㈠ 菌落計數有哪些的方法
測定微生物細胞數目方法有多介紹幾種
1.血細胞計數法
稀釋菌液樣品滴血細胞計數板上顯微鏡下計算4~5格細菌數並求出每小格所含細菌平均數再此依據估算總菌數
①此法缺點能區分死菌和活菌
②對壓小方格界線上細菌應當取平均值計數
③此法用於測定培養液酵母菌種群數量變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每活細菌適宜培養基和良好生長條件下通過生長形成菌落培養基表面生長菌落來源於樣品稀釋液活菌
①方法常用來統計樣品活菌數目
②統計菌落數往往比活菌實際數目低原因當兩活多細胞連起時平板上觀察只菌落因此統計結般用菌落數而用活菌數來表示
③土壤、水、牛奶、食品和其材料所含細菌、酵母、芽孢與孢子等數量均用此法測定適於測定樣品絲狀體微生物例放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等營養體等
④此法若培養成菌落通過定量菌液均勻地塗布玻片上定面積上經固定染色顯微鏡下計數樣又稱塗片計數法染色用台盼藍台盼藍能使死細胞染成藍色分別計數死細胞和活細胞
3.濾膜法
濾膜法當樣品菌數低時定體積湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器濾膜乾燥、染色並經處理使膜透明再顯微鏡下計算膜上（或定面積上）細菌數
此法也通過培養觀察形成菌落數來推算樣品菌數例測定飲用水大腸桿菌數目：已知體積水過濾濾膜放伊紅美藍培養基上培養該培養基上大腸桿菌菌落呈現黑色根據培養基上黑色菌落數目計算出水樣大腸桿菌數目
此法也統計樣品活菌數目
4.比濁法
原理定范圍內菌懸液細胞濃度與混濁度成正比即與光密度成正比菌越多光密度越大因此藉助與分光光度計定波長下測定菌懸液光密度光密度表示菌量實驗測量時定要控制菌濃度與光密度成正比線性范圍內否則准確
5.顯微鏡直接計數法
課本生物選修1生物技術實踐P22除了上述活菌計數法外顯微鏡直接計數也測定微生物數量常用方法里說顯微鏡直接計數我認應該稀釋塗布基礎上培養成菌落而通過染色方法顯微鏡下直接計數再濾膜法也樣有兩種情況
另外微生物計數法發展迅速多種多樣快速、簡易、自動化儀器和裝置等方法用來統計微生物數目。
來源：http://..com/link?url=ZF7Dq5chhYTeO1xK
㈡ 用濾膜法測細菌總數,該如何處理
基於濾膜上細菌直接計數法的細菌總數快速檢測
【摘要】 細菌總數快速檢測在質量監測中具有重要的意義，目前除了經典的平板培養法以外，還有微菌落法、阻抗法等快速檢測方法，這些方法或者需要較長的檢測時間，或者需要較高的檢測成本。本研究提出一種不需要培養而在濾膜上直接計數的細菌總數的快速檢測方法，它主要分為過濾、染色、顯微鏡計數和計算四個步驟。計算細菌總數時，根據細菌在濾膜上的分布特點，對傳統公式進行改進，提出按區域計算細菌總數的計算方法，提高了檢測精度。研究結果表明，該方法與傳統的平板培養法無顯著性差異（t=0.847，P=0.436＞0.05），是一種低成本、快速的細菌總數檢測方法。
1 引 言
細菌總數計數的研究已有很多，目前國標規定的方法為平板計數法，該方法是將樣品加入瓊脂營養基，在37 ℃下培養24～48 h後計數。這種方法精度高，但耗時長，難以滿足實際工作需要。為了簡化檢測程序、縮短檢測時間，國內外學者進行了大量的快速檢測方法的研究，提出了阻抗檢測法〔1〕、Simplate TM全平器計數法〔2〕、微菌落技術〔3-5〕、紙片法〔6-7〕等檢測方法，取得了一定的成果，但檢測時間仍在4 h以上。
本研究在分析了已有研究成果的基礎上，提出了在濾膜上染色後，直接計數的細菌總數檢測方法，具體步驟為：用集菌儀進行細菌收集→在膜上進行染色→在油鏡下計數→按公式計算出菌液濃度。實驗結果表明，該方法與傳統的平板培養法無顯著性差異，檢測時間約1 h，是一種快速的細菌總數檢測方法。
2 材料與方法
2.1 材料
本研究中用的試驗材料有集菌儀（杭州泰林生物技術設備有限公司），染色劑，生物顯微鏡（寧波永新光學股份有限公司），聚碳酸脂膜（直徑47 mm）。
2.2 實驗方法
2.2.1 准備工作 卸下集菌儀的濾網（見圖1），統計濾網上小孔總數，為計算菌液濃度做准備。另外，還需對集菌儀中的集菌器進行高壓滅菌，以防止過濾過程中引入外源細菌。
