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『肆』 FIREDEP是什麼意思

FIREDEP
=fire department

na.(=fire brigade)
消防局；消防隊；消防部門
例句篩選
1.
With a cellphone the men reached the Fire Department.
他們用手機聯繫上了消防部門。

2.
Keep a level head and phone the Fire Department.
保持冷靜，打電話給消防署。

『伍』 G.NA資料

G.NA|（최지나，崔智娜或崔志娜）
韓國CUBE Entertainment公司歌手、演員
1987年9月13日出生，代表作品包括歌曲《我會過得很好》、《Kiss me》、《loving you》、《supa solo》、《如果有戀人的話想做的事》等。

中文名： 崔智娜
外文名： 최지나
別名： 崔志娜
國籍： 韓國
出生日期： 1987年9月13日
職業： 歌手、演員
經紀公司： CUBE Entertainment
代表作品： 《我會過得很好》
名字：崔智娜
出生地：加拿大 五少女
身高/體重：169CM/50KG
星座：處女座
出道：2010年7月15日 (Mnet countdown 出道舞台)
練習時間：5年
曾經公司：GOOD Entertainment / JYP Entertainment
曾經組合：五少女 [UIE（After School）、楊智媛（T-ara一期成員，已退團）、金瑜斌（Wonder Girls）、全孝盛（Secret）
個人特色：甜美聲音、擁有完美S.line無修正名品身材 粉絲名稱：G. NI (genie)
粉絲名稱意義：要幫助G.NA完成她的夢想，請大家成立一個令人驚豔的歌迷俱樂部

G. NA 從業經歷

2005年，GNA參加GOOD Entertainment舉辦的battle shinhwa選秀，從而開始練習生活。
2007年，與楊智媛、UEE、金瑜斌和全孝盛五人，組成「五少女」組合，拍攝「MTV出道實錄」，但由於公司資金原因組合並沒有正式出道。
2008年，與金瑜斌一起轉到JYP Entertainment，在美國接受訓練准備出道。
2009年底，轉到CUBE Entertainment，重新回到韓國訓練，積極准備solo出道。
2010年1月，作為4minute泫雅《Change》的伴舞出現在音樂節目中。同月參加CUBE Entertainment的showcase，展現舞蹈實力。
2010年7月5日，推出數碼單曲《如果有戀人的話想做的事》，與Rain合唱，標志著GNA正式出道
2010年7月14日，發行迷你專輯《Draw G's First Breath (EP)》 2011年1月18日，發行正規一輯《Black & White》。

『陸』 求合金裝備3金手指。

http://www.yesky.com/136/1880136.shtml

.....

是金手指.......

『柒』 質粒抽提原理

實驗原理
提取質粒DNA的方法有很多種，從提取產量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為鹼裂解法、煮沸法、牙簽法等，各種不同的方法各有其優缺點，根據不同的實驗目的可以採用合適的提取方法。詳細內容請參考《分子克隆實驗指南》。另外，復旦大學生化與分子生物學實驗室一篇文章，提供了質粒提取機理的詳細解說。[1]

鹼裂解法

人們使用鹼與SDS裂解法從E. coli（大腸桿菌）中分離制備質粒DNA已有30多年的歷史。將細菌懸浮液暴露於高pH值的強陰離子洗滌劑中，會使細胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質變性，將質粒DNA釋放到上清中。

盡管鹼性溶劑使鹼基配對完全破壞，閉環的質粒DNA雙鏈仍不會彼此分離，這因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。只要OH-處理的強度和時間不要太過，當pH值恢復到中性時，DNA雙鏈就會再次形成。在裂解過程中，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體DNA會相互纏繞成大型復合物，後者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當用K+取代Na+時，復合物會從溶液中有效地沉澱下來，離心除去變性劑後，就可以從上清中回收復性的質粒DNA。

