1. 粗多糖的提取中，用了6次的EDAE凝胶层析柱流速过慢，怎样去活化
EDAE是哪种凝胶柱？
是不是弱阴离子交换柱DEAE？
如果是DEAE的话给你一点清洗的参考
一，在位清洗
1， 用2M的NaCl至少清洗2个柱体积。
2， 用1M的NaOH 至少清洗4个柱体积。
3， 用2M的NaCl至少清洗2个柱体积。
4， 用至少2个柱体积的蒸馏水润洗层析柱。
二，去除沉淀的蛋白质：
1， 注入一个柱体积的胃蛋白酶（1mg/ml in 0.5M NaCl,0.1M acetic acid）。室温过夜或37°作用1小时。
2， 用至少2个柱体积的蒸馏水润洗层析柱。
3， 用至少4个柱体积的储存缓冲液冲洗。
也可以选用如下操作
1， 用6M盐酸胍冲洗2个柱体积。
2， 立即用pH7-8的缓冲液冲洗至少5个柱体积。
3， 用至少2个柱体积的蒸馏水润洗分离柱。
4， 用至少4个柱体积的储存缓冲液冲洗。
三，去除脂类，疏水结合蛋白质或脂蛋白：
1， 如需彻底除去此类污染物，可使用有机溶剂或去污剂。
2， 在使用有机溶剂前，用蒸馏水冲洗填料至少4个柱体积以避免盐类沉淀于层析柱中。
3， 在使用有机溶剂或溶液时，需要减小流速以避免分离柱超压。
4， 清洗溶液最大浓度如下，100%的异丙醇，100%的甲醇，100%的乙腈，2M的氢氧化钠，75%的乙酸，100%的乙醇，离子性或非离子型去污剂。
5， 避免使用阴离子去污剂。
2. 多糖分离纯化—离子交换层析和柱层析
多糖，与蛋白质一样，对生命过程起着关键作用，其复杂结构直接决定了其特性和功能。要深入理解多糖，分离纯化步骤至关重要。其中，离子交换层析和凝胶层析是常用的手段。
离子交换层析在多糖纯化中应用广泛，其根据多糖特性，选择合适的阳离子、阴离子或硼砂交换剂，如DEAE cellulose、DEAE Sephadex（葡聚糖）、DEAE Sepharose（琼脂糖）系列。以DEAE cellulose-52为例，它作为阴离子交换柱，其填料二乙氨乙基纤维素带有正电荷，能有效分离中性和酸性多糖，如果胶，通过盐溶液洗脱，中性糖先被洗脱，阴离子多糖随后。通过检测洗脱液糖含量，形成洗脱曲线，实现不同多糖的分离。
相比之下，凝胶层析则侧重于分子量的分离。其原理是利用分子筛特性，大分子先流出，小分子后流出，如Sephadex G系列填料，如G-15、G-25用于寡糖分离，G-100和G-200则适用于大分子多糖。通过观察洗脱曲线，可以精确收集不同分子量的样品。
3. 多糖的纯化方法与哪些
多糖纯化：
a、分部沉淀法：根据各种多糖在不同浓度的低级醇或丙酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，经反复溶解与沉淀后，直到测得的物理常数恒定（最常用的是比旋光度测定或电泳检查）。这种方法适合于分离各种溶解度相差较大的多糖。为了多糖的稳定，常在pH7进行，唯酸性多糖在pH7时－COOH是以－COO` 离子形式存在的，需在pH2－4进行分离，为了防止苷键水解，操作宜迅速。此外也可将多糖制成各种衍生物如甲醚化物、乙酰化物等，然后将多糖衍生物溶于醇中，最后加入乙醚等极性更小的溶剂进行分级沉淀分离。
b、盐析法：在天然产物的水提液中，加入无机盐，使其达到一定浓度或饱和，促使有效成分在水中溶解度降低沉淀析出，与其它水溶性较大的杂质分离。常做盐析的无机盐的有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
