流动相滤头溶剂过滤器

『壹』 液相色谱仪是如何进行保养和维护的

转载：《分析测试网络网》
液相色谱仪的维护与保养

液相色谱仪的维护与保养

液相色谱仪是属于易学难用的仪器，特别讲究“正确使用”和经验。

液相工作者接触最多的是流动相，也就是流动相，是造成液相色谱各种问题的最主要源头。

液相色谱仪最常见的故障一是堵，二是漏。下面就这两点分别展开讨论。(注：流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例)

“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。

“堵”的原因之一：配制流动相时细菌污染。

首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。

新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。这里有两种方式推荐：

(1)最理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。唯一的缺点就是价格不菲。

(2) 成箱购买市售品牌纯净水，如500ml 一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可，也很方便。每次成本2 元左右。

这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最后有一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。原因有以下三点：

(1)流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。

(2)流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。

(3)流动相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。

(4)在实际工作未发现流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6 年时间没有做过流动相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下我们的柱寿命是比较长的。

“堵”的原因之二：使用流动相时的细菌污染。

指的是：流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。

举最简单的例子：50%的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。

从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。

但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌(很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速)，一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。

所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相的一组。从实际实验效果来说，我建议用10%的甲醇水代替纯水溶液(以前我做过不同比例甲醇水的细菌总数实验，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全杀菌了)，这样可以有效排除长细菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。就算是在配制流动相时会计算得麻烦一些，但是一次麻烦，终身受益。

"堵”的原因之三：不适当操作。

常见问题的有以下几种：

(1)在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。

(2)样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成阻塞不畅。

(3)在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成了死堵，压力快速升高超过警戒值。

(4)在使用金属管路作出废液管时，应当注意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且实验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。

“堵”的原因讲了不少，现介绍查堵的方法。

在发生“堵”的现象后，就需要找出原因，主要是什么位置发生了“堵”。注意，绝大多数情况下，整个系统只会有一个地方发生堵塞。

查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，如果某一个部件(柱子除外)装上和拆下时的压力差别很大，可发展变化判断。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来判断。

下面再谈一下“漏”的问题。“漏”则分两种：漏液和漏气。

一. 漏液

液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。如果某个部件发生了漏液，那就是故障所在。

漏液的原因分两种：

(1) 接触硬件不当。

在更换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的，甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区别。当然选用PEEK接头是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手拧就能保证不漏液。

即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不当也会漏液，一种不当就是力度把握不好，拧得太紧或太松;另一种不当就是致命的错误：滑丝，这是往往是动手能力不太强，螺丝钉很少拧的工作者犯的错误，滑丝的后果不仅是漏液那么简单，常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来实验，那就是拧螺丝。

(2) 使用仪器不当

如果是输送泵漏液，最常见的原因就是在活塞位置缓冲盐析出造成。

析出的原因有两个，一是使用缓冲盐溶液时突然加入了纯甲醇而析出，这种错误很容易避免，这是尽量不要用纯的甲醇和纯水。只要互相有10%的比例就不会出现这个问题。另一原因是在用缓冲盐溶液(不论甲醇含量有多少)作流动相时，实验结束后没有换甲醇水冲洗，使得微渗的流动相干燥形成晶体造成。

不过，输送泵漏液并不是非得马上修不可，冲洗干净并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。

检测器漏液是个很麻烦的事，一般都是吸收池的问题，更换的费用相当高。但是并不是说一定要马上更换，还可以从实际实验效果看能否凑合使用。

二. 漏气

漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部的气体进入液相色谱仪的流路内部形成了气泡。下面按流路的方向逐个部件分析产生气泡的原因和相应解决方法。

(1) 过滤头

抽液时，在流路管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有没有脱气(需要特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，起码可以减少脱气机的工作压力并提高工作效率)，如果已经脱了气，则要注意过滤头的污染也会造成这种现象。处理方法比较简单，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。

(2) 透明流路管

指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管路。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中全是空气而操作人员却浑然不知，以致输送泵工作了半天才发现流动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因(我们做液相一定要有“微渗”的概念)。如果长时间不用，这一段管路的液体会彻底干掉，而充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出的。

这种情况对于输送泵很危险，因为泵从设计来说是输送液体而不是气体，内部的液体对于活塞来说起到了机油的作用，如果活塞杆上还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。