在SDS存在的條件下，鹼水解是一項非常靈活的技術，它對E. coli的所有菌株都適用，並且其細菌培養物的體積可以從1-500mL以上。

煮沸法

煮沸法是將細菌懸浮於含有Triton X-100和能消化細胞壁的溶菌酶的緩沖液中，然後加熱到100℃使其裂解。加熱除了破壞細菌外壁，還有助於解開DNA鏈的鹼基配對，並使蛋白質和染色體DNA變性。但是。閉環質粒DNA鏈彼此不會分離，這是因為它們的磷酸二酯骨架具有互相纏繞的拓撲結構。當溫度下降後，閉環DNA的鹼基又各就各位，形成超螺旋分子，離心除去變性的染色體DNA和蛋白質，就可從上清中回收質粒DNA。煮沸裂解法對於小於15kb的小質粒很有效，可用於提取步至lmL（小量制備），多至250mL（大量制備）菌液的質粒，並且對大多數的大腸桿菌菌株都適用。但對於那些經變性劑、溶菌酶及加熱處理後能釋放大量碳水化合物的大腸桿菌菌株，則不推薦使用該法。這是因為碳水化合物很難除去，會抑制限制酶和聚合酶活性。若碳水化合物的量很大，在CsCl-溴化乙錠梯度離心中會使超螺旋質粒DNA帶變得模糊不清。大腸桿菌菌株HBl01及其衍生菌株（其中包括TGl）能產生大量的碳水化合物，不適於用煮沸法裂解。

質粒小提試劑盒

用於大腸桿菌中質粒DNA的小量提取，它結合了優化的鹼裂解法，以及方便快捷的硅膜離心技術，具有高效，快捷的特點，能在30min內完成全部操作。利用試劑盒能從1-5mL過夜培養的大腸桿菌菌液中純化得到10-40μg高質量的質粒DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此質粒DNA可直接用於DNA序列分析，各種酶促反應，PCR以及部分細胞系的轉染等。

質粒抽提
質粒抽提

原理
其中用到三種溶液以及硅酸纖維膜（超濾柱）。 溶液Ⅰ：50 mM葡萄糖 / 25 mMTris-HCl/ 10 mMEDTA，pH 8.0；溶液Ⅱ：0.2 N NaOH / 1%SDS； 溶液Ⅲ：3 M 醋酸鉀/ 2 M 醋酸/75%酒精。

溶液Ⅰ

葡萄糖是使懸浮後的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部；EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，其主要目的是為了螯合二價金屬離子從而達到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA。

溶液Ⅱ

此步為鹼處理。其中NaOH主要是為了溶解細胞，釋放DNA，因為在強鹼性的情況下，細胞膜發生了從雙層膜結構向微囊結構的變化。SDS與NaOH聯用，其目的是為了增強NaOH的強鹼性，同時SDS作為陰離子表面活性劑破壞脂雙層膜。這一步要記住兩點：第一，時間不能過長，因為在這樣的鹼性條件下基因組DNA片斷也會慢慢斷裂；第二，必須溫柔混合，不然基因組DNA會斷裂。

溶液Ⅲ

溶液III的作用是沉澱蛋白和中和反應。其中醋酸鉀是為了使鉀離子置換SDS中的鈉離子而形成了PDS，因為十二烷基硫酸鈉（sodium dodecylsulfate）遇到鉀離子後變成了十二烷基硫酸鉀 （potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是不溶水的，同時一個SDS分子平均結合兩個氨基酸，鉀鈉離子置換所產生的大量沉澱自然就將絕大部分蛋白質沉澱了。2 M的醋酸是為了中和NaOH。基因組DNA一旦發生斷裂，只要是50－100 kb大小的片斷，就沒有辦法再被 PDS共沉澱了，所以鹼處理的時間要短，而且不得激烈振盪，不然最後得到的質粒上總會有大量的基因組DNA混入，瓊脂糖電泳可以觀察到一條濃濃的總DNA條帶。75%酒精主要是為了清洗鹽份和抑制Dnase；同時溶液III的強酸性也是為了使DNA更好地結合在硅酸纖維膜上

