阳离子交换色谱洗脱顺序

1. 阳离子交换层析怎样判断中性氨基酸的洗脱顺序。详细一点，谢谢了。比如亮氨酸，色氨酸，甘氨酸。

首先得知道待分离氨基酸的等电点,洗脱液也分为几种,一种洗脱液的pH对应一种氨基酸的pI,用某一洗脱液洗脱时,对应的氨基酸不带电,然后就被洗脱下来了

2. sephadex lh20柱色谱洗脱顺序

sephadex lh20柱色谱洗脱顺序：色谱柱填料极性较弱，那么被分析的物质就是极性大的先出峰；如果用的是正向色谱柱（CN、NH2），色谱柱填料极性较强，那么被分析的物质就是极性小的先出峰。

Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇/水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿/甲醇最为常见，先用50%氯仿/甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100%甲醇冲柱。

洗脱层析法

户Y是色谱法根据实验技术进行分类中的一种。该法是先将需分离的混合物尽量浓缩，使体积缩小，引人层析柱顶端，然后用纯悴的溶剂洗脱，洗脱溶剂可以是原来溶解混合物的溶剂，也可选用其他的溶剂二此法能使各组分分层且分离完全，甚至层与层间隔着一层济剂、此法是应用的实验技术。

以上内容参考：网络-洗脱层析法

3. 离子交换层析中流出物质顺序是什么

若用离子交换层析分离物质，以蛋白质为例，离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。

由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。

反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。

(3)阳离子交换色谱洗脱顺序扩展阅读：

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。

溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理，使最终转为-OH-型或盐型交换剂；对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，使最终转为-H-型交换剂。

梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。

4. 离子交换层析的具体操作

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理，使最终转为-OH-型或盐型交换剂；对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，使最终转为-H-型交换剂。
洗涤好的纤维素使用前必须平衡至所需的pH和离子强度。已平衡的交换剂在装柱前还要减压除气泡。为了避免颗粒大小不等的交换剂在自然沉降时分层，要适当加压装柱，同时使柱床压紧，减少死体积，有利于分辨率的提高。
柱子装好后再用起始缓冲液淋洗，直至达到充分平衡方可使用。 加样：
层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度，所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的范围，同时要注意离子强度应低，可用透析、凝胶过滤或稀释法达此目的。样品中的不溶物应在透析后或凝胶过滤前，以离心法除去。为了达到满意的分离效果，上样量要适当，不要超过柱的负荷能力。柱的负荷能力可用交换容量来推算，通常上样量为交换剂交换总量的1%-5%。 已结合样品的离子交换前，可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方法将结合物洗脱，也可同时改变pH与离子强度。为了使复杂的组份分离完全，往往需要逐步改变pH或离子强度，其中最简单的方法是阶段洗脱法，即分次将不同pH与离子强度的溶液加入，使不同成分逐步洗脱。由于这种洗脱pH与离子强度的变化大，使许多洗脱体积相近的成分同时洗脱，纯度较差，不适宜精细的分离。最好的洗脱方法是连续梯度洗脱，洗脱装置见图16-6.两个容器放于同一水平上，第一个容器盛有一定pH的缓冲液，第二个容器含有高盐浓度或不同pH的缓冲液，两容器连通，第一个容器与柱相连，当溶液由第一容器流入柱时，第二容器中的溶液就会自动来补充，经搅拌与第一容器的溶液相混合，这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。第一容器中任何时间的浓度都可用下式进行计算：
C=C2-(C2-C1)(1-V)A2/A1
式中A1、A2分别代表两容器的截面积：C1、C2分别表示容器中溶液的浓度；V为流出体积对总体积之比。当A1=A2时为线性梯度，当A1>A2时为凹形梯度，A1>A2时为凸形梯度。
洗脱时应满足以下要求：
①洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不至于太拥挤。
②梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。
③梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。
洗脱馏份的分析按一定体积（5-10ml/管）收集的洗脱液可逐管进行测定，得到层析图谱。依实验目的的不同，可采用适宜的检测方法（生物活性测定、免疫学测定等）确定图谱中目的物的位置，并回收目的物。
离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有强吸附物则可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生，也可用乙醇洗涤，其顺序为：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002%氯已定（洗必泰），阳离子交换剂可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些产品建议用0.02%叠氮钠。

5. 液相色谱法中应该怎么解释组分的洗脱顺序

使用高效液相色谱仪进行分析时，常用两种洗脱方式，一种为等度洗脱，另一种为梯度洗脱。

用等度洗脱进行色谱分离时，由不同溶剂构成的流动相的组成，如流动相的极性、离子强度、pH值等，在分离的全过程中皆保持不变。用梯度洗脱进行色谱分离时，在洗脱过程中含2种或两种以上不同极性溶剂的流动相组成会连续或间歇地改变，其间可调节流动相的极性，改善样品中各组分间的分离度。

使用梯度洗脱时，也会使干扰分离的强保留杂质组分在较短的时间内从柱中清楚，使色谱柱保持干净状态，以进行下一次的分析。梯度洗脱一般是指流动相的组成随分析时间的延长呈现线性变化，即线性梯度洗脱，可用于反相和正相高效液相色谱仪及离子对色谱法。

(5)阳离子交换色谱洗脱顺序扩展阅读：

注意事项：

1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。

2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。

6. 离子色谱法主要应用何种物质的分析，如何解释三个离子的出峰次序结果

离子交换色谱主要用于有机和无机阴、阳离子的分离，由于各种离子对离子交换树脂的亲和力不同，样品通过分离柱时被分离成不连续的谱带，依次被淋洗液洗脱。

7. 蛋白质水解产物阳离子交换柱层析时的洗脱顺序

pI 10.76的那个应该带正电荷。阳离子交换柱本身带负电荷。

8. 各类色谱洗脱规律，简明扼要

HPLC高效液相色谱按 固定相与流动相的极性相对大小分为正相和反相色谱
正相版中流动相极性小于固定相权，极性组分被滞留，出峰顺序：非极性->弱极性->极性
反相色谱流动相极性大于固定相，固定相常用C8-C18，非极性组分最后流出，出峰顺序：极性->弱极性->非极性，反相色谱因其与组分无强烈作用，组分不会长时间滞留污染柱子，且反相色谱用水做底溶剂，掺入其他弱极性、非极性溶剂如乙腈等有机物改变流动相极性达到分离目的，水的紫外吸收遏制波长低，不会干扰检测，且水易得便宜
还有要注意的点：大量物质中分离杂质应先让含量小的杂质先流出，如果让量大的组分先流出会拖尾导致杂质分离不纯
GC气相色谱没什么说的，原理类似，主要就是保留时间、峰高峰宽、校正因子
毛细管电泳，一般毛细管壁修饰成带负电，电渗流速率大于电泳速率，正负离子、中性分子均向阴极移动，检出顺序：正离子->中性分子->负离子

9. 离子交换层析可以用于哪些蛋白质的分离

可以分为阳离子交换层析和阴离子交换层析。
阳离子交换层析，使用含回有酸性基团的阳离子答交换树脂等，可以结合待层析液中的阳离子，因而洗脱顺序是，正电荷越多结合越紧密洗脱越晚。
阴离子交换层析则使用含有碱性基团的交换树脂，结合溶液中的含有阴离子基团的分子，因而负电荷越多结合越紧密，洗脱越晚。