全氮蒸餾不是藍色

A. 做魚粉揮發性鹽基氮蒸餾時蒸不幹凈

揮發性鹽基氮（VBN）的測定方法 一、 適用范圍 本方法適用於動物性原料新鮮度的檢測。 二、原理 揮發性鹽基氮是指動物性食品由於酶和細菌的作用，在腐敗過程中，使蛋白質分解而產生氨以及胺類等鹼性含氮物質。此類物質具有揮發性，在鹼性溶液中蒸出後，用標准酸溶液滴定計算含量。 三、試劑 1、氧化鎂混懸液（10 g/L）：稱取1.0 g氧化鎂，加100 ml蒸餾水，振搖成混懸液。 2、硼酸溶液（20 g/L）：稱取20g硼酸，加1000ml蒸餾水，溶解（可加熱）。 3、鹽酸[c（HCl）＝0.020 mol/L]的標准溶液：1000ml容量瓶中先加200ml蒸餾水，再加1.67ml濃鹽酸，搖勻定容至刻度，並標定。 4、混合指示劑：甲基紅0.025 g/25mL乙醇溶液；溴甲酚綠0.125 g/25mL乙醇溶液。兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期一個月。 5、硼酸吸收液：按1000ml濃度為20g/L的硼酸溶液，加入3ml的混合指示劑的比例混合，現用現配。 四、儀器 半微量定氮儀。 微量滴定管：最小分度0.02 ml。 五、分析步驟 試樣處理：精確稱取試樣（魚粉、肉粉、肉骨粉、羽毛粉稱5克；血球粉、血漿粉稱0.5克）左右，置於250ml具塞錐形瓶中，加100 ml水，（用振盪器或磁力攪拌器或人工）振搖30分鍾至混勻， 然後靜置浸漬30 min後過濾，如不馬上蒸餾將濾液放置冰箱備用。 蒸餾滴定：將盛有20 ml硼酸吸收液（20 g/L）的錐形瓶置於冷凝管的下端，並使其下端插入吸收液的液面下，准確吸取10.0 ml上述試樣濾液於蒸餾儀反應室內，加少量水沖洗加樣處，再加10 ml氧化鎂混懸液(10 g/L)，迅速加塞，並加水封口以防漏氣，通入蒸汽，進行蒸餾，蒸餾吸收液接收到75ml時，將冷凝管的末端離開液面，繼續蒸餾至吸收液為100ml時，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，停止蒸餾，吸收液用鹽酸標准溶液（0.020 mol/L）滴定，終點至灰紅色。同時做試劑空白試驗。 六、計算結果 試樣中揮發性鹽基氮的含量按式⑴進行計算。 X=(v-v0)*c*14/(m*10/100)*100 式中：X——試樣中揮發性鹽基氮的含量，單位為毫克每百克（mg/100g） V——測定用樣液消耗鹽酸標准溶液體積，單位為毫升（ml） V0——試劑空白消耗鹽酸標准溶液體積，單位為毫升（ml） C——鹽酸或硫酸標准溶液的實際濃度，單位為摩爾每升（mol/L） 14——與1.00ml鹽酸標准滴定溶液[c（HCI）＝1.000 mol/L]標准滴定溶液相當的氮的質量，單位為毫克（mg） M——試樣質量，單位為克（g） 計算結果保留至小數點後第二位。 七、精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

B. 凱氏定氮法，為什麼蒸餾時，液體變成藍綠色透明後，還要繼續加熱

一、實驗原理
蛋白質是含氮的有機化合物。蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液 滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，蛋白質含量。含氮量*6.25=蛋白含量
1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4

凱氏定氮法
凱氏定氮法反應式為：
2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與鹼作用，通過蒸餾釋放出NH3 ，收集於H3BO3 溶液中反應式為:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O

3. 用已知濃度的H2SO4（或HCI）標准溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量，然後乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量