2.2.2 細菌收集 取一定濃度的黴菌菌液300～500 ml，裝在集菌儀上，集菌儀採用蠕動加壓方式對菌液施加一定的壓力，使菌液流過孔徑為0.45 um的聚碳酸脂膜。採用過濾方法是因為它可以使細菌相對均勻地分布在濾膜上，而選用聚碳酸脂膜是因為這種膜具有良好的透光性，便於用顯微鏡觀察。
2.2.3 染色 集菌後取下濾膜，切下一部分放在載玻片上，進行染色、固定。染色的目的是增大細菌與背景的對比度，便於觀察。
2.2.4 顯微鏡計數與計算 菌液經集菌儀過濾後，細菌在濾膜上的分布見圖2、圖3，由圖可以看出細菌分布具有以下兩個特點：一是細菌集中在一個個的圓形區域內，這些圓形區域和擋板的小孔相對應；二是各個圓形區域之間細菌很少。根據膜上細菌分布的這種特點，提出以圓形區域為單位進行計數，統計出圓形區域內細菌的平均個數，從而計算出菌液中細菌總數。具體步驟如下：隨機選擇10個圓形區域，在油鏡下，調節焦距以獲得較清晰的圖像（見圖4），統計每個圓形區域內的細菌個數，然後按公式(1)計算出菌液的濃度。
X=A10×N/V(1)圖2 膜上細菌的區域分布
Fig 2 The distributing region of bacteria on the filter(100倍)
圖3 膜上細菌的區域間隔
Fig 3 The space among the distributing regions(100倍)
圖4 膜上細菌染色後圖像
Fig 4 Figure of bacteria after coloration(1 000倍)
式中：X表示待檢菌液濃度（CFU/ml）
A表示10個圓形區域內細菌總數
N表示濾網上小孔總數
V表示集菌時所用待檢菌液體積（ml）
3 結果與討論
3.1 實驗結果
按上述方法計算得到的結果與平板培養法得到的結果見表1。表1 兩種方法得到的細菌總數
Table 1 Total bacteria number by two different methods
樣本1樣本2樣本3樣本4樣本5樣本6染色鏡檢
(cfu/ml）185168157165171166平板培養
(cfu/ml)176155165158183152
對表1中兩組數據進行配對t檢驗，在α=0.05時，雙尾檢驗結果如下：t=0.847，P=0.436＞0.05，說明兩種方法得到的結果無顯著性差異。
3.2 討論
3.2.1 計算公式的改進 用集菌儀對樣本菌液進行過濾時，由於濾網擋板的作用，使得細菌不是均勻地分布在整個濾膜上，而是集中分布在濾網的小孔處，所以，計算細菌總數時，不能採用公式X=A40×Φ1Φ22/V（其中Φ1，Φ2分別為濾膜直徑和視野直徑），該公式是微菌落方法檢測細菌總數中的常用計算公式。在本實驗中，根據細菌分布的特點，提出以圓形區域為單位計算細菌總數的思路，使計算結果更接近真實值，從而提高了檢測精度。
3.2.2 細菌大小的影響 細菌大小對本實驗的影響主要體現在鏡檢時，如果細菌太小，顯微鏡計數時不能將細菌從背景中分辨出來，我們的實驗結果顯示，不能分辨大腸桿菌和葡萄球菌，而較大的黴菌可以清晰地分辨。
3.2.3 檢測時間進一步縮短 細菌總數的經典檢測方法是平板培養法，得到的結果精度高，但是它所用時間長，為了縮短檢測時間，出現了微菌落法，將檢測時間縮短為4 h左右〔3-5〕。本研究不對細菌進行培養，而是在膜上染色後直接用顯微鏡計數，最大限度地縮短了檢測時間，使整個檢測時間在1 h左右。
4 結論
本研究用集菌儀將菌液過濾後，取濾膜一部分進行染色、製片，然後在油鏡下統計細菌個數。根據細菌在濾膜上的分布特點，提出將圓形區域作為統計單位，得到圓形區域內細菌的平均個數，從而計算出菌液濃度。實驗結果表明，按照該方法得到的結果與平板培養法的結果無顯著性差異。與平板培養法和微菌落法相比，該方法不需要細菌培養，檢測時間只需要1 h左右，明顯縮短了檢測時間，是一種快速、有效的細菌總數檢測方法。
㈢ 微生物塗片染色法計數計算方法
測定微生物細胞數目的方法有很多,介紹幾種
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數.
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數.
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數.
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確.
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.