对于这种情况，要突出“预防为主”如：，液相色谱使用人员要相对固定和稳定，工作中合理搭配资源，每台机一周击至少作一次实验，如长期不用起码每周要冲流动相2 小时。养成良好的工作习惯很重要。

如果不慎出现了这种问题怎么办?我的建议是用外力使管路中充满液体。具体如下：

1、 找到流路管进入输送泵的接头。

2、 拧下来。

3、 用一干净的洗耳球的尖端对准管路的平整切口。

4、 吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5 厘米左右时停止该动作。

5、快速把接头拧回输送泵上(这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常现象)。

6、 开机，打开排液阀门，启动输送泵。

7、等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常工作。

(3) 输送泵和柱子

这些部分进了气泡一般不怕，冲掉就行。

(4) 检测器

应该说，整个流路中只要有一个气泡都会在检测器上得到强烈的信号反映，检测器内部的气泡一般都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情况。

如果检测器里有残留气泡，会有特征明显的表现形式，就是在走基线时会时不时间隔出现直上直下信号很大的信号峰。这时先看普通流量能否冲走，如果冲不走，那唯一的办法就是拆柱，把检测器直接连到输送泵的出口，加大几倍流量冲洗，则肯定能冲走气泡。

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『贰』 高效液相色谱的流动相要经过过滤，那标准品和待测样品需不需要过滤呢我是用大鼠脑里的纹状体测的。

当然要过滤，尤其是一些溶解性不好的样品~

样品用针式过滤器就可以。我一般就使用0.22um针头过滤器

生物制品配置时尽量用薄膜滤过的溶剂，最后注入进样瓶前用针头过滤器过滤.我做中药检测时一般提取后滤纸过滤，进样前用0.45nm的过滤下就好了。

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『叁』 溶剂过滤器打不开

可以试试滴些硅油,再用电吹风加热
也可以用丙酮浸泡,
还可以用小木榔头轻轻敲动,

『肆』 液相色谱所用流动相使用时应注意哪些问题

1、流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。

2、做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。

3、流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的。

4、用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置或更长时间。

5、在更换两种互不相容的流动相时，中间要用异丙醇溶液清洗过渡。例如：先用甲醇水做流动相，然后再用正己烷做流动相时，一定要先用异丙醇溶液冲洗甲醇水，然后用正己烷冲洗异丙醇，反之也是一样。在更换流动相时还要考虑色谱柱是否更换。

『伍』 waters2695液相报错，流动相吸空了，怎么处理

1.换上足量新的流动相或超纯水；2.拧开排气阀，开大流速进行排气，如果泵不能吸液，可以拧开出口单向阀的出口螺丝，直至有液体流出再拧紧（建议用器把溶剂过滤头到比例阀入口那段管路的气泡抽光，免得柱塞杆长时间干跑而损坏柱塞杆）；3.把柱子换成双通，不接流通池，拧紧排气阀，开大流速把系统管路里的气泡冲走；4.调到2的流速，接上流通池，冲洗下流通池；5.接上柱子，用纯甲醇以1的流速冲洗色谱柱，直至基线稳定，确认柱子没气泡为止。

