㈠ 離子交換纖維素色譜法離子交換的分類及常見種類
離子交換纖維素色譜法主要依據離子交換劑的類型和特性進行分類,包括陽離子交換劑和陰離子交換劑,這兩類又可以根據解離性強弱進一步細分為強酸性和弱酸性、強鹼性和弱鹼性。
1. 陽離子交換劑,如磺酸、磷酸、羧酸和酚羥基等酸性基團的交換劑,如國產的1×7樹脂和國際品牌的Dowex 50、Zerolit 225,它們屬於強酸型。反應方式包括強酸性R-SO3-H++Na+ R-SO3- Na+H+和弱酸性R-COOH+Na+ R-COONa+H+。
2. 陰離子交換劑,如伯胺、仲胺、叔胺和季胺等鹼性基團的交換劑,如國產的#201號樹脂和Dowex 1、Dowex 2、ZerolitFF,它們屬於強鹼型。反應方式有強鹼性R-N+(CH3)2 H·OH-+Cl R-N+(CH3)2 Cl+OH-和弱鹼性R-N+(CH3)2 H·OH-+Cl R-N+(CH3)2 HCl+OH-。
離子交換劑種類豐富,例如纖維素離子交換劑有CM-纖維素(陽離子)和氯代三乙胺纖維紗(DESE-纖維素,陰離子)。交聯葡聚糖離子交換劑如Sephadex,有陰離子和陽離子兩種,如DEAE-Sephadex A-25、A-50和CM-Sephadex C-50等,英文字頭A代表陰離子,C代表陽離子,數字表示型號。瓊脂糖離子交換劑如DEAE-Sephades和CM-Sepharose,是通過DESE-或CM-基團附著在Sepharose CL-6B上製成,具有優良的分離性能和穩定性。
Sober和Peterson於1956年首次將離子交換基團結合到纖維素上,製成了離子交換纖維素,成功地應用於蛋白質的分離。從此使生物大分子的分級分離方法取得了迅速的發展。離子交換基團不但可結合到纖維上,還可結合到交聯葡聚糖(S-ephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose)上。近年來離子交換色譜技術已經廣泛應用於蛋白質、酶、核酸、肽、寡核苷酸、病毒、噬菌體和多糖的分離和純化。
㈡ 怎樣提取藻藍蛋白
一、實驗原理
1.凍融法:將細胞置低溫下冰凍一定時間,然後取出置室溫下融化。如此重復凍融多次,細胞可在形成冰粒和增高剩餘胞液鹽濃度的同時,發生溶脹破碎。
2.鹽析法:鹽在水溶液中電離形成的正負離子可吸引水分子,從而破壞蛋白質的水花膜,中和部分電荷,致使蛋白質聚集沉澱,並從溶液中析出。由於各種蛋白顆粒的大小、所帶電荷的多少及其親水程度的不同當使用某種中性鹽進行鹽析時,所需的最低鹽濃度各不相同。 3.DEAE-纖維素:英文名稱DEAE-Cellulose,二乙基胺乙基纖維素,總交換量0.9meq/g功能基:二乙基胺乙基.弱鹼性陰離子交換劑。 原理:含有某些功能基團,可以進行離子交換。性能比一般離子交換樹脂溫和,適用於分離具有生物活性的大分子,可以將性質相近的大分子物質分開。
二、實驗步驟
1. 藻藍蛋白的提取
取螺旋藻粉10g,,倒入塑料瓶中,加提取液100ml,封住瓶口置低溫(-20℃)下冰凍一定時間,然後取出置室溫下融化,再放置低溫(-20℃)下,如此反復凍融3次,細胞可在形成冰粒和增高剩餘胞鹽濃度的同時,發生溶脹破碎。 實驗現象:解凍前:墨綠色固狀(略帶紫色)解凍後:墨綠色溶液 凍融所得溶液分兩次在4000rpm下高速離心10min,得到亮藍色上清液,用小燒杯收集,棄去下層墨綠色沉澱。
2、鹽析法沉澱藻藍蛋白:
(1)藻藍蛋白鹽析曲線的製作