反應式為：

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

二、操作
1、 樣品處理：精密稱取0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當氮30-40mg），移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻後於瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支於有小孔的石棉網上，小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫完全停止後，加強火力，並保持瓶內液體微沸，至液體呈藍綠色澄清透明後，再繼續加熱0.5小時。取下放冷，小心加20ml水，放冷後，移入100ml容量瓶中，並用少量水洗定氮瓶，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗。但是此法比較危險，不易在實驗室演示，現在大多數實驗室有消煮儀一次可以進行多個（一次可以消煮16個樣品）樣品處理，並有通風櫥進行通風，溫度可以自己設定，更加安全和可操作性，因此逐步成為主要的凱氏定氮法的首選處理方法。
一般消解溫度都設在240度及240度以上，如果想快速消解可以適當提高溫度甚至可以用最大溫度進行消解。
2、按圖裝好定氮裝置，於水蒸氣發生器內裝水約2/3處加甲基紅 指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，用調壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
3、向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示劑1滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應室，並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應室，不能立即將玻璃蓋塞緊，這樣易使玻璃塞粘在進樣口，應先用蒸餾水沖洗然後再蓋，並加水於小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾5min。移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N鹽酸標准溶液定至灰色或藍紫色為終點。
同時吸取10.0ml試劑空白消化液按3操作。

三、計算
X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100%
X：樣品中蛋白質的百分含量，g；
V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標准液的體積，ml；
V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標准溶液的體積，ml；
N：硫酸或鹽酸標准溶液的當量濃度；
0.014：1N硫酸或鹽酸標准溶液1ml相當於氮克數；
m：樣品的質量（體積），g（ml）；
F：氮換算為蛋白質的系數 。蛋白質中的氮含量一般為15～17.6%，按16%計算乘以6.25即為蛋白質，乳製品為6.38，麵粉為5.70，玉米、高粱為6.24，花生為5.46，米為5.95，大豆及其製品為5.71，肉與肉製品為6.25，大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83，芝麻、向日葵為 5.30。

C. 用鄰二氮菲測定鐵的反應為何用參比溶液而不是蒸餾水

因為 試劑本身有很大吸收，會有干擾，作空白就是要去掉這部分吸收值，所以用試劑空白 用 參比溶液 測定更精確

D. 凱氏定氮法在蒸餾時為什麼吸收液一直未變成藍綠色

溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色、藍綠色。沒變色說明吸收液版中氨的量不夠，有可能的原因權:蒸餾時加入的NaOH量不夠；漏斗下端未保持液封，有氨逸出；微量凱氏定氮蒸餾裝置的密封性不好；消化時加入的硫酸鉀過多，使消化體系溫度過高，引起已生成的銨鹽發生熱分解而造成氨損失。

E. 有誰知道凱氏定氮的具體步驟，注意事項，！！

1、消化:精密稱取大豆樣品1.0g左右，放入乾燥的250 ml消化管中，加入0.4g CuSO4 7g K2SO4 10ml H2SO4先200'C炭化，待泡沫停止後提高溫度到450'C，加熱至液體沸騰，待瓶內液體呈藍綠色透明後，再繼續加熱0.5h。

冷卻後加入20ml水，移入100ml容量瓶中，用少量水洗滌消化管2~3次，洗液合並於容量瓶中定容。

2、蒸餾:連接凱氏定氮裝置，於水蒸氣發生瓶內裝水至2/3處，加甲基紅指示劑數滴及數ml硫酸，保持水呈酸性。加入數粒玻璃珠以防暴沸，調節火力加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。

3、向吸收瓶內加入20g/L硼酸溶液20ml及混合指示劑2滴，並使冷凝管下端插入液面以下，吸取10ml樣品消化稀釋液由進樣口進入反應室，並以10ml水洗滌進樣口使其流入反應室內，將400g/L NaOH溶液10ml倒入進樣口，立即夾緊螺旋夾，並加入少量蒸餾水，密封進樣口。

