⑴ 如何保护色谱柱延长使用寿命
一、流动相的PH应在使用的范围内
Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10,由于填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,使用寿命变短。由于流动相的PH 控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难是色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒
样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵住不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰型拖尾、变宽,从而使柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析样品前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器
样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大 比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
如果去人色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的,科选择一下方式进行补救:
1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min。
2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器,然后反向使用。
四、正确使用缓冲盐
缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下:
1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min;使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。
2、梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min,再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
注意:过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,区别只是过渡流动相不含缓冲盐。
3、缓冲盐析出的补救方法:
1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
五、防止强保留物质在色谱柱上存留
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰型变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多药品特别是复杂样品而言,很难判断其是否是含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱。
清洗方法:
1、未使用缓冲盐:每天分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min。
2、使用过缓冲盐:分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min
3、补救方法:
水——乙氰——氯仿(或异丙醇)——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min。
⑵ 请问一般实验室通常备用哪三种色谱柱,基本上能应付日常分析需要
对于气相色谱而言,如下三种色谱柱基本能满足日常分析要求:内
1、弱极性容:SE-54
2、中极性:OV-1701
3、极性:PGE-20M
“色谱世界”网站有这三种色谱柱及类似色谱柱的介绍,资料比较翔实可靠。建议你去看看对你有较大帮助的。
⑶ 【求助】求助:正向色谱柱流动相能用水吗
whyusa(站内联系TA)正向色谱柱流动相绝对不能用水!
水提样品用反相就可以了。abing312(站内联系TA)正向色谱柱流动相要选择非极性溶剂,水是极性很强的,不行hongqianqian(站内联系TA)正相色谱柱沾水就废了...星海慧儿(站内联系TA)不能。正相走的是极性小的流动相,水的极性很大,不适用。清明2008(站内联系TA)使用正相、反相均可分析的色谱柱,类型很多,选择氨基柱或氰基柱吧。不要使用单纯的正相柱,千万不要!白巧克力(站内联系TA)如果极性稍微大一点的话,可以尝试用用氨基柱或者苯基柱zhaolu850813(站内联系TA)石油醚----乙乙---甲醇金银花(站内联系TA)不能用水吧韩柳(站内联系TA)正相色谱柱固定相一般用强极性溶剂,如水,缓冲溶液。流动相用氯仿,乙酸乙酯,丁醇等若极性溶剂。反相色谱固定相用石蜡油,流动相用水或甲醇等强极性溶剂。:)
⑷ 请问HPLC是做什么的原理操作方法
HPLC是高效液相色谱,英文全称是High Performance Liquid Chromatography。该方法在化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中被用来做重要的分离分析技术。
用途:高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质,因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂,抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。
原理:高效液相色谱以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析和分离。
操作方法:如下图所示,溶剂贮器中的流动相被泵吸入,经梯度控制器按一定的梯度进行混合然后输出,经测其压力和流量,导入进样阀(器)经保护柱、分离柱后到检测器检测,由数据处理设备处理数据或记录仪记录色谱图,馏分收集器收集馏分,废液瓶收集废液。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
HPLC根据固定相和流动相的成分分为正相色谱和反向色谱。
正相色谱法
采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等)。
反相色谱法
一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛,据统计,它占整个HPLC应用的80%左右。
⑸ 苯基键合硅胶色谱柱柱为什么不能用纯水冲洗
这个问题比较难回答。因为注意的东西比较多,比如:
首先是色谱柱的方向问题。大多数色谱柱会标明方向。这个傻子都知道,安装的时候要顺着方向安装。不过也有一些色谱柱没有方向,这些是双相填料的色谱柱。第一次使用时的方向就是它的方向。不过所有的色谱柱都是,一旦开始使用,就不要转换方向。这样会损毁色谱柱。
第二个是柱压问题。一般的色谱柱压力最好不要超过20MPa,压力过高会加速损毁色谱柱。
第三,柱温。色谱柱温度最好不要超过45℃。也是会加速损毁色谱柱。
还有pH值。色谱柱的pH值范围是不同的。大多数色谱柱的pH值范围是4-7左右。有些偏向酸性,有些偏向碱性的,还有一些pH值广泛的。这些按照说明书操作即可。
除此之外,色谱柱还有别的一些需要注意的事情。
首先,键合硅胶色谱柱分成几种。比如C18、C8、苯基柱这些的使用方法都差不多。是反相色谱柱。它们的流动相中还有大量的水,还有无机盐。这个时候需要注意,无机盐是不能够长时间留在色谱柱里面的。色谱柱最好保存在纯甲醇或者纯乙腈里面。但是无机盐不能溶于纯甲醇或者纯乙腈。所以中间要过渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色谱柱比较特殊,比如氨基柱、氰基柱。他们是可以用于正相,也可以用于反相。所以使用的时候注意区分。配置流动相的时候也避免使用大量的水相。
其他的暂时想不到。或者说你想问的问题可以提出来,大家讨论讨论。
⑹ 纯水是否能通过高效液相色谱柱
看是什么柱子,有一些做糖的柱子就是要求纯水做流动相的。但一般的C8或C18柱子不行,要求最少5%有机相,以防对色谱柱伤害
⑺ 苯基键合硅胶色谱柱柱为什么不能用纯水冲洗
这个问题比较难回答。因为注意的东西比较多,比如:
首先是色谱柱的方向问题。大多数色谱柱会标明方向。这个傻子都知道,安装的时候要顺着方向安装。不过也有一些色谱柱没有方向,这些是双相填料的色谱柱。第一次使用时的方向就是它的方向。不过所有的色谱柱都是,一旦开始使用,就不要转换方向。这样会损毁色谱柱。
第二个是柱压问题。一般的色谱柱压力最好不要超过20MPa,压力过高会加速损毁色谱柱。
第三,柱温。色谱柱温度最好不要超过45℃。也是会加速损毁色谱柱。
还有pH值。色谱柱的pH值范围是不同的。大多数色谱柱的pH值范围是4-7左右。有些偏向酸性,有些偏向碱性的,还有一些pH值广泛的。这些按照说明书操作即可。
除此之外,色谱柱还有别的一些需要注意的事情。
首先,键合硅胶色谱柱分成几种。比如C18、C8、苯基柱这些的使用方法都差不多。是反相色谱柱。它们的流动相中还有大量的水,还有无机盐。这个时候需要注意,无机盐是不能够长时间留在色谱柱里面的。色谱柱最好保存在纯甲醇或者纯乙腈里面。但是无机盐不能溶于纯甲醇或者纯乙腈。所以中间要过渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色谱柱比较特殊,比如氨基柱、氰基柱。他们是可以用于正相,也可以用于反相。所以使用的时候注意区分。配置流动相的时候也避免使用大量的水相。
其他的暂时想不到。或者说你想问的问题可以提出来,大家讨论讨论。