❶ 請告訴我一些是RNA的酶的例子
23SRNA的實質是肽醯轉來移酶,催化使源肽鍵形成,不需要額外的能量在蛋白質合成過程中,它催化核糖體A位tRNA上末端氨基酸的氨基與P位肽醯-tRNA上氨基酸的羧基間形成肽鍵。其結果,使A位的氨醯-tRNA上的多肽延長了一個氨基酸,而P位的氨醯-tRNA形成脫氨醯-tRNA。
❷ 什麼酶是RNA
原核細胞:
主要特徵是沒有明顯可見的細胞核, 同時也沒有核膜和核仁, 只有擬核專,進化地位屬較低。
原核細胞中既有DNA(擬核中),也有RNA(核糖體 轉錄形成的mRNA)
但遺傳物質都是DNA
原核生物不像真核生物那樣,有真正的細胞核,其DNA也沒有與組蛋白形成染色體,它們一般是一個環狀的雙鏈DNA分子,直接存在於細胞中 。
但是在其他生物體內,DNA多半是以雙螺旋結構
滿意請及時採納
❸ 然後如何去除DNA中的RNA酶
(一)從源頭控制污染:
(1)玻璃製品、塑料製品和電泳槽 滅菌的一次性使用的塑料製品基本上無RNA酶,可以不經預處理直接用於制備和貯存RNA。實驗室用的普通玻璃器皿和塑料製品經常有RNA酶法染,使用前必須於180 ℃干烤8小時或更長時間(玻璃器皿)或用氯仿沖洗(塑料製品)。另一種方法是用0.1 %焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡用於制備RNA的燒杯,試管和其他用品。DEPC是RNA酶的強烈抑制劑,但其作用並不是絕對的(Fedorcsak和Ehrenberg,1966)。灌滿DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小時,然後用滅菌水淋洗數次, 並於100℃干烤15分鍾(Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高壓蒸氯滅菌15分鍾。上述處理可以除去器甲上痕量的DEPC,以防DEPC通過羧甲基化作用對RNA的嘌呤鹼基進行修飾。
用於RNA電泳的電泳槽應用去污劑洗干凈,再用水沖洗,用乙醇乾燥,然後灌滿3%的H2O2溶液,於室溫放置10分鍾,然後用0.1 %DEPC處理過的水徹底沖洗電泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料製品和電泳槽作上特殊標記,存放在指定地點,為RNA實驗專用。
(2)研究人員造成的污染 RNA酶最主要的潛在污染源是研究人員的手。因此,在准備分離的和分析RNA的材料和溶液時,主有涉及RNA的一切操作過程中,都應戴一次性手套,接觸「胖的」玻璃器皿和其他物品以後,手套就可能沾染上RNA酶,因此進行RNA實驗時應勤換手套。
(3)污染的溶液 用高壓滅菌的水和RNA研究專用的化學試劑配製溶液,用干烤過的葯匙稱取試劑,將溶液裝入無RNA酶的玻璃器皿。可能的話溶液均應用0.1%DEPC於37℃至少處理12小時,然後於100℃加熱15分鍾或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高壓下蒸氣滅菌15分鍾。註:DEPC可與胺類迅速發生化學反應,因些不能用來處理含有Tris 一類的緩沖液。可存幾瓶新的未開封的Tris晶體以制備無RNA酶的溶液。
(二)已經污染,可以加入RNA酶的抑制劑
(1)RNA酶的蛋白質抑制劑是 從人胎盤分離的一種蛋白質可與多種RNA酶緊密結合(KI≈3x1010)形成非共價結合的等摩爾復合物,使RNA酶失活。此蛋白質體內可能是血管生成素的抑制劑,血管生成素是氨基酸序列和推測的三級結構與胰RNA酶類似的一種血管生成因子, 幾個廠家以不同的商品名出售這種抑制劑,該蛋白質應置於含5mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)的50%甘油中,貯存於-20℃。抑制劑製品凍融數次後或放置在氧化條件下即應棄之不用,因為上述處理會使蛋白質變性從而釋放出所結合的RNA酶。因此,在使用變性劑裂解哺乳動物(mammal;mammalian)細胞這一提取RNA的初始步聚中不應使用這種蛋白抑制劑。然而職用更溫和的裂解方法時應使用這種抑制劑,並且在後續的所有RNA純化步驟中均應有此蛋白質存在。由於酚抽提可以除蛋白質抑制劑,故應在純化過程中補加幾次抑制劑。其最大活性的發揮要求巰基試劑,而且它並不幹擾反轉錄或mRNA在無細胞體系中的翻譯。
(2)氧釩核糖核苷復合物 這種由氧釩(1V)離子和4種核糖核苷之中的任意一種所形成的復合物,是量種過渡態類似物,它能與多種RNA酶結合並幾科能百分之百地抑制RNA酶的活性。這4種氧釩核糖核苷復合物可加入完整細胞中,在RNA提取和純化的所有過程中,其使用濃度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母細胞中進行翻譯, 並能作為某些外酶促反應(如mRNA反轉錄)的模板。然而氧釩核糖核苷復合物強烈抑制mRNA在無細胞體系中的翻譯,因此必須用含0.1 %羥基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有幾家公司出售氧釩核糖核苷復合物。
(3)Macaloid(硅藻上)Macaloid是一咱粘土,很多年前就發現它能吸附RNA酶,用緩沖液將其製成漿液,以0.015%(W/V)的終濃度溶解細胞。 這種粘土隨同它所吸附的RNA酶可在後續的RNA純化過程中(如酚抽提後)經離心去除。
(三)提取核酸時可以加入鹽酸胍或硫氰酸胍溶液。鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白質,從而免受RNA酶的干擾。
❹ 由RNA組成的酶有哪些
