强阳离子交换柱填料

㈠ 一篇看懂液相色谱柱的分类、选择及维护！

液相色谱柱的分类及选择与维护是进行高效液相色谱分析的关键。

一、液相色谱柱的分类

按照色谱固定相基质，液相色谱柱可以分为以下几类：

1. 硅胶基质

1.1 反相色谱柱：使用以硅胶为基础，表面键合有弱极性官能团的键合相。流动相通常为水、缓冲液与甲醇、已腈等混合物。样品流出顺序为极性强的先被冲出，极性弱的后被冲出。

1.2 正相色谱：使用硅胶作为固定相，其他具有极性官能团的键合相填料。流动相极性相对较低。分离顺序依据样品中各组分极性大小。

1.3 离子交换色谱柱：使用磺化交联强阴/阳离子键合硅胶色谱柱，如强阴离子色谱柱(SAX)和强阳离子交换色谱柱(SCX)。

2. 聚合物基质

聚合物调料如聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，优点是在PH值为1～14均可使用，对大分子物质分离有效。

3. 其他无机填料

如石墨化碳、氧化铝等，具有特殊性质，适用于特定用途。

二、色谱柱的选择

液相色谱柱的选择主要依据分析物的性质，如硅胶基质填料用于小分子量物质，聚合物填料用于大分子物质。

三、色谱柱的维护

1. 色谱柱的平衡：使用甲醇或乙腈冲洗色谱柱，确保分析样品流动相与冲洗溶剂互溶。

2. 色谱柱的再生：长期使用后柱效下降，可进行再生处理。

3. 色谱柱的维护：使用预柱保护分析柱，避免流动相组成及极性的剧烈变化，使用前经脱气和过滤处理。

㈡ 多肽的合成过程

具体合成由下列几个循环组成： 分析HPLC使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。HPLC分两类：离子交换和反相。 离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反电荷。 分离是一种电荷相互作用，通过可变PH， 离子强度， 或两者洗脱出多肽，通常， 先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性PH中带正电来分离。
反相HPLC条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱， 如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这种链长度为G4-G8碳原子。 由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的， 高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。 然而，总体实践中， 这两类柱互变无多少显著差别，别类载体由碳水化合物构成， 比如苯基。
典型的操作常由两绶冲剂组成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用径向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)
大量各种缓冲剂含许多不同试剂，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸钠/氨，TFA/TEA，磷酸钠或钾，异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂，但要注意一点：硅反相柱料不能长时间暴露于高pH，甚至微碱pH， 因为这样会破坏柱子。
不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如Arg, Lys ）的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。

㈢ 多肽固相合成法HPLC分析和纯化

在多肽固相合成后的HPLC分析和纯化过程中，关键的步骤是使用高压液相色谱技术。这种技术依赖于柱子和泵系统，它们能够承受高压，允许使用微粒（3-10微米）作为填料。这样，几分钟内，多肽就能得到高度的分析效果。

HPLC主要分为离子交换和反相两种类型。离子交换HPLC基于多肽和固相之间的电荷相互作用，柱子在特定pH范围内带有特定电荷，与带有相反电荷的多肽或混合物发生分离。通过调整pH值、离子强度或两者，多肽可以通过洗脱步骤从柱子上分离，通常先用低离子强度溶液，然后逐渐增加强度。一个例子是使用强阳离子交换柱，如sulfoethylaspartimide在酸性环境中进行分离。

反相HPLC则以疏水作用为基础，多肽通过疏水性连接到柱子上，用降低离子强度的洗脱剂（如增加洗脱剂的疏水性）进行分离。常见的柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，链长通常在G4-G8个碳原子。分离过程中，疏水性越大，使用短链柱子对大疏水肽更有效。尽管如此，离子交换和反相柱在实际应用中区别不大，其他载体如碳水化合物（如苯基）也被广泛使用。