『陆』 高效液相(HPLC)流动相走干了怎么办

1、Dry Prime，呵呵，既然流动相都干了，那流路大概也干了

进行dryprime的操作步骤如下
1.轻轻振摇溶剂瓶中的过滤头以除去可能留存的气泡.
2.在灌注排液阀出口插上一支注射器,然后打开排液阀(反时针旋转半
圈).不要将注射器固定在排液阀上,而要用手将其贴紧阀的出口.
3.选择DryPrime,然后按OK.
4.按屏幕上你想灌注的相应的流路(A,B,C,或D)键.
5.用一只手握住注射器,同时用另一只手抽注射器的杆,使针筒中产生
一段让流路中空气逸出所必需的真空.
6.重复此操作直至排液口有溶剂流出.这可能需要几分钟时间,特别是
当在线脱气机也同时在灌注时,时间会更长.
7.重复上述操作将4个溶剂通道全都充满溶剂,然后关闭排液阀.
2、WetPrime，看来柱塞杆那个宝贝没有问题，接着给我干活，呵呵！
进行dryprime的操作步骤如下
1轻轻振摇溶剂瓶中的过滤头以除去可能留存的气泡.
2.输入用于prime的流速和持续时间(所用的溶剂组成
是在Status屏幕中输入的),然后按OK.溶剂管理
系统开始运行.Prime的持续时间取决于安装在
2690上的选件.
选件流速(mL/min)持续时间(min)
真空脱气机7.56
氦气脱气7.52
3.到达指定时间后流速停止,2690回到Idle状态.
3、走流动相看看，一开始，压力低的不正常，我想，大概是有气体所致，柱子里面应该没有干，因为没有流动相了，空气不可能将色谱柱里面的液体压出去，先用小流速看看，然后逐渐加大流速，呵呵，压力上来了，看来一切正常啊！
4、回头检查了一下泵的密封，没问题！
5、晚上终于联系上工程师，说了一下自己的处理过程，哈哈。VERYGOOD，没有问题！！

『柒』 为什么高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤，脱气

用于高效液相色谱的流动相必须事先除气，否则容易在系统中逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线的稳定性，甚至使其无法检测。

噪音增加，基线不稳定，突然跳跃。此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。溶解气体也会引起溶剂ph值的变化，从而导致分离或分析结果的误差。

常用的除气方法有加热沸腾、抽真空、超声波、吹氦等。

高效液相色谱（hplc）是色谱的一个重要分支。以液体为流动相，高压输液系统，将不同极性的单溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入固定相色谱柱。分离柱中的组分后，用检测器检测。实现了样品的分析。

(7)流动相滤头溶剂过滤器扩展阅读：

液相色谱-质谱联用（LC-MS）可增加额外的分析能力，准确识别和量化细胞和组织裂解物、血液、血浆、尿液和口服液等复杂样品基质中的微量化合物。

流动相和固定相都是液体。流动相与固定相应不相容（极性不同，避免固定液流失），界面清晰。当样品进入色谱柱时，溶质分布在两相之间。达到平衡后，遵循高效液相色谱的计算公式。

公式中cs溶质在固定相的浓度、cm溶质在流动相的浓度、vs固定相的体积和vm流动相的体积。llpc与gpc有相似之处，即分离顺序取决于k值较大的组分的保留值，但也存在差异。在gpc中，流量对k的影响较小，而llpc流量对k的影响较大。

『捌』 使用液相色谱进行物质的定性定量分析时，使用流动相时有哪些注意事项

流动相溶剂使用的注意事项 1.
流动相溶剂应选择HPLC的溶剂或依此为标准的溶剂。流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。 在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。为此，建议常用0.45μm滤膜过滤。流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。 2.
流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。 3.
做HPLC流动相的试剂应用HPLC级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。 4.
流动相的pH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的 5.
用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置过夜或更长时间。 6.
若需要使用含盐的流动相，使用前请务必过滤。并且使用该含盐流动相前，色谱柱需先用低比例有机相（有机相含量应不低于10%）的溶液冲洗，以免缓冲盐析出。流动相若为蒸馏水或含盐的缓冲液，建议现用现配，以免流动相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

『玖』 高效液相色谱仪器的结构及其各部分作用

1、溶剂输送系统；储液器，用来贮存数量足够、符合要求的流动相。配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵内。脱气器，脱气的目的是为了防止流动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器，从而引起噪声，不能正常检测。

输液泵，将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。梯度洗脱装置，是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。

2、进样系统；进样器：是将样品送入色谱柱的装置，进样方式可以分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器装样。

3、分离系统；色谱柱：对样品进行分离，是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响到分离的效果。

4、检测系统；检测器：将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号，被数据系统接收，得到样品分离的色谱图。

5、数据处理和记录系统；对色谱数据进行处理，并参与HPLC仪器的自动控制。

(9)流动相滤头溶剂过滤器扩展阅读

与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。

HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。

『拾』 求急：高效液相色谱溶剂过滤器因过滤甲醇时放了水相滤膜被堵塞了，怎么解决

高效液相色谱仪如图1所示，是由溶液贮器、高压泵、进样系统、色谱分离柱、真空抽滤既过滤颗粒也脱了气泡，非常②应逐渐改变溶剂的组成，特别是