質粒抽提步驟
Ⅰ.使用質粒提取試劑盒提取質粒時請參考具體試劑盒的操作說明。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin（質粒提取盒）。

Ⅱ.鹼裂解手提法：此方法適用於小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用於酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：

1：接1%含質粒的大腸桿菌細胞於2mlLB培養基。

2：37℃振盪培養過夜。

3：取1.5ml菌體於Ep管(離心管)，以4000rpm離心3min，棄上清液。

4：加0.lml溶液I（1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0）充分混合。

5：加入0.2ml溶液II（0.2mM/LNaOH，1%SDS），輕輕翻轉混勻，置於冰浴5min.

6：加入0.15m1預冷溶液III（5mol/LKAc，pH4.8），輕輕翻轉混勻，置於冰浴5min.

7：以10，000rpm離心20min，取上清液於另一新Ep管

8：加入等體積的異戊醇，混勻後靜置10min.

9：以10，000rpm離心20min，棄上清。

10：用70%乙醇0.5ml洗滌一次，抽干所有液體。

11：待沉澱乾燥後，溶於50ulTE緩沖液中（或60℃溫育去離子水）

抽提竅門
1：加溶液II（裂解液）後，操作一定要溫和，劇烈混合會導致基因組DNA污染。

2：洗脫時60℃溫育（Ellution Buffer）洗脫緩沖液或去離子水效果更好。

3：若質粒提取含量低，可增加菌液樣或換用ArtMedia Plasmid Culture，其比LB培養基質粒得量高

4：菌體應徹底懸浮 ， 如果沒有徹底懸浮菌體，則殘留的菌體團塊在溶液 II 加入後，變成難以完全裂解的團塊。這個團塊在溶液 III 加入後，會有一部分蛋白質繼續存在於溶液中，成為蛋白質殘留的最大根源。

5：加入溶液 II 後，混勻，體系最好能立即變得清澈。體系如果變得清澈了，馬上加入溶液 III 中和。

6：中和的操作 ，在 1.5ml 離心管中加入溶液 III 後，先顛倒兩次，使管底朝上，用指頭彈擊管底數次，再顛倒混勻。效果非常好。

注意事項
降低RNA殘留的方法

RNA 的去除，首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高濃度的 RNase A (100ug/ml)，或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的質粒，都可以降低 RNA 殘留，但都不能徹底去除。幸運的是，RNA 的殘留並不影響酶切等最常用的用途。如果想徹底去除 RNA 殘留，可以用試劑盒，或者使用對 4 個鹼基都作用的 RNase。

降低gDNA殘留的方法

gDNA 的殘留問題，必須在抽提過程中解決，否則，就只能用膠回收方法處理了。gDNA 越大，越難於復性，也就越容易被去除；所以，一定要盡可能不打斷 gDNA。裂解體系越粘稠，gDNA 越容易被扯斷；操作手法越重，gDNA 也越容易被打斷。溫和操作，使用相對過剩的試劑，是降低 gDNA 殘留的最好方法。

降低蛋白質殘留的方法

蛋白質的去除，主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白質復合物的形成。雖然將中和後的體系置於 4C 一段時間，可以形成更多的該不溶復合物，從而使蛋白質殘留更少，但實踐證明這樣做並不是必須的，除非是大量抽提。只要加入溶液 I 後的懸浮，加入溶液 II 後的裂解及加入溶液 III 後的中和是均勻徹底的，蛋白質的殘留就應該在可以滿足實驗要求的水平；而只有溶液的用量足夠，甚至過剩，才能確保裂解和中和是徹底的。當然，試劑盒及苯酚的使用，是可以更進一步降低蛋白質的殘留的。

