离子交换色谱法等度梯度洗脱

A. 等度洗脱和梯度洗脱的区别

等度洗脱和梯度洗脱改变与不改变的配比不同。

等度洗脱意思是：

等度洗脱是科学名称，是在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。与梯度洗脱对应。液相色谱操作中，等度洗脱即在样品组分的分析周期中用梯度洗脱还是等度洗脱，主要看杂质的情况。

同一物质有梯度洗脱和等度洗脱两种条件时，梯度洗脱的认可度较高。杂质与杂质、主峰、溶剂峰的分离度一定要好（不好的话就要用梯度洗脱）。杂质和主成分极性相差很大，杂质一定要全部都能洗脱出来（有时等度情况下冲两三个小时杂质也冲出不来，就必须考虑用梯度）。

B. 脱盐过程中,物质洗脱出来的顺序如何,为什么

顺序：使用高效液相色谱仪进行分析时，常用两种洗脱方式，先用等度洗脱，再用梯度洗脱。

使用梯度洗脱时，也会使干扰分离的强保留杂质组分在较短的时间内从柱中清楚，使色谱柱保持干净状态，以进行下一次的分析。梯度洗脱一般是指流动相的组成随分析时间的延长呈现线性变化，即线性梯度洗脱，可用于反相和正相高效液相色谱仪及离子对色谱法。

原理和分类

液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。

C. 色谱法的洗脱有哪两种方式

使用高效液相色谱仪进行分析时，常用两种洗脱方式，一种为等度洗脱，另一种为梯度洗脱。

用等度洗脱进行色谱分离时，由不同溶剂构成的流动相的组成，如流动相的极性、离子强度、pH值等，在分离的全过程中皆保持不变。用梯度洗脱进行色谱分离时，在洗脱过程中含2种或两种以上不同极性溶剂的流动相组成会连续或间歇地改变，其间可调节流动相的极性，改善样品中各组分间的分离度。

使用梯度洗脱时，也会使干扰分离的强保留杂质组分在较短的时间内从柱中清楚，使色谱柱保持干净状态，以进行下一次的分析。梯度洗脱一般是指流动相的组成随分析时间的延长呈现线性变化，即线性梯度洗脱，可用于反相和正相高效液相色谱仪及离子对色谱法。

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注意事项：

1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。

2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。