❶ DEAE纤维素柱子为什么胶总是不贴壁
DEAE-纤维素 DEAE cellulose
DEAE-纤维素 DEAE cellulose 为二乙氨乙基纤维素。是阴离子交换纤维素之一。
DEAE—纤维素的活化：称取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏水浸泡过夜，观察溶胀后DEAE的体积。根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量，称取所需DEAE用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。抽干，改用0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用无离子水漂洗，使pH至8左右（用pH试纸检查）。再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用无离子水洗至pH6左右。本实验中在用前应以0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液，浸泡平衡后使用。
用过的离子交换剂可以反复使用，使其恢复原状的方法俗称“再生”。再生并非每次用酸、碱反复处理，通常只要“转型”处理即可。所谓转型就是使交换剂带上所希望的某种离子，如希望阳离子交换剂带上NH+4则可用NH4OH浸泡，如希望阴离子交换剂带上Cl—则用NaCl溶液处理。本实验中DEAE—纤维素在酸碱处理后，用0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲溶液浸泡即可转型，以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由于DEAE—纤维素使用后因带有大量杂蛋白，所以再生时，先用0.5ml/L NaOH浸洗，用无离子洗至pH8左右，再转型，即可再使用。
❷ DEAE－32与DEAE－52有何区别
两者均为弱阴离子交换类型，DE52为预溶涨细颗粒DEAE-纤维素。DE32（干燥细颗粒DEAE-纤维素）功能如同DE52，但需预处理。
❸ 多糖的纯化方法与哪些
多糖纯化：
a、分部沉淀法：根据各种多糖在不同浓度的低级醇或丙酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，经反复溶解与沉淀后，直到测得的物理常数恒定（最常用的是比旋光度测定或电泳检查）。这种方法适合于分离各种溶解度相差较大的多糖。为了多糖的稳定，常在pH7进行，唯酸性多糖在pH7时－COOH是以－COO` 离子形式存在的，需在pH2－4进行分离，为了防止苷键水解，操作宜迅速。此外也可将多糖制成各种衍生物如甲醚化物、乙酰化物等，然后将多糖衍生物溶于醇中，最后加入乙醚等极性更小的溶剂进行分级沉淀分离。
b、盐析法：在天然产物的水提液中，加入无机盐，使其达到一定浓度或饱和，促使有效成分在水中溶解度降低沉淀析出，与其它水溶性较大的杂质分离。常做盐析的无机盐的有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
c、季铵盐沉淀法：季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于酸性多糖的分离。通常季胺盐及其氢氧化物并不与中性多糖产生沉淀，但当溶液的PH增高或加入硼砂缓冲液使糖的酸度增高时，也会与中性多糖形成沉淀。常用的季铵盐有十六烷基三甲胺的溴化物（CTAB）及其氢氧化物（cetyl trimethyl ammonium hydroxide，CTA－OH）和十六烷基吡啶（cetylpyridinm hydroride，CP－OH）。CTAB或CP－OH的浓度一般为1％－10％（W/V）的多糖溶液中，酸性多糖可从中性多糖中沉淀出来，所以控制季铵盐的浓度也能分离各种不同的酸性多糖。值得注意的是酸性多糖混合物溶液的PH要小于9，而且不能有硼砂存在，否则中性多糖将会被沉淀出来
