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蛋白质超滤膜浓缩仪器

发布时间:2025-05-25 18:02:54

1. 分离22KD的蛋白质选择什么型号的超滤

如果是分离22kDa及分子量远小于它的小蛋白,推荐用millipore的超滤管,截留分子量10kDa,体积1-15ml都有。主要还是看你的目的蛋白是集中于浓缩液部分,还是滤液部分,从而选择合适的截留分子量

2. 超滤膜孔径多少微米 超滤膜能过滤哪些物质

超滤膜孔径范围在0.001-0.02微米之间,具体孔径根据品牌、型号、材质有所不同。超滤膜通过孔径大小有效过滤水中的胶体、杂质、水锈、细菌、藻类、病毒及大分子有机物。尽管孔径不是最小,但超滤膜在保留水中对人体有益的矿物质方面表现出色,而反渗透膜则会过滤掉这些有益物质。

超滤膜的截留分子量通常介于1000至500000Dal之间。孔径大小直接影响其过滤性能,孔径越小,截留能力越强,成本也越高。实际应用中需考虑水质和成本,不同应用领域对孔径选择也有要求。例如,浓缩蛋白质时需选择比该蛋白质孔径更大的超滤膜。

超滤膜能有效去除水中的二价离子,对一价离子的去除率可达95~99%,对低分子量有机物的去除率可达100%。超滤系统能除去99%以上的矿物质、细菌、病毒、热原及细菌内毒素。

超滤膜广泛应用于饮用水、矿泉水净化;工业废水与生活污水净化和回收;发酵、酶制剂和制药工业中的浓缩、纯化与澄清;生物制品、医药制品和食品工业中的分离、浓缩、纯化;血液处理、废水处理和超纯水制备中的终端处理;工业用水中分离细菌、热源、胶体、悬浮杂质及大分子有机物。

超滤膜作为反渗透预处理和超纯水终端处理,在纯水与超纯水制备工艺中发挥重要作用。在工业用水中,超滤膜用于分离细菌、热源、胶体、悬浮杂质及大分子有机物。

3. 超滤机是什么 超滤机和反渗透机有什么区别

随着人们对于生活质量提升的逐渐重视,人们在购买各种家用产品的时候也会重视对于生活质量提升有没有帮助,净水器是现在很多的家庭都会购买的一种设备,因为现在的水资源污染是比较严重的,即使是经过的净化的水源,流通到人们家里的时候还是会含有一定程度的杂质,因此人们就需要净化水源,超滤机是净水器的一种,今天我们就具体介绍超滤机。

超滤机是什么

超滤(Ultra-filtration,UF)是一种能将溶液进行净化和分离的膜分离技术。超滤膜系统是以超滤膜丝为过滤介质,膜两侧的压力差为驱动力的溶液分离装置。超滤膜只允许溶液中的溶剂(如水分子)、无机盐及小分子有机物透过,而将溶液中的悬浮物、胶体、蛋白质和微生物等大分子物质截留,从而达到净化或分离的目的。超滤技术在反渗透预处理、饮用水处理、中水回用等领域发挥着越来越重要的作用.超滤技术在酒类和饮料的除菌与除浊,药品的除热原以及食品及制药物浓缩过程中均起到关键作用.

超滤机和反渗透机有什么区别

过滤精度:反渗透技术和超滤膜技术最大的区别就在于过滤精度。反渗透是携基指在膜的进水一侧施加比溶液渗透压高的外界压力,只允许溶液中水和某些组分选择性透过,其他物质不能透过而被截留在膜表面的过程,简称为RO,其过滤精度为0.0001微米。而超滤以压力差为动力,分离分子量范围为几百至几百万,膜孔径约0.001~0.2微米的物理筛分过程,简称为UF,其过滤精度为野或0.001微米。

功能上的不同:RO机可以将杂质、铁锈、泥沙、胶体、细菌、病毒,以及对人体有害的放射性粒子、有机物、荧光物、农药去除掉,还可以将水碱和重金属去除掉;但同时也会去除掉对人体有益的微量元素。而超滤机能够过滤掉自来水中的杂质、铁锈、部分细菌、病毒、胶体等,过滤后的水保留对人体有益的微量元素。

在今天的文章中,我们主要介绍的是和超滤机有关的内容,大家可以看出我们将超滤机的知识分为了两个部分去进行展开,首先我们介绍了什么是超滤机,虽然超滤机是净水器的一种,但是辩脊谨依然有用户朋友对于超滤机不是很了解,所以我们就简单介绍了超滤机的基本信息,然后我们开始分析超滤机与反渗透机有什么区别,这两个方面的区别希望大家都可以仔细去阅读。