取六支試管編號1-6,分別加入初提液5ml,1-4號試管中加入飽和硫酸銨溶液(100ml溶液中加入69.7g硫酸銨)2、3、4、5ml,再加入蒸餾水3、2、1、0ml,向5-6號試管中加入固體硫酸銨0.66和1.37g,再加入飽和硫酸銨溶液5ml,充分搖晃溶解後,冰箱中靜置半小時以上,放入離心機中4000rpm離心10min,收集沉澱,沉澱用5ml,0.02mol/L pH6.5的磷酸緩沖液溶解。以硫酸銨飽和度為橫坐標,藻膽蛋白濃度為縱坐標作圖,得藻藍蛋白鹽析曲線。
C=(A620-0.474A650)/5.34 (mg/ml)
A620、A650分別為在620、和650nm下的吸光度,以磷酸緩沖液調零。
3、藻膽蛋白純化
(1)稱取 (NH4)2SO4固體粉末,分多次緩慢加入小燒杯中,邊加邊攪拌,使溶液的(NH4)2SO4飽和度達到20%(11.4%)。冰箱中放置半小時,在4000rpm,離心10min,離心沉降後,取得亮藍色上清液,棄去藍色沉澱。 加入硫酸銨使溶液的(NH4)2SO4濃度達到50%(31.3%,要扣除前面已加的硫酸銨的量)。在4000r下高速離pm心10min,離心沉降後,取得深藍色沉澱,棄去黃綠色上清液。加不超過15ml蒸餾水溶解所得沉澱備用(水因盡量少,有利於滲析)。
(2)剪取約25cm長的透析袋,放入燒杯中煮沸5min(從水沸開始計時),將其中一頭用細線扎住,對折後再用細線扎住。將之前溶解沉澱的溶液倒入層析袋中。放入蒸餾水中,每一小時換一次透析液. 透析後放入PEG-6000固體顆粒中,進行濃縮。
(3)取一支層析柱,檢漏後清洗干凈,用兩個鐵夾固定在鐵架台上,要從正面和側面檢查是否豎直,如不豎直則作出調整。稱取20g DEAE—纖維素—52於一燒杯,用0.5MNaCL和0.5MNaOH溶液融脹20min,再用蒸餾水洗至中性。接著用0.5MHCL溶液融脹20min,再用蒸餾水洗至中性。最後用0.02M,pH6.5磷酸緩沖液平衡過夜。輕輕攪拌溶液,均勻地倒入柱中。柱中液面上要保留2~3cm的空間,之後液面每下移到原刻度位置,就補水到相應高度,使蒸餾水始終高於填料2cm以上。
(4)將准備好的層析柱中的緩沖液放出,待液面比填料高出大約只有1cm時,關閉柱開關。用膠頭滴管吸取透析後的藻藍蛋白粗提液,伸入柱液面內,沿管壁以很慢的速度將粗提液滴到液面中部,待液面升高後可以加快滴加速度。待液面離柱口只有大約2cm距離時,把開關完全打開,一邊繼續滴加粗提液。
(5)待粗提液液面比填料高出大約只有1cm時,滴加50ml,0.02M,pH6.5磷酸緩沖液沖洗殘余粗提液,不要一次加入,應先加少量把殘余粗提液沖洗干凈(至溶液澄清為止),再大量加入。最後加入0.5MNaCl—0.02M,Ph6.5磷酸緩沖液。
(6)小心觀測,待有淺藍色溶液流出時,馬上開始收集,2ml一管(共收集10管)。收集到試管後,試管內溶液的顏色變化:淺→深→淺 以磷酸緩沖溶液為空白對照管,用分光光度計測其A620nm,A650nm
(7)根據A620nm、A650nm計算各管的藻藍蛋白濃度。
㈢ 離子交換層析的原理是什麼 已解決
離子交換層析法是從復雜的混合物中,分離性質相似大分子的方法之一,依據的原理是物內質的酸鹼性容,極性,所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質,對管柱上的離子交換劑有不同的親和力,改變沖洗液的離子強度和pH值,物質就能依次從層析柱中分離出來。
層析開始前,功能基團與反離子穩定結合,就與反離子發生可逆交換,與層析劑結合被固定下來。因為鹽離子可以與底物競爭功能基團,鹽濃度越高樣品與層析劑結合越不緊密,易被洗脫下來。不同物質與層析劑結合程度不同,洗脫下來的時間不同,因此得以分開。
(3)樹脂deae纖維素擴展閱讀
