氨基酸阴离子交换树脂洗脱顺序

① Lys Arg Asp Glu Tyr Ala的混合物在高pH条件下加到阴离子交换树脂上，用连续递减pH值缓冲溶液洗脱

洗脱先后顺来序：Arg Lys Tyr Ala Glu Asp
先分源组：1 Arg Lys是碱性氨基酸 PH=7 正电荷
2 Tyr ALa是中性氨基酸 PH=7 中性为主
3 Glu Asp是酸性氨基酸 PH=7 酸性
由于是交换树脂层析，氨基酸的与树脂的亲和力主要取决于他们之间的亲和力，其次是氨基酸与树脂之间的疏水相互作用。由于缓冲液先是碱性，所以氨基酸与树脂的亲和力为：酸性氨基酸》中性氨基酸>碱性氨基酸（阴离子树脂的疏水基团带正电，负电被交换了），洗脱的顺序就是：碱性 中性 酸性
考虑氨基酸与树脂的疏水作用：Arg的R基团是三个亚甲基+一个亚氨基，Lys是四个亚甲基，很明显，Arg的疏水作用要弱，与树脂吸引力不够强，最先被洗下来。其他的两组楼主自己分析R基团的疏水性

② 离子交换层析中流出物质顺序是什么

若用离子交换层析分离物质，以蛋白质为例，离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。

由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。

反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。

(2)氨基酸阴离子交换树脂洗脱顺序扩展阅读：

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。

溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理，使最终转为-OH-型或盐型交换剂；对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，使最终转为-H-型交换剂。

梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。

③ 氨基酸洗脱顺序的问题

洗脱顺序就是亲和力从小到大的排序。氨基酸与树脂间的亲和力，主要取决于他们之间的静电吸引，其次是氨基酸侧链和树脂基质聚苯乙烯之间的疏水相互作用。在PH为3.0是，洗脱顺序为酸性氨基酸，中性氨基酸，碱性氨基酸。Asp为酸性氨基酸，Gly也为酸性氨基酸，Leu为中性氨基酸，Thr也是中性氨基酸但是含羟基能与基质形成氢键，Lys为碱性氨基酸，所以洗脱顺序为Asp Gly Leu Thr Lys。王镜岩生化上153页

④ 利用阳离子交换层析分离下列每一对氨基酸，哪一种氨基酸首先被PH7缓冲液从离子交换柱上洗脱出来。

氨基酸与粒子抄交换树脂的吸附力袭大小取决于它们之间的电荷引力和疏水作用。第一组中甘氨酸和亮氨酸均为非极性氨基酸，但是相比之下甘氨酸的极性要更强，也就是疏水性更弱，它会先被洗脱。第二组中，丝氨酸是中性条件下不带电荷的极性氨基酸，丙氨酸是非极性氨基酸，所以丝氨酸疏水性差，先被洗脱。

⑤ 离子交换层析可用于哪些种类蛋白质的分离

离子交换层析是利用蛋白质在不同PH带不同种电荷的方法，利用离子交换的方法分离专蛋白的。
离子交换属内的介质一般是树脂，阳离子交换型的，使用前树脂先用碱处理成钠型，将氨基酸混合液（pH=2-3)上柱，pH=2-3时，氨基酸主要以阳离子形式存在，与树脂上的钠离子发生交换而被“挂”在树脂上，再用洗脱剂洗脱。不同的氨基酸（带的电荷不同）与树脂的亲和力不同，要将其分离洗脱下来，需要降低它们之间的亲和力，方法是逐步提高洗脱剂的pH和盐浓度，这样各种氨基酸将以不同的速度被洗脱下来，反之亦然。

不同反荷离子与树脂亲和力是不同的，其强弱关系为阳性竞争离子：Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+ 阴性竞争离子：I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好，可用另一种亲和力强的离子代替之，等电点＞7选择阳离子交换树脂，等电点＜7选择阴离子交换树脂。

⑥ 离子交换树脂的洗脱顺序和什么有关

和树脂的亲和力有关，主要是静电吸引，其次是疏水作用。

树脂的交联度，即树脂基体版聚合时所用二权乙烯苯的百分数，对树脂的性质有很大影响。通常，交联度高的树脂聚合得比较紧密，坚牢而耐用，密度较高，内部空隙较少，对离子的选择性较强。

而交联度低的树脂孔隙较大，脱色能力较强，反应速度较快，但在工作时的膨胀性较大，机械强度稍低，比较脆而易碎。

(6)氨基酸阴离子交换树脂洗脱顺序扩展阅读：

大孔树脂内部的孔隙又多又大，表面积很大，活性中心多，离子扩散速度快，离子交换速度也快很多，约比凝胶型树脂快约十倍。使用时的作用快、效率高，所需处理时间缩短。

大孔树脂还有多种优点耐溶胀，不易碎裂，耐氧化，耐磨损，耐热及耐温度变化，以及对有机大分子物质较易吸附和交换，因而抗污染力强，并较容易再生。

交联度高的树脂对离子的选择性较强，大孔结构树脂的选择性小于凝胶型树脂。这种选择性在稀溶液中较大，在浓溶液中较小。

⑦ 求问怎么用离子交换树脂层析分离混合氨基酸

离子交换树脂作为一种合成高聚物，不溶于水，能吸水膨胀。高聚物分子由能电离的极性基团及非极性的树脂组成。极性基团上的离子能与溶液中的离子起交换作用，而非极性的树脂本身物性不变。通常离子交换树脂根据所带基团可分为强酸（＝R＝SO3H）、弱（＝COOH）、强碱（＝N+＝R：）和弱碱（＝NH2＝NHR＝NR2）。离子交换树脂适用于分离小分子物质，如氨基酸、腺苷、腺苷酸等。然而，对于生物大分子如蛋白质，则不太适宜，因为它们不能扩散到树脂的链状结构中。因此，如果需要分离生物大分子，可以选择多糖聚合物如纤维素、葡聚糖为载体的离子交换剂。

