。

4. 凝膠過濾的介質有哪些,各過濾介質的異同是什麼

加油，首先，是這樣的話
①粒狀介質:如焦炭,石礫,細砂,鋸屑,活性炭,玻璃渣,酸性白土等;常用於過濾固相含量較少的懸浮液,如水的過濾和糖的脫色等。

5. 怎樣用葡聚糖凝膠測定多糖分子量，有原理和過程。

多糖的分子量測定
常用的是凝膠濾過法。將充分膨脹好的SephadexG-200、G-150或G-75濕法裝柱，用一定離子強度的氯化鈉水溶液進行平衡，然後將各種不同的已知分子量的多糖分別相繼上柱，同一離子強度的氯化鈉水溶液洗脫，分步收集，苯酚-硫酸法監測，分別求得洗脫體積Ve，然後再將蘭葡聚糖（MV>200萬）上同一條柱，求出柱的空體積Vo，根據Ve/Vo與logM之間存在著線性關系，可繪制標准曲線。最後，將待測樣品按上述不變的條件上柱，求得待測多糖的Ve。通過標准曲線上的Ve/Vo，查得待測多糖的分子量對數，便可求出M。
對於黏度大的多糖，可採用黏度法求得。亦有用蒸汽壓滲透法（VPO，基本原理是根據理想溶液的拉烏爾定律，參考文獻：崔錫紅, 等. 蒸汽壓滲透法分析異丁烯的數均分子量. 河南化工. 2001, 1: 32. 駱傳環. 蒸氣壓滲透計測定多糖分子量. 現代科學儀器, 1994, 4:11.）、超速離心法（駱傳環, 等. 香姑多糖的分子量測定. 科學技術與工程. 2006, 6(8): 1058~1060）、光散射法（LS，光散射法測定高分子量基於高分子溶液的瑞利散射，垂直偏振光通過溶液產生的不同角度散射光的強度與溶質分子的大小即分子量成正比。參考文獻：魏立平, 姜雄平. 光散射法在醫學分子生物學中的應用. 國外醫學分子生物學分冊. 2000, 22(2): 123.）、玻璃纖維紙電泳、聚丙烯醯胺凝膠電泳（原理：SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳，是在聚丙烯醯胺凝膠系統中引進SDS（十二烷基硫酸鈉）， SDS能斷裂分子內和分子間氫鍵，破壞蛋白質的二級和三級結構，強還原劑能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂，蛋白質在一定濃度的含有強還原劑的SDS溶液中，與SDS分子按比例結合，形成帶負電荷的SDS-蛋白質復合物，這種復合物由於結合大量的SDS，使蛋白質喪失了原有的電荷狀態形成僅保持原有分子大小為特徵的負離子團塊，從而降低或消除了各種蛋白質分子之間天然的電荷差異，由於SDS與蛋白質的結合是按重量成比例的，因此在進行電泳時，蛋白質分子的遷移速度取決於分子大小。當分子量在15KD到200KD之間時，蛋白質的遷移率和分子量的對數呈線性關系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW為分子量，X為遷移率，k、b均為常數，若將已知分子量的標准蛋白質的遷移率對分子量對數作圖，可獲得一條標准曲線，未知蛋白質在相同條件下進行電泳，根據它的電泳遷移率即可在標准曲線上求得分子量。應用如，將標准相對分子量蛋白質與樣品進行SDS-PAGE凝膠電泳，以標准蛋白質的遷移率為縱坐標，lgM為橫坐標，繪制相對分子質量曲線。根據樣品遷移率得出相對分子質量。）測分子量，黏度法及超濾法估計分子量。利用不同方法測定多糖分子量可以從不同角度對多糖分子量進行確證，同時也是對多糖純度的考察。在測定過程中要注意標准品的選擇，盡量使用與被測多糖結構相似的標准品，因為不同結構的標准品雖然其絕對分子量相同而在一定條件下所表現的分子量會有所不同。
多糖分子量的測定沒有一種絕對的方法，其分子量只代表相似鏈長的平均配比而不是確切的分子大小。往往用不同的方法會得到不同的分子量。
摘自：季宇彬 《中葯多糖的化學與葯理》人民衛生出版社