離子交換劑的選擇首重保持欲分離物質的生物活性,以及在不同pH值環境中,此物質所帶的電荷和電性強弱,陰陽離子交換劑的選擇若被分離物質帶正電荷,這些鹼性蛋白質,它們在酸性溶液中較穩定,親和力強,故採用陽離子交換劑。
在鹼性溶液中較穩定,則使用陰離子交換劑,如果欲分離的物質是兩性離子,一般考慮在它穩定的pH范圍帶有何種電荷,作為交換劑的選擇。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生,若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生,也可用乙醇洗滌。
㈣ 有機化學官能團名稱及英文字母表示縮寫是什麼
A 英文縮寫 全稱 A/MMA 丙烯腈/甲基丙烯酸甲酯共聚物 AA 丙烯酸 AAS 丙烯酸酯-丙烯酸酯-苯乙烯共聚物 ABFN 偶氮(二)甲醯胺 ABN 偶氮(二)異丁腈 ABPS 壬基苯氧基丙烷磺酸鈉 B 英文縮寫 全稱 BAA 正丁醛苯胺縮合物 BAC 鹼式氯化鋁 BACN 新型阻燃劑 BAD 雙水楊酸雙酚A酯 BAL 2,3-巰(基)丙醇 BBP 鄰苯二甲酸丁苄酯 BBS N-叔丁基-乙-苯並噻唑次磺醯胺 BC 葉酸 BCD β-環糊精 BCG 苯順二醇 BCNU 氯化亞硝脲 BD 丁二烯 BE 丙烯酸乳膠外牆指睜塗料 BEE 苯偶姻乙醚 BFRM 硼纖維增強塑料 BG 丁二醇 BGE 反應性稀釋劑 BHA 特丁基-4羥基茴香醚 BHT 二丁基羥基甲苯 BL 丁內酯 BLE 丙酮-二苯胺高溫縮合物 BLP 粉末塗料流平劑 BMA 甲基丙烯酸丁酯 BMC 團狀模塑料 BMU 氨基樹脂皮革鞣劑 BN 氮化硼 BNE 新型環氧樹脂 BNS β-萘磺酸甲醛低縮合物 BOA 己二酸辛苄酯 BOP 鄰苯二甲酸二乙酯 BPP 雙軸向聚丙烯 BP 苯甲醇 BPA 雙酚A BPBG 鄰苯二甲酸丁(乙醇酸乙酯)酯 BPF 雙酚F BPMC 2-仲丁基苯基-N-甲基氨基酸酯 BPO 過氧化苯甲醯 BPP 過氧化特戊酸特丁酯 BPPD 過氧化二碳酸二苯氧化酯 BPS 4,4』-硫代雙(6-特丁基-3-甲基苯酚) BPTP 聚對苯二甲酸丁二醇酯 BR 丁二烯橡膠 BRN 青紅光硫化黑 BROC 二溴(代)甲酚環氧丙基醚 BS 丁二烯-苯乙烯共聚物 BS-1S 新型密封膠 BSH 苯磺醯肼 BSU N,N』-雙(三甲基硅烷)脲 BT 聚丁烯-1熱塑性塑料 BTA 苯並三唑 BTX 苯-甲苯-二甲苯混合物 BX 滲透劑 BXA 己二酸二丁基二甘酯 BZ 二正丁基二硫代氨基甲酸鋅 C 英文縮寫 全稱 CA 醋酸纖維素 CAB 醋酸-丁酸纖維素 CAN 醋酸-硝酸纖維素 CAP 醋酸-丙酸纖維素 CBA 化學發泡劑 CDP 磷酸甲酚二苯酯 CF 甲醛-甲酚樹脂,碳纖維 CFE 氯氟乙烯 CFM 碳纖維密封填料 CFRP 碳纖維增強塑料 CLF 含氯纖維 CMC 羧甲基纖維素 CMCNa 羧甲基纖維素鈉 CMD 代尼爾纖維 CMS 羧甲基澱粉 D 英文縮寫 全稱 DABCO 三乙烯二胺DAF 富馬酸二烯丙酯拿漏 DAIP 間苯二甲酸二烯丙酯 DAM 馬來酸二烯丙酯 DAP 間苯二甲酸二烯丙酯 DATBP 四溴鄰苯二甲酸二烯丙酯 DBA 己二酸二丁酯 DBEP 鄰苯二甲酸二丁氧乙酯 DBP 鄰苯二甲酸二丁酯 DBR 二苯甲醯間苯二酚 DBS 癸二酸二癸酯 DBU 1,8二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯DCCA 二氯異氰脲酸 DCCK 二氯異氰脲酸鉀 DCCNa 二氯異氰脲酸鈉 DCHP 鄰苯二甲酸二環乙酯 DCPD 過氧化二碳酸二環乙酯 DDA 己二酸二癸酯 