本次实验利用磺酸阳离子交换树脂（Dowex 50）分离混合氨基酸，包括酸性氨基酸（天冬氨酸）、中性氨基酸（丙氨酸）和碱性氨基酸（赖氨酸）。在特定的pH条件下，这些氨基酸解离程度不同，通过调整脱液pH或离子强度可以实现分离。实验中所用到的材料包括层析柱、恒流泵、梯度混合器、试管及试管架、紫外分光光度计、2mol/L HCl、2mol/L NaOH、0.1mol/L HCl、0.1mol/L NaOH、pH4.2的柠檬酸缓冲液、pH5的醋酸缓冲液、0.2％中性茚三酮溶液以及氨基酸混合液。

树脂处理步骤为：首先将树脂置于100ml烧杯中，加入25ml 12mol/L HCl搅拌2小时，倾弃酸液后用蒸馏水洗涤至中性。随后，再加入25ml 12mol/L NaOH搅拌2小时，倾弃碱液后用蒸馏水洗涤至中性。最后，将树脂悬浮于50ml pH4.2柠檬酸缓冲液中备用。

装柱步骤包括：取直径0.8cm～1.2cm、长度10cm～12cm的层析柱，底部垫玻璃棉或海绵圆垫，自顶部注入经处理的树脂悬浮液。关闭层柱出口，待树脂沉降后，放出过量溶液，再加入一些树脂，使树脂沉积至8cm～10cm高度即可。于柱子顶部继续加入pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤，确保流出液pH为4.2，关闭柱子出口，保持液面高出树脂表面1cm左右。

加样、洗脱及洗脱液收集步骤为：打开山口使缓冲液流出，待液面几乎平齐树脂表面时关闭出口。用长滴管将15滴氨基酸混合液直接加到树脂顶部，打开出口使其缓慢流入柱内。当液面刚平树脂表面时，加入0.1mol/L HCl 3ml，以10滴/分钟～12滴/分钟的流速洗脱，收集洗脱液，每管20滴，逐管收存。当HCl液面刚平树脂表面时，用1ml pH4.2柠檬酸缓冲液冲洗柱壁一次，接着用2ml pH4.2柠檬酸缓冲液洗脱，保持流速10滴/分钟～12滴/分钟并注意勿使树脂表面干燥。

在收集洗脱液的过程中，逐管用茚三酮检验氨基酸的洗脱情况，方法是：于各管洗脱液中加10滴pH5醋酸缓冲液和10滴中性茚三酮溶液，沸水浴中煮10分钟，如溶液呈紫蓝色，表示已有氨基酸洗脱下来。显色的深度可代表洗脱的氨基酸浓度，可比色测。在用pH4.2柠檬酸缓冲液把第二个氨基酸洗脱出来之后，再收集两管茚三酮反应阴性部分，关闭层析柱出口，将树脂顶部剩余的pH4.2柠檬酸缓冲液移去。于树脂顶部加入2ml 0.1mol/L NaOH，打开出口使其缓慢流入柱内，按上面步骤续用0.1mol/L NaOH洗脱并逐管收集，注意保持流速10滴/分钟～12滴/分钟，每管20滴。做洗脱液中氨基酸检验，在第三个氨基酸用0.1mol/L NaOH洗脱下来以后，再继续收集两管茚三酮反应阴性部分。

最后，以洗脱液管号为横坐标，洗脱液各管光密度（以水作空白，在570nm波长读取吸光度）或颜色深浅（以-，±，+，++．．．表示）为纵坐标作图，即可画出一条洗脱曲线。

实验注意事项包括：保持流速10滴/分钟～12滴/分钟，并注意勿使树脂表面干燥。在装柱时必须防止气泡、分层及柱子液面在树脂表面以下等现象发生。

⑧ 阳离子交换树脂洗脱氨基酸顺序

原因：氨基酸与阳离子交换树脂的静电引力大小依次是 碱性氨基酸＞中性氨基酸＞酸性氨基酸，所以洗脱的顺序就
先是酸性氨基酸（负电荷最多），然后是中性氨基酸，最后是碱性氨基酸（带正电荷最多）。
详见《生物化学》王镜岩 第三版 上册 153页

⑨ 用强酸性阳离子交换树脂分离氨基酸混合物时，为什么要逐步提高洗脱液的pH和离子强度

用强酸性阳离子交换树脂分离氨基酸混合物时，氨基酸都是以阳离子的形式版，被吸附到树脂权的离子交换位上。
由于氨基酸是两性化合物，既有酸性，也有碱性，因此氨基酸都有等电点，pH低于等电点时，呈阳离子状态，pH高于等电点时，呈阴离子状态。氨基酸被强酸性离子交换树脂吸附后，都是以阳离子形式存在的，转变为阴离子就会被洗脱。通过逐渐提高洗脱液的pH，利用氨基酸不同的等电点，使不同的氨基酸逐渐从阳离子改变为阴离子，而被洗脱出来，从而达到分离效果。