降低質粒Nick的方法

細菌收獲時間，菌株的選擇，抽提操作的劇烈程度是影響 Nick 的三個主要因素。細菌收獲過早，質粒還在復制過程中，Nick 的比例較高；過晚，細菌開始死亡，雜質會比較多。如果使用胞內酶含量很高的宿主菌，會出現較高比例的 Nick。加入溶液 II 及加入溶液 III 的混勻操作，也可以導致一些 Nick，但影響不會比前兩者大。

降低變性超螺旋的方法

理論上，用鹼裂解法抽提質粒，變性超螺旋的出現是不可避免的。之所以大家沒有非常在意，一是因為它的存在似乎對酶反應沒有任何影響，二是因為它的含量並不一定高到被用電泳觀察到。抽提使用相對過剩的溶液，在加入溶液 II 後，體系能在 1 分鍾內變澄清，再快速加入溶液 III，這樣基本上能將變性超螺旋的出現控制在電泳看不見的水平。 (變性超螺旋電泳時比正常超螺旋跑得快一點點。)

關於質粒多聚體

QIAGEN 提供了一個沒有進一步解釋的觀察：從有些宿主菌中抽提質粒 (pTZ19)，電泳能發現很多條帶；但使用單酶切後，仍然變成一條帶，大小正好是線性單質粒的大小。根據這一觀察，可以推理如下：那些大的條帶(質粒多聚體)是由完整的單質粒「粘」在一起形成的，而不是我的一條鏈與你的一條鏈復性在一起；第二，這種「粘」只是部分的，否則酶切會有問題；第三，這種「粘」是脆弱的，線性後的剛性足以打破它。如果是這樣，質粒多聚體的出現與質粒的結構及序列有關，可以不管它(也管不了)，因為它不影響酶切，或者說，即使質粒多聚體切不動，也不會影響太大。總之，碰到這種情況，不要簡單地認為有問題，而是應該一步一步往下做，但一定要做完一步，檢測一次，看一看結果與預期的吻合程度。

提高得率的方法

利用氯黴素抑制染色體的復制，而不抑制質粒的復制這一特點，在低拷貝質粒（如pUC19）的培養過程中添加氯黴素可以大大提高得率。

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『玖』 翻譯死神的EP:LIFE LIKE A BOAT

Nobody knows who I really am
I never felt this empty before
And if I ever need someone to come along
Who's gonna comfort me, and keep me strong

We are all rowing the boat of fate
The waves keep on comin' and we can't escape
But if we ever get lost on our way
The waves would guide you thru another day

遠くで息をしてる 透明になったみたい
暗暗に思えたけど 目隠しされてただけ

祈りをささげて 新しい日を待つ
鮮やかに 光る海 その果てまで

Nobody knows who I really am
Maybe they just don't give a damn
But if I ever need someone to come along
I know you would follow me, and keep me strong

人の心はうつりゆく 抜け出したくなる
つきはまた新しい周期で 胸を連れてく

And every time I see your face,
the oceans leap up to my heart
You make me wanna strain at the oars,
and soon I can't see the shore

Oh I can't see the shore..
When will I see the shore?

I want you to know who I really am
I never though I'd feel this way towards you
And if you ever need someone to come along
I will follow you, and keep you strong

旅はまた続いてく 穏やかな日も
つきはまた新しい周期で 胸を照らし出す

祈りをささげて 新しい日を待つ
鮮やかに 光る海 その果てまで

And every time I see your face,
the oceans leap up to my hert
You make me wanna strain at the oars,
and soon I can see the shore

運命の舟を漕ぎ 波は次から次へと私たちを襲うけど
それも素敵な旅ね どれも素敵な旅ね

=========================================================

Nobody knows who I really am
I never felt this empty before
And if I ever need someone to come along
Who』s gonna comfort me and keep me strong?