c、季铵盐沉淀法：季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于酸性多糖的分离。通常季胺盐及其氢氧化物并不与中性多糖产生沉淀，但当溶液的PH增高或加入硼砂缓冲液使糖的酸度增高时，也会与中性多糖形成沉淀。常用的季铵盐有十六烷基三甲胺的溴化物（CTAB）及其氢氧化物（cetyl trimethyl ammonium hydroxide，CTA－OH）和十六烷基吡啶（cetylpyridinm hydroride，CP－OH）。CTAB或CP－OH的浓度一般为1％－10％（W/V）的多糖溶液中，酸性多糖可从中性多糖中沉淀出来，所以控制季铵盐的浓度也能分离各种不同的酸性多糖。值得注意的是酸性多糖混合物溶液的PH要小于9，而且不能有硼砂存在，否则中性多糖将会被沉淀出来
d、柱层析：
纤维素柱层析：纤维素柱层析对多糖的分离既有吸附色谱的性质，又具有分配色谱的性质，所用的洗脱剂是水和不同浓度乙醇的水溶液，流出柱的先后顺序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最后出柱，与分级沉淀法正好相反。
纤维素阴离子交换柱层析：最常见的交换剂为DEAE－纤维素（硼酸型或碱型），洗脱剂可用不同浓度的碱溶液、硼砂溶液、盐溶液等。此方法目前最为常用。它一方面可纯化多糖，另一方面还适于分离各种酸性多糖、中性多糖和粘多糖。
凝胶柱层析：凝胶柱层析可将多糖按分子大小和形状不同分离开来，常用的凝胶有葡聚糖凝胶（sephadex G）、琼脂糖凝胶（sepharose bio－gel A）、聚丙烯酰胺凝胶（bio－gel P）等，常用的洗脱剂是各种浓度的盐溶液及缓冲液，但它们的离子强度最好不低于0.02。出柱的顺序是大分子的先出柱，小分子的后出柱。由于糖分子与凝胶间的相互作用，洗脱液的体积与蛋白质的分离有很大的差别。在多糖分离时，通常是用孔隙小的凝胶如sephadex G－25、G－50等先脱去多糖中的无机盐及小分子化合物，然后再用孔隙大的凝胶sephadex G－200等进行分离。凝胶柱层析法不适合于粘多糖的分离。
4. 关于液相色谱法纯化蛋白质
凝胶过滤色谱法：来 分辨率较高源，但是上样量仅为柱体积的1%，而且对流速也有严格的限制
离子交换色谱法：根据目的蛋白质表面所含有的氨基酸残基带有的净电荷分离蛋白质，但是分辨率没有凝胶过滤高
亲和层析法： 根据生物分子的特异性分离目的蛋白，特异性很高，但是配件容易丢失 适合含有特异性的标签的或者抗体
疏水色谱：根据疏水性来分离蛋白质，缺点是有的蛋白质在高盐中溶解度降低，所以应用范围受到限制，适合蛋白质表面含有较多疏水性氨基酸残基的疏水性蛋白质
5. 离子交换层析具体操作
离子交换层析操作详解
1. 预处理和装柱是离子交换层析的关键步骤。首先，对于离子交换纤维素，需要流水冲洗去除碎屑，以确保均匀度。若产品已溶胀，可跳过这步，但需确保其成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂通常采用“碱-酸-碱”处理，转变成-OH-或盐型，阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，变为-H-型。装柱前，平衡至所需的pH和离子强度，并减压排除气泡。为了防止颗粒分层，装柱时需适当加压，确保柱床紧实，以提高分辨率。装好后，需用起始缓冲液淋洗，直至达到平衡状态方可使用。
