过滤除菌实验室

『壹』 实验室灭菌消毒怎么做更彻底

一、消毒和灭菌的区别

1、消毒（disinfection in hospital）：杀灭或消除医院环境中媒介物上污染的病原微生物的过程.

2、灭菌(sterilization)：杀灭或去除外环境中媒介物携带的一切微生物的过程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括细菌芽胞和真菌孢子.灭菌是个绝对的概念,灭菌后物品必须是完全无菌的.即灭菌保证水平为106.

二、高温灭菌法

高温灭菌法是利用高温使微生物的蛋白质及酶发生凝固或变性而死亡，是应用最广泛且有效的灭菌方法。主要用于器械、容器、试剂等灭菌。

（一）高压蒸气灭菌法

图为加热接种环。（图片来源： 《接种、分离纯化和培养技术》）

注意事项：

1、酒精灯的灯芯要平整.

2、添加酒精时,不超过酒精灯容积的2/3；酒精不少于1/4.

3、绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精,以免失火.

4、绝对禁止用酒精灯引燃另一只酒精灯.

5、用完酒精灯,必须用灯帽盖灭,不可用嘴去吹.

6、不要碰倒酒精灯,万一洒出的酒精在桌上燃烧起来,应立即用湿布扑盖.

『贰』 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌.高压蒸汽灭菌.紫外线灭菌.过滤除菌四种各有那些优缺点

1.高压蒸汽灭菌

为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。压力和温度之间的关系见表9－1。

高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下（121.6℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。

进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。

可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。

2.干热灭菌

微生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。

干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。

3.间歇灭菌

各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。

间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。

间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。

4.紫外线灭菌

紫外线杀菌力最强的是波长2650～2660Å的部分。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。无菌室和缓冲间的照射时间为20～50分钟（视房间大小而定），接种箱照射10～15分钟即可。

为了加强紫外线灭菌的效果，在照射前，可在无菌室、缓冲间或接种箱内喷洒5%石炭酸，以使空气中附着有微生物的尘埃降落，同时也可以杀死一部分微生物。无菌室的工作台的台面和椅子，可用2～3%的来苏儿擦洗。然后再照射紫外线。由于紫外线对人体有伤害作用，所以人不要直视正在照射的紫外线灯，也不要在照射情况下进行工作。

灭菌后，为了检验紫外线的灭菌效果，可以在无菌室、缓冲间或接种箱内放一套盛有培养基的培养皿，将皿盖打开5～10分钟，盖好后，放入温箱中培养。如果只有一、二个菌落，可认为灭菌效果良好。如杂菌丛生。则需延长照射时间或同时加强其它灭菌措施。

『叁』 请问制备培养基时如何过滤除菌

1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌

某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。

『肆』 实验室消毒方法有哪几种

根据不同的消毒对象采用不同的消毒方法，通常以采用机械清扫和冲洗与使用各种化学消毒剂相配合。
（1）大门
入口处设消毒槽。消毒药使用2%氢氧化钠（每周换一次）或新鲜生石灰。主要消毒车辆的轮胎。
（2）工人
工作人员在进入各生产车间前，必须在更衣室内脱衣，洗澡，换上经过消毒的工作衣裤，工作帽和胶靴，洗手后经消毒池进入车间。工作服、工作帽每周洗涤并高压消毒一次。
（3）猪舍
采用“全进全出”饲养方式的猪场，在引进猪群前，对空猪舍按以下程序彻底消毒：清除猪舍内的粪尿及垫料，运出作无害化处理，用高压水彻底冲洗顶棚、墙壁、门窗、地面及其他一切设施，直至洗涤液清澈透明为止。水洗干后关闭门窗，用福尔马林熏蒸消毒12～24小时，然后开窗通风24小时。消毒后空闲10～14天再使用。
（4）饲养管理用具
饲槽、饮水器及其他用具需每天洗刷，定期用1%～3%来苏儿或0.1%新洁尔灭消毒；垫料每周更换一次，并应事先消毒。