d、柱层析：
纤维素柱层析：纤维素柱层析对多糖的分离既有吸附色谱的性质，又具有分配色谱的性质，所用的洗脱剂是水和不同浓度乙醇的水溶液，流出柱的先后顺序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最后出柱，与分级沉淀法正好相反。
纤维素阴离子交换柱层析：最常见的交换剂为DEAE－纤维素（硼酸型或碱型），洗脱剂可用不同浓度的碱溶液、硼砂溶液、盐溶液等。此方法目前最为常用。它一方面可纯化多糖，另一方面还适于分离各种酸性多糖、中性多糖和粘多糖。
凝胶柱层析：凝胶柱层析可将多糖按分子大小和形状不同分离开来，常用的凝胶有葡聚糖凝胶（sephadex G）、琼脂糖凝胶（sepharose bio－gel A）、聚丙烯酰胺凝胶（bio－gel P）等，常用的洗脱剂是各种浓度的盐溶液及缓冲液，但它们的离子强度最好不低于0.02。出柱的顺序是大分子的先出柱，小分子的后出柱。由于糖分子与凝胶间的相互作用，洗脱液的体积与蛋白质的分离有很大的差别。在多糖分离时，通常是用孔隙小的凝胶如sephadex G－25、G－50等先脱去多糖中的无机盐及小分子化合物，然后再用孔隙大的凝胶sephadex G－200等进行分离。凝胶柱层析法不适合于粘多糖的分离。
❹ 离子交换柱层析原理是什么
离子在离子交换柱上的移动速度受其半径和电荷的影响，这决定了它们在柱内的行为。具体来说，离子的大小和电荷的强度决定了它们与固定相的结合力和解离速度。较大的离子或电荷较高的离子通常与固定相的结合力更强，移动速度较慢；相反，较小的离子或电荷较低的离子结合力较弱，移动速度较快。
离子交换柱层析利用的是离子间的这种差异，通过特定的固定相和流动相的选择，可以有效地分离混合物中的不同离子。固定相通常由带有特定电荷的树脂或纤维素组成，能够与流动相中的离子发生可逆性的结合。当混合物通过柱子时，不同离子与固定相的结合力不同，从而导致它们在柱内的移动速度不同。
为了提高分离效果，实验人员可以调整流动相的pH值或离子强度，以改变离子的电荷状态，进而影响它们与固定相的结合。此外，还可以通过改变固定相的类型，如使用不同基质或带有不同电荷的树脂，来获得更好的分离效果。
离子交换柱层析广泛应用于生物化学、药物学、环境分析等领域。例如，在生物化学中，它可以用于蛋白质和核酸的纯化；在药物学中，它有助于新药化合物的筛选；在环境分析中，则可用于检测水和土壤中的重金属离子。通过精确控制离子交换柱的条件，可以实现对复杂混合物中微量成分的有效分离。
❺ DEAE-纤维素使用方法
DEAE—纤维素的活化过程如下：首先，取适量的IgDEAE32或52，比如1克，放入5毫升的量筒中，加入蒸馏水并浸泡过夜。待DEAE完全溶胀后，观察其体积。根据需要的层析柱柱床体积，计算所需的DEAE用量，然后同样用蒸馏水浸泡过夜，期间需更换几次水，以去除细小颗粒。使用布氏漏斗抽干后，用0.5毫升/升的NaOH溶液浸泡至少1小时，再抽干。接着，用无离子水漂洗，直至pH值达到约8（通过pH试纸检查）。然后，再用0.5毫升/升的HCl溶液浸泡1小时，去除酸性物质，用无离子水清洗至pH值约为6。在本实验中，DEAE—纤维素应在使用前用0.0175摩尔/升的pH6.7磷酸盐缓冲液浸泡，以达到平衡状态。
DEAE—纤维素的再生是一个循环过程，虽然并非每次都需用酸和碱进行反复处理。通常，只需进行“转型”处理即可。比如，如果希望阳离子交换剂带有NH+4，可以使用NH4OH溶液浸泡；若要阴离子交换剂带上Cl—，则使用NaCl溶液处理。在本实验中，DEAE—纤维素在经过酸碱处理后，只需用0.0175摩尔/升的pH6.7磷酸盐缓冲液浸泡，以HPO4替换DEAE中的OH—，即可完成转型。在再生过程中，由于DEAE—纤维素常会吸附大量杂蛋白，因此，再生时应首先用0.5毫升/升的NaOH溶液浸洗，冲洗至pH约8，然后进行转型，即可再次使用。