DDP 鄰苯二甲酸二癸酯 DEAE 二乙胺基乙基纖維素 DEP 鄰苯二甲酸二乙酯 DETA 二乙撐三胺 DFA 薄膜膠粘劑 DHA 己二酸二己酯 DHP 鄰苯二甲酸二己酯 DHS 癸二酸二己酯 DIBA 己二酸二異丁酯 DIDA 己二酸二異癸酯 DIDG 戊二酸二異癸酯 DIDP 鄰苯二甲酸二異癸酯 DINA 己二酸二異壬酯 DINP 鄰苯二甲酸消逗爛二異壬酯 DINZ 壬二酸二異壬酯 DIOA 己酸二異辛酯 lan> E 英文縮寫 全稱 E/EA 乙烯/丙烯酸乙酯共聚物 E/P 乙烯/丙烯共聚物 E/P/D 乙烯/丙烯/二烯三元共聚物 E/TEE 乙烯/四氟乙烯共聚物 E/VAC 乙烯/醋酸乙烯酯共聚物 E/VAL 乙烯/乙烯醇共聚物 EAA 乙烯-丙烯酸共聚物 EAK 乙基戊丙酮 EBM 擠出吹塑模塑 EC 乙基纖維素 ECB 乙烯共聚物和瀝青的共混物 ECD 環氧氯丙烷橡膠 ECTEE 聚(乙烯-三氟氯乙烯) ED-3 環氧酯 EDC 二氯乙烷 EDTA 乙二胺四醋酸 EEA 乙烯-醋酸丙烯共聚物 EG 乙二醇 2-EH :異辛醇 EO 環氧乙烷 EOT 聚乙烯硫醚 EP 環氧樹脂 EPI 環氧氯丙烷 EPM 乙烯-丙烯共聚物 EPOR 三元乙丙橡膠 EPR 乙丙橡膠 EPS 可發性聚苯乙烯 EPSAN 乙烯-丙烯-苯乙烯-丙烯腈共聚物 EPT 乙烯丙烯三元共聚物 EPVC 乳液法聚氯乙烯 EU 聚醚型聚氨酯 EVA 乙烯-醋酸乙烯共聚物 EVE 乙烯基乙基醚 EXP 醋酸乙烯-乙烯-丙烯酸酯三元共聚乳液 F 英文縮寫 全稱 F/VAL 乙烯/乙烯醇共聚物 F-23 四氟乙烯-偏氯乙烯共聚物 F-30 三氟氯乙烯-乙烯共聚物 F-40 四氟氯乙烯-乙烯共聚物 FDY 丙綸全牽伸絲 FEP 全氟(乙烯-丙烯)共聚物 FNG 耐水硅膠 FPM 氟橡膠 FRA 纖維增強丙烯酸酯 FRC 阻燃粘膠纖維 FRP 纖維增強塑料 FRPA-101 玻璃纖維增強聚癸二酸癸胺(玻璃纖維增強尼龍1010樹脂) FRPA-610 玻璃纖維增強聚癸二醯乙二胺(玻璃纖維增強尼龍610樹脂) FWA 熒光增白劑 G 英文縮寫 全稱 GF 玻璃纖維 GFRP 玻璃纖維增強塑料 GFRTP 玻璃纖維增強熱塑性塑料促進劑 GOF 石英光纖 GPS 通用聚苯乙烯 GR-1 異丁橡膠 GR-N 丁腈橡膠 GR-S 丁苯橡膠 GRTP 玻璃纖維增強熱塑性塑料 GUV 紫外光固化硅橡膠塗料 GX 鄰二甲苯 GY 厭氧膠 H 英文縮寫 全稱 H 烏洛托品 HDI 六甲撐二異氰酸酯 HDPE 低壓聚乙烯(高密度) HEDP 1-羥基乙叉-1,1-二膦酸 HFP 六氟丙烯 HIPS 高抗沖聚苯乙烯 HLA 天然聚合物透明質膠 HLD 樹脂性氯丁膠 HM 高甲氧基果膠 HMC 高強度模塑料 HMF 非乾性密封膠 HOPP 均聚聚丙烯 HPC 羥丙基纖維素 HPMC 羥丙基甲基纖維素 HPMCP 羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯 HPT 六甲基磷酸三醯胺 HS 六苯乙烯 HTPS 高沖擊聚苯乙烯 I 英文縮寫 全稱 IEN 互貫網路彈性體 IHPN 互貫網路均聚物 IIR 異丁烯-異戊二烯橡膠 IO 離子聚合物 IPA 異丙醇 IPN 互貫網路聚合物 IR 異戊二烯橡膠 IVE 異丁基乙烯基醚 J 英文縮寫 全稱 JSF 聚乙烯醇縮醛膠 JZ 塑膠粘合劑 K 英文縮寫 全稱 K 烏洛托品 L 英文縮寫 全稱 LAS 十二烷基苯磺酸鈉 LCM 液態固化劑 LDJ 低毒膠粘劑 LDN 氯丁膠粘劑 LDPE 高壓聚乙烯(低密度) LDR 氯丁