We are all rowing the boat of fate
The waves keep on coming and we can』t escape
But if we ever get lost on our way
The waves will guide you through another day

Tooku de iki o shiteru
Toome ni natta mitai
Kurayami ni omoeta kedo
Mekaku shisareteta dake

Inori o sasagete
Atarashii hi o matsu
Asayaka ni hikaru umi
Sono hate made e

Nobody knows who I really am
Maybe they just don』t give a damn
But if I ever need someone to come along
I know you will follow me and keep me strong

Hito no kokoro wa utsuri yuku
Mukedashitaku naru
Tsuki wa mata atarashii shuuki de
Fune o tsureteku

And every time I see your face
The oceans heave up to my heart

You make me wanna strain at the oars
And soon I can see the shore

Ah, I can see the shore?
When will I see the shore?

I want you to know who I really am
I never thought I』d feel this way towards you
And if you ever need someone to come along
I will follow you and keep you strong

Tabi wa mada tsuzuiteku
Odayaka na hi mo
Tsuki wa mata atarashii shuuki de
Fune o terashiasu

Inori o sasagete
Atarashii hi o matsu
Asayaka ni hikaru umi
Sono hate made

And every time I see your face
The oceans heave up to my heart
You make me wanna strain at the oars
And soon I can see the shore

Unmei no mune o kogi
Nami wa tsugi kara tsugi e to
Watashitachi o osou kedo
Sore mo suteki na tabi ne
Dore mo suteki na tabi ne