6. 如何選擇凝膠過濾填料

首先瓊脂糖凝膠可以排除，這是大孔凝膠，用於分子量較大的成分。
我做分回子篩用的比答較多的柱子都是葡聚糖凝膠凝膠，我的蛋白比你的大，用g50和g100的填料，做的結果都沒什麼問題。
你的蛋白7kd，如果沒有什麼特別的性質（高級結構是球形還是其他的，有無多聚），g50應該可以。如果你不放心，也可以考慮聚丙烯醯胺凝膠，它和葡聚糖凝膠相比更適合於分子量稍小的蛋白，可能更實用於你的實驗。
聚苯乙烯凝膠沒用過，不發表意見。

7. 凝膠過濾技術有哪些具體應用

凝膠過濾色譜法：解析度較高，但是上樣量僅為柱體積的1%，而且對流速也有嚴格的限制。內離子交換色譜法：根容據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質，但是解析度沒有凝膠過濾高。親和層析法：根據生物分子的特異性分離目的蛋白，特異性很高，但是配件容易丟失適合含有特異性的標簽的或者抗體。疏水色譜：根據疏水性來分離蛋白質,缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低，所以應用范圍受到限制，適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質。

8. 凝膠過濾 丙烯葡聚糖凝膠 s-100 s-200 s-300

為什麼s-100那條線 流速橫坐標的時候再上 而樣品體積橫坐標的時候在下
根據我的理解，因為內這兩個測試解析度容的上樣樣品是不一樣的，一個寫的是混合蛋白的樣品，一個寫的是單純的卵白蛋白。所以這兩個測試圖之間沒什麼關聯。只能說明S-100在不同流速時對三個混合蛋白的解析度高於S-300，而在不同上樣體積時對卵白蛋白解析度低於S-300。

這個填料的100、200、300指代什麼
Sephacryl是一種合成柱料，是由烯丙基葡聚與N,N-甲叉二丙烯醯胺共價交聯形成的高機械強度的疏水性填料，葡聚糖的組成比例決定了填料孔洞的不同。所以-100，-200，-300在不同的分子量范圍時選擇性不同，也就是解析度不同。
具體來說，S-100適合分子量1000~10000的球蛋白。S-200適合分子量5000~25000的球蛋白，S-300適合分子量10000~1500000的球蛋白。

9. 凝結多糖的凝膠多糖發展

凝膠多糖是一種新的微生物多糖，具有很多獨特的功能。自1997年美國的專衛生組織批准屬凝膠多糖作為食品添加劑以來，凝膠多糖的功能性質在食品工業得到淋漓盡致的體現，而且應用范圍不斷地擴大。除應用於食品工業外，最近有科學家研究了用凝膠多糖代替葡聚糖作為柱中的填料應用於化工行業，取得了較好的分離效果。
目前國外已開始生產用於此用途的凝膠多糖。在化妝品工業中凝膠多糖作為增稠劑、懸浮劑、穩定劑、保濕劑以及流變性改進劑也很有效，因而可應用於各種類型的化妝品中。據專家分析，凝膠多糖的需求將以30%的速度增長，世界形勢處於供不應求的狀態。而中國對凝膠多糖的研究還處在認識階段，離工業化生產還有很長的一段距離，因此加快對凝膠多糖的開發對調整中國的農村產業結構、提高農產品的附加值、增加農民收入有重要作用。

10. 凝膠過濾,凝膠電泳,超過濾的相同點

凝膠過濾,凝膠電泳,超過濾的相同點
。凝膠過濾又稱為分子篩，是用一版根柱子裡面有填料權，填料是一些粒子，粒子裡面有很多的孔，分子比較小的能進入到粒子的孔裡面，二分子比較大的就會在粒子旁邊流下來。所以用一些蛋白或者是多糖過分子篩，分子大的會先流下來，分子小的後流下來。。。凝膠電泳是運用電泳儀，讓蛋白質或者是核酸在凝膠中移動，移動的速率和分子的大小成反比，分子大的跑得慢，分子小的跑得快