四膜蟲自身剪接內含子、大腸桿菌RNase P、錘頭狀核酶和發夾狀核酶。
20世紀 80年代 ,美回國科學家切赫和奧答特曼發現少數RNA也具有生物催化功能 ,這說明有極少數的酶是RNA 。我們把這些具有催化功能的極少數RNA稱為核酶,把這些被稱為核酶的RNA分子稱之為RNA類酶(簡單地:核酶就是RNA)。
核酶的發現,從根本上改變了以往只有蛋白質才具有催化功能的概念,為此,切赫和奧特曼也因這一發現獲得了1989年的諾貝爾獎。
❺ 如何去除環境中的RNA酶
對於實驗檯面的清潔可以用外源RNA酶清除劑的稀釋液簡單噴灑處理就可。內
對於像吸頭,離心管,凍存管這容樣的耗材可以用稀釋液浸泡幾分鍾拿出來去掉水就可立即使用或是烘乾備用。
外源RNA酶清除劑還可以用來處理電泳槽,儀器等還可以處理水配裂解液,緩沖液等。
你也可以用高溫,高壓,濕熱法或是傳統的方法DEPC處理,不過用起來比較麻煩
❻ 有哪些RNA酶
端粒酶
核酶
核酶(ribozyme)主要指一類具有催化功能的RNA,亦稱RNA催化劑。核酶是1982年,Cech等研究原生動物四膜蟲rRNA時,首次發現RRNA基因轉錄產物的I型內含子剪切和外顯子拼接過程可在無任何蛋白質存在的情況下發生,證明了RNA具有催化功能。為區別於傳統的蛋白質催化劑,Cech給這種具有催化活性的RNA 定名為核酶。1983年Altman 等人在研究細菌RNase P時發現,當約400個核苷酸的RNA單獨存在時,也具有完成切割rRNA前體的功能,並證明了此RNA分子具有全酶的活性。隨著研究的深入,Cech發現L -19 RNA 在一定條件下,能以高度專一性的方式去催化寡聚核苷酸底物的切割與連接。核酶可以識別底物RNA的特定序列,並在專一性位點上進行切割,其特異性接近DNA 限制性內切酶,高於RNase,具有很大的潛在的應用價值。
核酶的發現,從根本上改變了以往只有蛋白質才具有催化功能的概念,為此,Cech和Altman也因此獲得了1989年的諾貝爾獎。
自然界中已發現多種核酶,目前主要有四種核酶能用於反式切割靶RNA:四膜蟲自身剪接內含子、大腸桿菌RNase P、錘頭狀核酶和發夾狀核酶。
❼ 核酸雜交液中的甲醯胺是那種呢單純的甲醯胺還是去離子甲醯胺,還是別的甲醯胺,謝謝
核酸雜交液中的甲醯胺一般用去離子甲醯胺。
❽ rnase a酶能與sds結合么
如何去除RNA提取過程中的蛋白質污染提取RNA時如何去除DNA的污染的方法:注意實驗室的標准化問題,注意污染的存在,同時嚴格按照說明書上的操作應該沒有問題。發現DNA污染,用DNAseI消化1小時,37度離心取上清的時候,一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。直接加NaOH溶液與提取液混合攪拌,然後離心就可以了.因為RNA可溶於NaOH溶液,而DNA不可溶,離心後的上清液就不含有DNA了。RNA提取步驟:1.勻漿處理:①組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1mlTRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10%。②單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決於細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。③細胞懸液離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1mlTRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鍾,使核酸蛋白復合物完全分離。3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可於2-8℃10000×g離心10分鍾,取上清。離心得到的沉澱中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。4.每使用1mlTRIzol加入0.2ml氯仿,劇烈振盪15秒,室溫放置3分鍾。5.2-8℃10000×g離心15分鍾。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60%。6.把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見後。用異丙醇沉澱水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鍾。7.2-8℃10000×g離心10分鍾,離心前看不出RNA沉澱,離心後在管側和管底出現膠狀沉澱。移去上清。8.用75%乙醇洗滌RNA沉澱。每使用1mlTRIzol至少加1ml75%乙醇。2-8℃不超過7500×g離心5分鍾,棄上清。9.室溫放置乾燥或真空抽干RNA沉澱,大約晾5-10分鍾即可。不要真空離心乾燥,過於乾燥會導致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl無RNase的水或0.5%SDS,用槍頭吸打幾次,55-60℃放置10分鍾使RNA溶解。如RNA用於酶切反應,勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去離子甲醯胺溶解,-70℃保存。注意事項:從少量樣品(1-10mg組織或102-104細胞)中提取RNA時可加入少許糖原以促進RNA沉澱。例如加800mlTRIzol勻漿樣品,沉澱RNA前加5-10μgRNase-free糖原。糖原會與RNA一同沉澱出來,糖原濃度不高於4mg/ml是不影響第一鏈的合成,也不影響PCR反應。勻漿後加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃保存至少一個月。RNA沉澱可以保存於75%酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。分層和RNA沉澱時也可使用台式離心機,2600×g離心30-60分鍾。預期產量:1mg組織或1×106細胞提取RNA分別為:肝和脾6-10μg,腎3-4μg,骨骼肌和腦組織1-1.5μg,胎盤1-4μg,上皮細胞8-15μg,成纖維細胞5-7μg。