感謝潔囈~` 提供中文翻譯

沒有人知道我是什麼模樣
我以前從為感到如此空盪
如果我需要有人來陪伴
誰會安慰我並讓我更加堅強

我們都在命運之湖上盪舟劃槳
波浪起伏著而我們無法逃脫孤航
但是假使我們迷失了方向
波浪將指引我們穿越另一天的曙光

在遙遠的地方呼吸著 彷彿變成透明一般
還以為是周遭的黑暗 卻只是被蒙住了雙眼

虔誠地祈禱著 期待新的一天到來
直到那閃耀著亮麗光芒的大海邊際

沒有知道我究竟是什麼模樣
或許他們並不會指責我有些荒唐
如果我需要有人來陪伴
誰會安慰我並讓我更加堅強

想從不斷變遷的人心中掙脫
又一輪陰晴圓缺的月亮 牽引著我向前

想從不斷變遷的人心中掙脫
又一輪陰情圓缺的月亮 牽引著我向前

每一次我看到你的臉龐
海洋奮力托起我的心臟
你令我在盪槳時感到緊張
轉眼間我已經看到岸的彼方

啊，我能看到岸的彼方？
當我壞著這種強烈的渴望？

我希望你能知道我真正的模樣
我從未想過我將要追尋你遠去的地方
如果我需要有人來陪伴
我將追隨你並讓我更加堅強

就算平淡安穩的日子裡 旅行也依然持續
又一輪陰情圓缺的月亮 照亮了我的身影

虔誠地祈禱著 期待新的一天到來
直到那閃耀著亮麗光芒的大海邊際

盪起命運的小舟
雖然海浪一波一波地襲來
這次仍然是美好而奇妙的旅行
每次都是美好而奇妙的旅行

『拾』 吸血鬼騎士 OP EP

第一季OP
曲名：ふたつの鼓動と赤い罪
アーティスト：ON／OFF
akaku akaku akaku yurete
yume no yume no hate e
mou nandomo akirametewa oshikorosu tabi
yukiba no nai kanjyou ga me wo samashiteku
kegare no nai sono hohoemi zankoku na hodo
tooi sonzai da to wakaru yo
kienai kizu kokoro mushibamu dake nanoni
yami no naka ni ima mo yadoru
omoi wo osaekirenai
akaku akaku akaku yurete
yume no yume no hate e
deatte shimatta unmei ga mawaridasu
dare mo dare mo shiranai himitsu
ochite ochite ochite mou modorenai
tsumi wo kizandemo kitto
赤く赤く赤く揺れて
夢の夢の果てへ
離れられない
もう何度も諦めては押し殺すたび
行き場のない感情が目を覚ましてく
汚れのないその微笑み殘酷なほど
遠い存在だとわかるよ
愈えない傷 心蝕むだけなのに
暗の(中に)今も(宿る)想いを抑え切れない
赤く赤く赤く揺れて
夢の夢の果てへ
出逢ってしまった運命が廻り出す
誰も誰も知らない秘密
墮ちて墮ちて墮ちて
もう戻れない 罪を刻んでも きっと
孤獨の淵歩きながら救われていた
どんな時も変わらないリアルな瞳
でも光が眩しいほど生まれる影は
深く色濃く忍び寄るよ
ふたつの鼓動 まるで合わせ鏡のように
似てる(けれど)違う(痛み)無限に続いていく
赤く赤く赤く燃えて
すべてすべて消して
葉うことのない幻が動き出す
強く強く儚い夜を
超えて超えて超えて
逃れられない 罪に溺れても きっと
赤く赤く赤く揺れて
夢の夢の果てへ
出逢ってしまった運命が廻り出す
誰も誰も知らない秘密
墮ちて墮ちて墮ちて
もう戻れない 罪を刻んでも きっと
おわり
血紅，血紅，血紅搖晃地，
走向幻想夢境的盡頭。
已經放棄了無數次，
每次壓抑著自己，
無處可去的感情慢慢覺醒。
看見那微笑，純潔無邪，又是如此殘酷，
遠遠的，感到它的存在。
雖然無法癒合的傷口，侵蝕著內心，
黑暗中，如今還潛藏著無法抑制的思念。
血紅，血紅，血紅搖晃地，
走向幻想夢境的盡頭。
我們邂逅了，命運之輪開始旋轉，
誰也不知曉的秘密，
不斷陷落，陷落，陷落。
就算刻上無法抹去的罪過，也一定無怨無悔。

第一季ED
曲名：Still Doll
歌：分島花音
曲; mana SAMA(佐藤學-moi dix mois的吉他手+隊長)
Hi Miss Alice.
あなた 硝子(ガラス)の眼(め)で どんな夢(ゆめ)を
見(み)られるの？
魅(み)入(い)られるの？
またあたし
こころが裂(さ)けて
流(なが)れ出(で)る
繕(つくろ)った
隙間(すきま)に刺(さ)さる
記憶(きおく)たち
Hi Miss Alice.
あなた 果実(かじつ)の口(くち)で
誰(だれ)に愛(あい)を
投(な)げているの？
嘆(なげ)いているの？
もうあたし
言葉(ことば)を紡(つむ)ぐ
舌(した)の熱(ねつ)
冷(さ)め切(き)って
愛(め)でるお歌(うた)も
歌(うた)えない
still you do not answer
原文中文翻譯：
Hi Miss Alice
你那玻璃的雙瞳究竟會看見怎樣的夢境呢？
怎樣的夢境呢？
再次，我的心裂痕延展、鮮血四溢
從那修補的縫隙間刺入記憶的利刃
Hi Miss Alice
你那果實般甜美的朱唇又在為誰詠嘆愛語呢？
為誰詠嘆呢？
已然，我那編織妙語的炙熱唇舌
早已冰冷得連心愛的樂章也無法吟唱出口
Still, You Do Not Answer
羅馬拼音：
Hi miss Alice
a na ta ga ra su no me de
do n na yu me o
mi ra re ru no
mi ra re ru no
ma da a ta shi
ko ko ro ga sa ke te
na ga re de ru
tsu ku ro o ta
su ki ma ni sa sa ru
ki o ku ta chi
Hi miss Alice
a na ta ka ji tsu no gu chi de
da re ni a i o
na ge i te ru no
na ge i te ru no
mo u a ta shi
ko to ba o tsu mu gu
shi ta no ne tsu
sa me ki i te
me de ru o u ta mo
u ta e na i
Still, you do not answer