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4. 超滤离心管如何选择以及使用方法

超滤离心管在蛋白质、DNA和生物分子的浓缩、纯化和脱盐过程中被广泛应用。选择和使用超滤离心管时,需要理解其与微滤的区别。

微滤(Microfiltration)利用微孔膜介质去除溶液中尺寸为0.1 μm至10.0 μm的颗粒或生物体,广泛应用于生物制药预过滤和除菌过滤。微滤在细胞实验中常用于样品和培养基灭菌,以及从细胞裂解物中去除完整细胞和碎片,确保下游应用结果准确性。

超滤(Ultrafiltration)通过压力或浓度梯度使料液通过半透膜进行分离,能截留尺寸范围为1-1000kDa的分子,并允许盐和水等小分子通过。它广泛应用于蛋白质溶液的分离和纯化,以及核酸样品制备,如分子克隆和质粒纯化。与沉淀法相比,超滤更为温和,避免生物大分子失活。

超滤离心管是一种利用离心力驱动溶液通过超滤膜进行快速浓缩、渗滤和缓冲液置换的装置,由盖子、过滤装置和离心管组成。通过选择适合的膜孔径,可进行除热源、澄清和分离大分子污染物,或浓缩和脱盐目标分子。

选择超滤离心管时,需考虑样品起始量及超滤膜的截留分子量(MWCO)。样品体积决定离心管尺寸,而截留分子量则需根据目标大分子的分子量选择,通常选择比目标分子小2-3倍的膜。

使用超滤离心管涉及准备、加样、离心和回收步骤。准备阶段需冲洗设备以消除甘油残留,然后在离心前加入适量纯水或缓冲溶液。离心前确保离心机转子平衡,以保持稳定。回收时,从过滤装置或离心管中轻轻提取样品,注意不要接触或损坏超滤膜。

遵循上述步骤,正确选择和使用超滤离心管,将有效实现蛋白质、DNA和生物分子的高效浓缩、纯化和脱盐,为科学研究和工业应用提供可靠支持。

5. 如何进行蛋白超滤设备选型

如何进行蛋白超滤设备选型?在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。
一、 吸附层析
1、 吸附柱层析
吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。
2、 薄层层析
薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相,以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层,然后按纸层析操作进行展层。
3、 聚酰胺薄膜层析
聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时,展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程,就能导致分离物质达到分离目的。
二、 离子交换层析
离子交换层析是在以离子交换剂为固定相,液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行,或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。`
三、 凝胶过滤
凝胶过滤又叫分子筛层析,其原因是凝胶具有网状结构,小分子物质能进入其内部,而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。
四、 亲和层析
亲和层析的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似,每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中,特异的废物(S')才能和一定的酶(E)结合,产生复合物(E-S')一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力,并产生复合物。而亲和层析与酶一底物反应不同的是,前者进行反应时,配体(类似底物)是固相存在;后者进行反应时,底物呈液相存在。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体L(对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等)以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M(如活化琼脂糖等)上,制成亲和吸附剂M-L,或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此,当把围相载体装人小层析柱(几毫升到几十毫升床体积)后,让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力,以及结构互补效应等作用吸附到固相载体上,而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来,并形成了第一个层析峰。然后,恰当地改变起始缓冲 液的PH值、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子,即可把物质S从固相载体上解离下来,并形成了第M个层析峰(见图6-2)。显然,通过这一操作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体具有亲和力(其大小有差异)时,采用选择性缓冲液进行洗脱,也可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后,可以重复使用。
上面介绍的亲和层析法亦称特异性配体亲和层析法。除此之外,还有一种亲和层析法叫通用性配体亲和层析法。这两种亲和层析法相比,前者的配体一般为复杂的生命大分子物质(如抗体、受体和酶的类似底物等),它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单的小分子物质(如金属、染料,以及氨基酸等),它成本低廉、具有较高的吸附容量,通过改善吸附和脱附条件可提高层析的分辨率。
五、 聚焦层析
聚焦层析也是一种柱层析。因此,它和另外的层析一样,照例具有流动相,其流动相为 多缓冲剂,固定相为多缓冲交换剂。
聚焦层析原理可以从PH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐述。
1、PH梯度溶液的形成
在离子交换层析中,PH梯度溶液的形成是靠梯度混合仪实现的。例如,当使用阴离子 剂进行层析时,制备PH由高到低呈线性变化的梯度溶液的方法是,在梯度仪的混合室(这层析柱者)中装高PH溶液,而在另一室装低PH极限溶液,然后打开层析柱的下端出口,让洗脱液连续不断地流过柱体。这时从柱的上部到下部溶液的PH值是由高到低变化的。而在聚焦层析中,当洗脱液流进多缓冲交换剂时,由于交换剂带具有缓冲能力的电荷基团,故PH梯度溶液可以自动形成。例如,当柱中装阴离子交换剂PBE94(作固定相)时,先用起始缓冲液(配方见表了一2)平衡到PHg,再用含PH6的多缓冲剂物质(作流动相)的淋洗液通过柱体,这时多缓冲剂中酸性最强的组分与碱性阴离子交换对结合发生中和作用。随着淋洗液的不断加人,住内每点的PH值从高到低逐渐下降。照此处理J段时间,从层析柱顶部到底部就形成了PH6~9的梯度。聚焦层析柱中的PH梯度溶液是在淋洗过程中自动形成的,但是随着淋洗的进行,PH梯度会逐渐向下迁移,从底部流出液的PH却由9逐渐降至6,并最后恒定于此值,这时层析柱的PH梯度也就消失了。
2.蛋白质的行为
蛋白质所带电荷取决于它的等电点(PI)和层析柱中的PH值。当柱中的PH低于蛋白质的PI时,蛋白质带正电荷,且不与阴离于交换剂结合。而随着洗脱剂向前移动,固定相中的PH值是随着淋洗时间延长而变化的。当蛋白质移动至环境PH高于其PI时,蛋白质由带正电行变为带负电荷,并与阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过,蛋白质周围的环境PH 再次低于PI时,它又带正电荷,并从交换剂解吸下来。随着洗脱液向柱底的迁移,上述过程将反复进行,于是各种蛋白质就在各自的等电点被洗下来,从而达到了分离的目的。
不同蛋白质具有不同的等电点,它们在被离子交换剂结合以前,移动之距离是不同的,洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。