㈣ 純化水的微生物限度里的薄膜過濾法如何計數啊
採用薄膜過濾法進行細菌試驗,誤判風險要小些,所以發現問題的概率比直接接種法要大些。內所以，葯典要求細菌試容驗採用薄膜過濾法是有道理的。 tIet^:Ug
純化水微生物限度檢測薄膜過濾法是葯典方法，已經是做了驗證的，所以企業沒有必要再做方法評價。
㈤ 平板計數法和膜過濾法檢測細菌有什麼區別呢 哪個精確一些
膜過濾法更為精確一些。
膜過濾技術是成熟的技術，ISO標准、AOAC、美國的EPA等等。所有這些標准，最起碼ISO標準是可以拿過來用的。採用濾膜法進行微生物檢測是一種國際公認的微生物標准檢驗方法，其得到AOAC、美國、歐洲和日本等國家的葯典、FDA和EPA等組織的承認，廣泛應用於環境監測、食品及飲料工業、化妝品、制葯工業品質控制和電子工業等領域。賽多利斯公司的濾膜法微生物檢測產品成功地應用於濾膜法已有20多年的歷史，實用而且方便實用，它簡化了微生物檢測程序。 所以，1.有菌落總數檢測膜過濾法的標准。2.有可行性。
標准和技術是兩碼事，標準的制定主要是為了評價水平和保護安全。
2.關於平皿計數法檢不出，而濾膜法卻能檢測出，可想到以下兩點：1）平皿計數法，傾倒的培養基也要50度左右，而50度左右足矣使部分環境微生物不能生長了；2）在培養基內部的微生物比在表面的獲得更少的氧，應該也是會影響部分微生物的生長。膜過濾法是水質樣品的國際上公認的方法，有依據可查。主要起到一個富集的作用 畢竟水中的菌比較分散。
濾膜法微生物檢測： 將適當孔徑的濾膜放入濾器，過濾樣品，由於濾膜的作用而將微生物保留在膜的表面上。樣品中微生物生長抑制劑可在過濾後用無菌水沖洗濾器而除去。然後，將濾膜放在培養基上培養，營養物和代謝物通過濾膜的微孔進行交換，在濾膜表面上培養出的菌落可以計數，並和樣品量相關。
濾膜法的優點：
-與直接法比較，可以檢測大量的樣品
- 濃縮效應使微生物檢測的准確度提高
- 帶有菌落的濾膜，可作為檢測的永久記錄存檔
- 可見的菌落和樣品量直接對應，得出定量結果
㈥ 請問為什麼可以直接計數菌落比濁法和膜透過法是什麼
測定微生物細胞數目方法有多介紹幾種
1.血細胞計數法
稀釋菌液樣品滴血細胞計數板上顯微鏡下計算4~5格細菌數並求出每小格所含細菌平均數再此依據估算總菌數
①此法缺點能區分死菌和活菌
②對壓小方格界線上細菌應當取平均值計數
③此法用於測定培養液酵母菌種群數量變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每活細菌適宜培養基和良好生長條件下通過生長形成菌落培養基表面生長菌落來源於樣品稀釋液活菌
①方法常用來統計樣品活菌數目
②統計菌落數往往比活菌實際數目低原因當兩活多細胞連起時平板上觀察只菌落因此統計結般用菌落數而用活菌數來表示
③土壤、水、牛奶、食品和其材料所含細菌、酵母、芽孢與孢子等數量均用此法測定適於測定樣品絲狀體微生物例放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等營養體等
④此法若培養成菌落通過定量菌液均勻地塗布玻片上定面積上經固定染色顯微鏡下計數樣又稱塗片計數法染色用台盼藍台盼藍能使死細胞染成藍色分別計數死細胞和活細胞
3.濾膜法
濾膜法當樣品菌數低時定體積湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器濾膜乾燥、染色並經處理使膜透明再顯微鏡下計算膜上（或定面積上）細菌數
此法也通過培養觀察形成菌落數來推算樣品菌數例測定飲用水大腸桿菌數目：已知體積水過濾濾膜放伊紅美藍培養基上培養該培養基上大腸桿菌菌落呈現黑色根據培養基上黑色菌落數目計算出水樣大腸桿菌數目
此法也統計樣品活菌數目
4.比濁法
原理定范圍內菌懸液細胞濃度與混濁度成正比即與光密度成正比菌越多光密度越大因此藉助與分光光度計定波長下測定菌懸液光密度光密度表示菌量實驗測量時定要控制菌濃度與光密度成正比線性范圍內否則准確
5.顯微鏡直接計數法
課本生物選修1生物技術實踐P22除了上述活菌計數法外顯微鏡直接計數也測定微生物數量常用方法里說顯微鏡直接計數我認應該稀釋塗布基礎上培養成菌落而通過染色方法顯微鏡下直接計數再濾膜法也樣有兩種情況
另外微生物計數法發展迅速多種多樣快速、簡易、自動化儀器和裝置等方法用來統計微生物數目。
直接計數的方法是不經過培養，直接通過各種儀器來檢測。如1.血細胞計數法、3.濾膜法、4.比濁法、5.顯微鏡直接計數法。
來源：http://..com/link?url=ZF7Dq5chhYTeO1xK
㈦ 微生物的膜過濾法是如何對菌數進行計數的
例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸桿菌的數目。
㈧ 初始污染菌檢測過濾後一張膜用於兩個培養基怎麼計數
你可以用一半的液體過濾，然後兩張膜上液體各一半，兩張膜可以貼兩個培養基上。培養基上的計數結果要乘以2作為最終的結果。
㈨ 微生物（薄膜過濾法）方法驗證時，菌液組是採用薄膜過濾法還是採用平皿計數法
方法驗證，應該兩種都要做
㈩ 微生物計數方法有哪些
測定微生物計數的方法有很多,主要有以下幾種：
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數.
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數.
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數.
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確.
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.