操作过程中，常用的流动相由0.1% TFA-H2O和80% acetonitrile（0.1% TFA-H2O稀释的acetonitrile）组成，以线性梯度混合，速度每分钟0.5%到1.0%。常见的柱子规格为4.6×250mm（3-10μm）和22×250mm（10μm），径向填柱则为8×100（3-10μm）和25×250mm（10μm）。

缓冲剂的选择多种多样，包含如heptafluorobutyric酸、0.1%磷酸、稀He formic酸（pH 2-4）、10-100mM NH4HCO3、醋酸钠/氨、TFA/TEA、磷酸钠或钾、异戊酚等。通过组合这些试剂，形成不同的缓冲剂，但需要注意的是，硅反相柱材料不能长时间暴露于高pH或微碱性环境，以免柱子受损。

在Fmoc-氨基酸的制备和侧链保护阶段，Fmoc基团在二氧六环溶液（含有NaHCO3或Na2CO3）中形成，理想的侧链保护基在碱性条件下稳定，酸性条件下可脱除。

多肽固相合成法——英文解释： solid phase peptide synthesis 简写为SPPS。在肽合成的技术方面取得了突破性进展的是R.Bruce Merrifield，他设计了一种肽的合成途径并定名为固相合成途径。由于R.BruceMerrifield在肽合成方面的贡献，1984年获得了诺贝尔奖。

㈣ 怎样查找usp药典上使用的色谱柱

根据下面色谱柱系列的编号，就可以在USP药典上查到需要的色谱柱：
L1：十八烷基键合多孔硅胶或无机氧化物微粒固定相，简称ODS柱 L2：30～50mm表面多孔薄壳型键合十八烷基固定相，简称C18柱 L3：多孔硅胶微粒，即一般的硅胶柱 L4：30～50mm表面多孔薄壳型硅胶柱 L5：30～50mm表面多孔薄壳型氧化铝柱 L6：30～50mm实心微球表面包覆磺化碳氟聚合物，强阳离子交换柱 L7：全多孔硅胶微粒键合C8官能团固定相，简称C8柱 L8：全多孔硅胶微粒键合非交联NH2固定相，简称NH2柱 L9：强酸性阳离子交换基团键合全多孔不规则形硅胶固定相，即SCX柱 L10：多孔硅胶微球键合氰基固定相（CN），简称CN柱 L11：键合苯基多孔硅胶微球固定相，简称苯基柱 L12：无孔微球键合季胺功能团的强阴离子交换柱 L13：三乙基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相（C1），简称C1柱 L14：10mm硅胶化学键合强碱性季铵盐阴离子交换固定相，简称SAX柱 L15：已基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相，简称C6柱 L16：二甲基硅烷化学键合全多孔硅胶微粒固定相 C2柱 L17：氢型磺化交联苯乙烯-二乙烯基苯共聚物,强阳离子交换柱 L18：3～10mm全多孔硅胶化学键合胺基（NH2）和氰基（CN）柱 L19：钙型磺化交联苯乙烯－二乙烯基苯共聚物，强阳离子交换柱 L20：二羟基丙烷基化学键合多孔硅胶微球固定相（Diol），简称二醇基柱 L21：刚性苯乙烯－二乙烯基苯共聚物微球填料柱L22：带有磺酸基团的多孔苯乙烯阳离子交换柱 L23：带有季胺基团的聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯酸酯多孔离子交换柱 L24：表面含有大量羟基的半刚性聚乙烯醇亲水凝胶柱 L25：聚甲基丙烯酸酯树脂交联羟基醚（表面含有残余羧基功能团）树脂。能分离分子量100～5000MW范围的水溶性中性、阳离子型及阴离子型聚合物（用聚氧乙烯测定）的固定相 L26：丁基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相，即C4柱 L27：30～50mm的全多孔硅胶微粒 L28：多功能载体，100Å的高纯硅胶加以氨基键合以及C8反相键合的官能团 L29:氧化铝,反相键合,含碳量低,氧化铝基聚丁二稀小球,5mm，孔径80Å L30:全多孔硅胶键合乙基硅烷固定相

太多了，没有一一列举了～～