供静脉注射的25%人胎盘血白蛋白(即胎白)通常是用硫酸铵盐析法、透析脱盐、真空浓缩等工艺制备的,该工艺流程硫酸铵耗量大,能源消耗多,操作时间长,透析过程易产生污染。改用超滤工艺后,平均回收率可达97.18%;吸附损失为1.69%;透过损失为1.23%;截留率为98.77%。大幅度提高了白蛋白的产量和质量,每年可节省硫酸铵6.2吨,自来水16000吨。目前国外生产超滤膜和超滤装置最有名的厂家是美国的Milipore公司和德国的Sartorius公司。
随着现代生物技术的发展, 通过基因工程生产蛋白质药物在治疗人类面临的重大疾病如癌症等方面展示出巨大的潜力. 为满足生物技术产品工业化生产的需要, 开发高通量、低成本、高效的分离纯化方法已引起人们的高度关注. 超滤技术由于具有通量高, 操作条件温和, 易于放大等特点, 特别适合生物活性大分子的分离. 在生物技术领域, 超滤技术目前已广泛应用于细胞收集分离、除菌消毒、缓冲液置换、分级( fract ionatio n) 、脱盐及浓缩[ 1] . 近年来越来越多的研究表明, 通过选择适当的膜或膜表面改性,以及对分离过程进行优化, 充分利用和调控膜—蛋白质以及蛋白质—蛋白质之间的静电相互作用, 可以实现分子量相近的两种蛋白质的高选择性超滤分离[2- 7] .

为克服常规蛋白质超滤分离过程优化中存在的实验蛋白质消耗多、工作量大、费时以及费用高等缺点, 我们相继开发了脉冲进样技术( Pulsed sampleinject ion technique ) [8]和参数连续变化超滤技术( Parameter scanning ultraf ilt ration) [9]. 并以此为基础, 结合载体相超滤技术( Carrier phase ult rafil—t rat ion) [10]进一步提出了一种蛋白质超滤分离快速优化新方法[11], 实现了人血浆白蛋白—免疫球蛋白[12]、人源化单克隆抗体( A lemtuzumab) 单体— 二聚体[13]的超滤分离过程快速优化和高选择性分离,并在膜的筛选及其适用性快速评估方面展现出巨大的潜力. 该方法的主要特征是与AKTA Prime 系统联用, 采用脉动进样技术显著减少了蛋白质的用量;而利用双缓冲体系( 类似梯度洗脱) 的参数连续变化超滤技术, 在pH 或离子强度连续变化的情况下考查pH 或离子强度对蛋白质透过率或截留率的影响, 进一步缩短了实验时间, 降低了蛋白质的用量,极大地减少了实验量, 加快了过程优化进程; 另外,载体相超滤技术的应用则可保证超滤分离自始至终在设定的条件下进行, 从而最大限度地保证超滤过程的稳定性.
2012-02-25
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6. 超滤设备是什么样的

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