2. 加样与洗脱阶段，样品应与起始缓冲液保持相同的pH和离子强度，选择的pH值应在交换剂与结合物相反电荷的范围内，同时离子强度要低，可通过透析、凝胶过滤或稀释来调整。不溶物需预先除去。合适的上样量是关键，一般不超过柱子的负荷能力，上样量通常为交换剂总量的1%-5%。洗脱样品时，可通过改变pH或离子强度，或采用阶段洗脱或连续梯度洗脱法，后者通过控制两个容器中缓冲液浓度的梯度变化来达到最佳分离效果。在洗脱过程中，需确保洗脱液体积充足，梯度上限足够高且上升速度适中，以防止目的物过早或过晚解吸。
3. 洗脱后的分析，以5-10毫升/管收集洗脱液，通过检测方法（如生物活性测定或免疫学测定）确定目的物位置，然后进行回收。对于离子交换剂的再生，如纤维素可用NaCl和NaOH溶液处理，脂溶性物质则需非离子型去污剂或乙醇清洗。保存时，需添加防腐剂，阴离子交换剂通常使用氯已定，阳离子交换剂则使用乙基硫柳汞，有些产品可添加叠氮钠。
离子交换层析操作需严格把控各个步骤，确保样品处理得当，洗脱过程有效，以实现理想的分离效果。
离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。1
6. 疫苗提纯分离用离子交换层析工艺介绍
阴离子交换层析去除乙脑疫苗制品中残留DNA，其特点在于将乙脑疫苗浓缩液经过凝胶过滤层析初步纯化后，利用阴离子交换层析，DNA被牢牢吸附在色可赛思离子交换介质上，而乙脑病毒蛋白则直接穿透，有效去除宿主DNA，解决乙脑疫苗行业面临的问题。
2010版《中国药典》提高人用狂犬病疫苗中蛋白含量标准，需确保纯化后的病毒液总蛋白不超过80μg/剂，牛血清蛋白残留低于50ng/剂，宿主细胞蛋白残留不超过24μg/剂。生物药企需优化纯化工艺，利用凝胶层析与色可赛思离子交换层析相结合，以提高疫苗纯化效果。层析柱的选择、上样体积、速度、浓度与抗原收集点，均影响疫苗纯化效率。结合两种层析柱，可优化疫苗纯化，确保质量与效率。
采用离子交换法去除流脑多糖疫苗粗糖中的杂蛋白，结合高效阴离子交换色谱与电化学检测，快速检测Hib结合疫苗中残余溴化氰与CDAP，为疫苗生产提供可靠检测方法。同时，HPAEC-PAD检测法测定脑膜炎球菌多糖含量，验证方法的专属性、精密度与准确性，与传统方法比较，结果一致，可用于疫苗成品多糖含量检测。
百日咳疫苗的分离纯化通过ELISA与还原性SDS-PAGE方法研究脲的影响，加入2mol/L脲作为稳定剂，显著提高色可赛思离子交换层析和凝胶过滤层析效果。
利用Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化的离子交换层析条件，对粗纯液进行IEC，优化纯化步骤，提高疫苗质量。
重组幽门螺杆菌过氧化氢酶脂质体疫苗的制备中，阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化Kat重组蛋白，薄膜分散法制备疫苗，通过透射电镜测定粒径，为疫苗提供有效免疫保护。
离子交换层析纯化人轮状病毒灭活疫苗，通过色可赛思离子交换柱层析、透析脱盐、过滤除菌灭活等步骤，制备出总蛋白去除率为99.69%、保持良好抗原性和免疫原性的疫苗。
狂犬病疫苗中去除残余DNA，优化培养条件、选择合适孔径的超滤膜包、增加阴离子交换柱工艺，以降低Vero细胞DNA残留量，保证疫苗质量。
利用大肠杆菌表达系统制备HPV-6类病毒颗粒，研究其免疫原性，通过纯化、体外组装、形态检测与中和实验，评价诱导的抗HPV-6/11中和抗体水平，简便高效制备具有免疫原性的HPV-6疫苗。