❾ RNA類酶都有哪些
種類數量比較少,而且不常見,比如端粒酶,在細胞中負責端粒的延長的一種酶版,是基本的核蛋白權逆轉錄酶,可將端粒DNA加至真核細胞染色體末端.端粒酶,核酶,RNA聚合酶,逆轉錄酶。
核酶,主要指一類具有催化功能的RNA,亦稱RNA催化劑.自然界中已發現多種核酶,目前主要有四種核酶能用於反式切割靶RNA:四膜蟲自身剪接內含子、大腸桿菌RNase P,錘頭狀核酶和發夾狀核酶。
rRNA,是核糖體上的酶。
拓展資料:
核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵,在高等動植物中都有作用於磷酸二酯鍵的核酸酶。不同來源的核酸酶,其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用於RNA,稱為核糖核酸酶(RNase)。
❿ 怎樣除去RNA中的基因組DNA污染
提取RNA時如何去除DNA的污染的方法:
注意實驗室的標准化問題,注意污染的存在,同時嚴格按照說明書上的操作應該沒有
問題。發現DNA污染,用DNAse I 消化1小時,37度
離心取上清的時候,一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。
直接加NaOH溶液與提取液混合攪拌,然後離心就可以了.因為RNA可溶於NaOH溶液,而DNA不可溶,離心後的上清液就不含有DNA了。
RNA提取步驟:
1. 勻漿處理:
①組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10%。
②單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決於細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
③細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2. 將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鍾,使核酸蛋白復合物完全分離。
3. 可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可於2-8℃10000×g離心10分鍾,取上清。離心得到的沉澱中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿,劇烈振盪15秒,室溫放置3分鍾。
5. 2-8℃10000×g離心15分鍾。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60%。
6. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見後。用異丙醇沉澱水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鍾。
7. 2-8℃10000×g離心10分鍾,離心前看不出RNA沉澱,離心後在管側和管底出現膠狀沉澱。移去上清。
8. 用75%乙醇洗滌RNA沉澱。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75%乙醇。2-8℃不超過7500×g離心5分鍾,棄上清。
9. 室溫放置乾燥或真空抽干RNA沉澱,大約晾5-10分鍾即可。不要真空離心乾燥,過於乾燥會導致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl無RNase的水或0.5%SDS,用槍頭吸打幾次,55-60℃放置10分鍾使RNA溶解。如RNA用於酶切反應,勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去離子甲醯胺溶解,-70℃保存。
注意事項:
從少量樣品(1-10mg組織或102-104細胞)中提取RNA時可加入少許糖原以促進RNA沉澱。例如加800ml TRIzol勻漿樣品,沉澱RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原會與RNA一同沉澱出來,糖原濃度不高於4mg/ml是不影響第一鏈的合成,也不影響PCR反應。
勻漿後加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃保存至少一個月。RNA沉澱可以保存於75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
分層和RNA沉澱時也可使用台式離心機,2600×g離心30-60分鍾。
預期產量:1mg組織或1×106細胞提取RNA分別為:
肝和脾6-10μg,腎3-4μg,骨骼肌和腦組織1-1.5μg,胎盤1-4μg,上皮細胞8-15μg,成纖維細胞5-7μg 。