當蒸汽通入反應室時，准確計時，反應產生的氨氣通過冷凝管進入吸收瓶，蒸餾5min，移動吸收瓶，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾Imin，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部，取下吸收瓶。

停止加熱，使反應室內的液體進入汽水分離器，打開進樣口的螺旋夾，將汽水分離器的液體放出。再向反應室內加入蒸餾水，夾緊螺旋夾，再次進行加熱至水蒸汽放出，停止加熱，使反應室內的水進入汽水分離器，進行洗滌。

4、滴定:用0.025mol/L硫酸標准溶液滴定吸收液至灰色。

5、計算:X= 2cVX 14X5.71/m

X為樣品中蛋白質的含量，%；c為硫酸標准溶液的濃度，molL；V為樣品消化液消耗硫酸標准溶液的體積，ml；m為樣品的質量，g。

注意事項

(1) 樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

(2) 樣品放入定氮瓶內時，不要沾附頸上。萬-沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結果偏低。

(3) 消化時如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷後，慢慢加入30%過氧化氫(H2O2)2-3ml，促使氧化。

(4) 在整個消化過程中，不要用強火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

(5)如硫酸缺少， 過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量。

(6)加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作鹼性反應的指示劑。

(7)混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

(8) 氨是否完全蒸餾出來，可用PH試紙試餾出液是否為鹼性。

(5)全氮蒸餾不是藍色擴展閱讀：

凱氏定氮法原理

凱氏定氮法首先將含氮有機物與濃硫酸共熱，經一系列的分解、碳化和氧化還原反應等復雜過程，最後有機氮轉變為無機氮硫酸銨，這一過程 稱為有機物的消化。

為了加速和完全有機物質的分解，縮短消化時間，在消化時通常加入硫酸鉀、硫酸銅、氧化汞、過氧化氫等試劑，加入硫酸鉀可以提高消化液的沸點而加快有機物分解，除硫酸鉀外，也可以加入硫酸鈉、氯化鉀等鹽類類提高沸點，但效果不如硫酸鉀。

硫酸銅起催化劑的作用。凱氏定氮法中可用的催化劑種類很多，除硫酸銅外，還有氧化汞、汞、硒粉、鉬酸鈉等，但考慮到效果、價格及環境污染等多種因素，應用最廣泛的是硫酸銅。

F. 請問定氮儀 蒸餾一會就不蒸餾了 是怎麼回事啊

定氮儀保險絲燒了，或者鍋爐加熱管損壞等。

G. 凱氏定氮法在蒸餾時為什麼吸收液一直未變成藍綠色

溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑在鹼性百溶液中呈綠色、藍綠色。沒變色說明吸收液中氨的量不夠，有可能的原因:蒸餾時加入的度NaOH量不夠；漏斗下端未保持液封，有氨逸出；微量凱氏定氮版蒸餾裝置的密封性不好；消化時加入的硫酸鉀過多，使消化體系溫度過高，引起已生成的權銨鹽發生熱分解而造成氨損失。

H. 在氨氮的測定 蒸餾-中和滴定法中溴百里酚藍指示劑的作用是什麼，可以不加嗎

加溴百里酚藍指示劑是為了調節樣品的PH值（在6.0-7.4之間），加輕質氧化鎂使樣品蒸餾時呈微鹼性。

I. 用凱氏定氮儀蒸餾測蛋白時，加入鹼之後為什麼不變黑而是變成深藍色求解！急需！

那是你加入的加速劑的和鹼反應生成的沉澱的，是正常的

J. 不含氮的蒸餾水

A、水本身就是化學物質，因此不能說飲料不含任何化學物質，故A錯誤；
B、水本身可以電離出氫離子和氫氧根離子，故B錯誤；
C、NP不是微量元素，是常量元素，故C錯誤；
D、水是一切生命之源，沒有水就沒有生命，故D正確，
故選D．